劉海霞

(中國(guó)核工業(yè)北京四O一醫(yī)院, 北京 102413)

·臨床研究·

產(chǎn)黑色素類桿菌與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性

劉海霞

(中國(guó)核工業(yè)北京四O一醫(yī)院, 北京 102413)

目的: 探討產(chǎn)黑色素類桿菌(BPB)與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性。方法：采用PCR技術(shù)檢測(cè)30個(gè)慢性根尖周炎患牙感染根管內(nèi)5種BPB的定植情況，單因素分析5種BPB與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性。結(jié)果：牙齦卟啉單胞菌(Pg)、牙髓卟啉單胞菌(Pe)與慢性根尖周炎的疼痛、腫脹呈正相關(guān)(OR>2，P<0.05),與叩痛、竇道無相關(guān)性；變黑普氏菌(Pn)與慢性根尖周炎的叩痛、腫脹呈正相關(guān)(OR>2，P<0.05)，與疼痛、竇道無相關(guān)性；中間普氏菌(Pi)和產(chǎn)黑普氏菌(Pm)與慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、竇道和腫脹均無相關(guān)性。結(jié)論：Pg、Pe與慢性根尖周炎的疼痛和腫脹密切相關(guān)，Pn與叩痛和腫脹密切相關(guān)。尚未發(fā)現(xiàn)Pi和Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性。

產(chǎn)黑色素類桿菌; 慢性根尖周炎

[DOI] 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.09.007

[Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(9):541]

慢性根尖周炎是根管內(nèi)以厭氧菌為主的混合感染。盡管100多年前就已證實(shí)感染根管內(nèi)存在細(xì)菌，但到目前為止，有關(guān)細(xì)菌引起根尖周炎臨床癥狀的發(fā)病機(jī)制仍存在分歧。Siqueira[1]、Foschi F[2-3]等認(rèn)為感染根管內(nèi)細(xì)菌與根尖周炎的部分臨床癥狀如疼痛、叩痛、竇道及腫脹密切相關(guān)。亦有學(xué)者[4-5]認(rèn)為, 細(xì)菌與慢性根尖周炎的臨床癥狀并無相關(guān)性。本課題組前期采用分子生物學(xué)技術(shù)(PCR)檢測(cè)了產(chǎn)黑色素類桿菌(BPB)在慢性根尖周炎的定植情況[6]，本研究在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析5種BPB與慢性根尖周炎臨床癥狀之間的相關(guān)性。

1 臨床資料和方法

1.1 臨床資料

臨床隨機(jī)選擇慢性根尖周炎患者25例(30個(gè)牙)，其中男15例，女10例，年齡18～73歲(表1)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患牙為單根管；②無全身性疾病，近3個(gè)月未服用抗生素；③知情同意。

表1 慢性根尖周炎患牙臨床癥狀分布 (牙)

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

參照謝曉莉等[6]的方法，橡皮障隔濕，術(shù)區(qū)常規(guī)消毒，去除釉質(zhì)或原有充填材料，再次消毒窩洞，揭髓頂。#15 K銼探查根管，測(cè)定工作長(zhǎng)度。連續(xù)3根無菌紙尖插入根管內(nèi)(距工作長(zhǎng)度短1 mm處)，停留30 s，吸取根管滲出液(若根管內(nèi)干燥，則注入無菌生理鹽水，充分?jǐn)U銼根管壁)。將采集的所有紙尖放入盛有1 mL(pH 7.2)磷酸鹽緩沖液的無菌Eppendorf管中，-20 ℃低溫保存。

1.2.2 PCR擴(kuò)增

引物合成、PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析見文獻(xiàn)[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用比數(shù)比(odds ratio，OR)進(jìn)行單因素分析,根據(jù)Socransky SS等[7]和Sundqvist G[8]的方法，當(dāng)OR>2時(shí),兩者間為正相關(guān)；當(dāng)OR<0.5時(shí)，兩者間為負(fù)相關(guān)。根據(jù)OR 95%可信區(qū)間(confidence interval，CI)，在正相關(guān)關(guān)系時(shí)OR下限<1或在負(fù)相關(guān)關(guān)系時(shí)OR上限>1時(shí)，OR統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 電泳結(jié)果[6]

所有臨床標(biāo)本通用引物的PCR檢測(cè)均出現(xiàn)1 500 bp的擴(kuò)增帶，說明感染根管內(nèi)存在細(xì)菌，標(biāo)本中可能存在的其他感染物質(zhì)和根管內(nèi)的成分未對(duì)PCR產(chǎn)生明顯的影響。

細(xì)菌菌種特異性引物的PCR檢測(cè)出現(xiàn)了與預(yù)計(jì)大小一致的單一擴(kuò)增帶，條帶清晰，未出現(xiàn)非特異擴(kuò)增帶，說明特異性引物PCR的擴(kuò)增條件適宜。

