顧國棟，蔣 祺，蘭 海，代 沙，唐 平，和獻(xiàn)鋒

(攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院，四川攀枝花 617061)

川續(xù)斷(Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai)為川續(xù)斷科川續(xù)斷屬宿根草本植物，其干燥肉質(zhì)根的中藥材名稱“續(xù)斷”，系中醫(yī)藥大宗藥材之一，有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，續(xù)折傷，止崩漏等功效?！端拇ǖ赖刂兴幉闹尽穼⑵淞袨榇óa(chǎn)道地藥材。長期以來，野生川續(xù)斷遭到過度采挖，過度墾荒和放牧等人類活動(dòng)的破壞和紫莖澤蘭外來生物入侵，野生資源蘊(yùn)藏量大幅度降低。另外，隨著世界范圍內(nèi)的醫(yī)藥市場(chǎng)對(duì)中藥材和中藥制品需求量的日益增長，市場(chǎng)對(duì)續(xù)斷的需求量也在逐年增大。對(duì)野生川續(xù)斷居群植株表性變異性進(jìn)行研究，初選優(yōu)良種源培育良種，推動(dòng)川續(xù)斷種植業(yè)健康發(fā)展。

1 研究材料的地理分布與調(diào)查方法

1.1 研究材料的地理分布

四川省川續(xù)斷野生資源主要分布于青藏高原和云貴高原之間的攀西大裂谷腹心，分布區(qū)山高谷深，地貌類型復(fù)雜多樣，金沙江、雅礱江和安寧河三江交匯，氣候類型受南亞熱帶干旱季風(fēng)氣候與中亞熱帶溫潤季風(fēng)