2.2 產(chǎn)黑色素類桿菌與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性

2.2.1Pg、Pe與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性

Pg、Pe在疼痛、腫脹組檢出率高于無癥狀組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；相關(guān)性分析示，Pg、Pe與慢性根尖周炎的疼痛、腫脹呈正相關(guān)(OR>2);而叩痛和竇道組檢出率差異不明顯(P>0.05)，尚不能認(rèn)為Pg、Pe與慢性根尖周炎的叩痛和竇道形成相關(guān)(表2～3)。

表2 Pg與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性(n, %)

*表示相關(guān)性顯著, 括號(hào)內(nèi)為檢出率

表3 Pe與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性(n, %)

* 表示相關(guān)性顯著, 括號(hào)內(nèi)為檢出率

2.2.2Pn與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性

Pn在疼痛、叩痛、竇道、腫脹組檢出率較無癥狀組高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；相關(guān)性分析顯示，Pn與慢性根尖周炎的叩痛、腫脹呈正相關(guān)(OR>2)(表4)。

表4 Pn與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性(n, %)

* 表示相關(guān)性顯著, 括號(hào)內(nèi)為檢出率

2.2.3Pi、Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性

Pi、Pm在疼痛、叩痛、竇道、腫脹組檢出率與無癥狀組無顯著差異(P>0.05)；相關(guān)性分析顯示，Pi、Pm與慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、竇道及腫脹亦無相關(guān)性(表5～6)。

表5 Pi與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性(n, %)

括號(hào)內(nèi)為檢出率

表6 Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關(guān)性(n, %)

括號(hào)內(nèi)為檢出率

3 討論

疼痛、腫脹及竇道往往是慢性根尖周炎患者就醫(yī)的原因之一。鑒于感染根管內(nèi)環(huán)境的特殊性及菌種的復(fù)雜性，有關(guān)根尖周炎臨床癥狀的發(fā)病機(jī)制目前還不是十分清楚。細(xì)菌作為根尖周炎的主要致病因素，其自身的內(nèi)毒素、莢膜、外膜蛋白、蛋白水解酶等毒力因子及其代謝產(chǎn)物在根尖周炎臨床癥狀的發(fā)生機(jī)制中均發(fā)揮重要作用。致病菌的分離鑒定無疑為臨床癥狀的發(fā)生機(jī)制提供了理論依據(jù)。

本研究中的30個(gè)慢性根尖周炎患牙，17個(gè)伴有疼痛，Pg、Pe、Pn的檢出率相對(duì)較高。進(jìn)一步分析產(chǎn)黑色素類桿菌和疼痛的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Pg和Pe與根尖周炎的疼痛密切相關(guān)，但尚不能認(rèn)為Pn、Pi、Pm的存在引起根尖周炎的疼痛。除Pn外其余4種產(chǎn)黑色素類桿菌均與叩痛無相關(guān)性，表明Pn與慢性根尖周炎的叩痛關(guān)系密切。結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和臨床表現(xiàn)，進(jìn)一步推測(cè)叩痛形成的機(jī)制主要是細(xì)菌的毒力因子及其代謝產(chǎn)物而引起根周膜充血、水腫、滲出物淤積，牙周間隙內(nèi)壓力升高，臨床上患牙表現(xiàn)為不適、發(fā)木、浮出腫脹感，叩診檢查增加根尖周組織的負(fù)擔(dān)而引起疼痛。

根尖周炎的患牙牙髓壞死，尖周局部組織化膿，牙槽骨破壞，膿液沿破壞的牙槽骨流至牙齦處，致牙齦破壞形成竇道。本研究中9個(gè)存在竇道的患牙，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與產(chǎn)黑色素類桿菌無明顯相關(guān)性(P>0.05)，尚不能認(rèn)為產(chǎn)黑色素類桿菌就是竇道形成的原因。

腫脹是根尖周炎較為嚴(yán)重的一種臨床表現(xiàn)，近年，有關(guān)BPB和慢性根尖周炎腫脹的研究較多。本結(jié)果表明，Pg、Pe、Pn與腫脹呈正相關(guān)。這與Siqueira JF等[1]的研究結(jié)果一致，產(chǎn)黑色素類桿菌在根尖膿腫根管內(nèi)的檢出率達(dá)80%，其中Pe的檢出率為70%，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在膿腫患牙根管內(nèi)Pg和Pe常在同一根管同時(shí)檢出。

目前有關(guān)致病菌和根尖周炎臨床癥狀相關(guān)性的研究存在分歧，Siqueira JF等[1,3]認(rèn)為BPB與根尖周炎的臨床癥狀明顯相關(guān)，普氏菌屬與根尖周炎的疼痛、叩痛及腫脹關(guān)系密切。Griffee MB等[9]的研究也證實(shí)Bacteroidesmelaninogenicu(即新命名的Pm)與根尖周炎的疼痛明顯相關(guān)。曹慧敏等[10]對(duì)80例感染根管研究發(fā)現(xiàn)BPB的檢出率高達(dá)76%，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Pg、Pe的存在與竇道形成和根尖膿腫密切相關(guān)。而另一部分學(xué)者[3-4]持相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為細(xì)菌的檢出與根尖周炎的疼痛并無相關(guān)性，理論依據(jù)是同一種細(xì)菌在有癥狀和無癥狀根尖周炎根管內(nèi)都有定植。針對(duì)這兩種截然不同的觀點(diǎn)，我們推測(cè)以下幾個(gè)可能影響研究結(jié)果差異的因素。

①同一菌種不同菌株間的致病性本身存在差異，影響研究結(jié)果。如：Pg不同菌株間致病性毒力亦有不同。菌毛是Pg主要毒力因子，fimA是Pg菌毛主要亞基菌毛素的編碼基因，存在廣泛差異。歐陽玉玲等[11]研究不同基因型Pg與慢性牙周炎臨床癥狀的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)ⅡfimA 和ⅣfimA型Pg致病能力較強(qiáng)，在牙周組織的破壞中發(fā)揮重要作用。

②根尖周炎是細(xì)菌的毒力因子和宿主防御系統(tǒng)相互對(duì)抗的結(jié)果[12]，一方面細(xì)菌的毒力因子引起尖周組織的感染，另一方面，細(xì)菌在感染部位的數(shù)量可能影響根尖周炎臨床癥狀的表現(xiàn)。當(dāng)細(xì)菌達(dá)到一定的數(shù)量才可能干擾宿主的防御反應(yīng)，出現(xiàn)臨床癥狀。而少量的侵入，可能被機(jī)體防御機(jī)能所清除。同時(shí)宿主的免疫防御對(duì)臨床癥狀的表現(xiàn)也有重要影響。同為根尖周炎在不同患者的臨床表現(xiàn)亦有很大差別。

③細(xì)菌間的相互作用也是影響臨床癥狀的一個(gè)重要因素。Gomes BP等[13]研究60例感染根管發(fā)現(xiàn)Pi、Pn和Porphyromonas均與牙髓感染引起的疼痛和腫脹有相關(guān)性，這種細(xì)菌間潛在的相互作用是導(dǎo)致典型臨床癥狀的主要原因。單獨(dú)培養(yǎng)細(xì)菌的毒性較弱，混合培養(yǎng)時(shí)，細(xì)菌相互提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，增強(qiáng)彼此的毒力。王變紅等[14]將Pe、Pg、Fn分別接種于SD大鼠第一磨牙髓腔內(nèi)，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌混合感染的致病能力顯著強(qiáng)于單菌感染。

④人種和地區(qū)差異也是導(dǎo)致細(xì)菌檢出差異的原因之一。Siqueira JF等[15]對(duì)比研究巴西和韓國(guó)人感染根管內(nèi)7種牙髓感染致病菌，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌檢出率存在明顯差異。巴西人群中Pe,Dp、Fa、Td、Tf的檢出明顯高于韓國(guó)人 。

綜上所述，BPB作為感染根管內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌群，在根尖周病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。其毒力因子，如內(nèi)毒素、酶、菌毛、莢膜、外膜蛋白及其代謝產(chǎn)物作用于牙髓及根尖周組織，引起患牙疼痛、叩痛、腫脹等臨床癥狀。

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Correlation betweenblack-pigmentedbacteroidesand clinical symptoms in chronic apical periodontitis

LIU Hai- xia

(Beijing401HospitaloftheNuclearIndustryofChina,Beijing102413,China)

AIM: To study the correlation betweenblack-pigmentedbacteroides(BPB) and clinical symptoms of chronic periodontitis. METHODS: The colonization of 5 kinds ofBPBin 30 infected root canals in patients with chronic apical periodontitis were detected by 16S rDNA PCR.The correlation betweenBPBand clinical symptom of chronic apical periodontitis was analyzed by monofactorial odds ratio, and their functions in chronic apical periodontitis were discussed. RESULTS: The relationship betweenP.g,P.eand pain, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But there was no correlation with pain of percussion and sinus. The relationship betweenP.nand pain of percussion, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But it had no correlation with pain and sinus. There was no correlation betweenP.i,P.mand pain, pain of percussion, sinus and swelling in chronic apical periodontitis(P>0.05). CONCLUSION:P.g,P.eandP.nplay an important role in pain and swelling in chronic periodontitis. There was no correlation betweenP.i,P.mand clinical symptom in chronic apical periodontitis.

black-pigmentedbacteroides; chronic apical periodontitis

2014-08-03;

2015-07-03

劉海霞(1982-)，女，漢族，甘肅人。碩士，主治醫(yī)師

劉海霞，E-mail:liuhx1202@126.com

R780.2

A

1005-2593(2015)09-0541-04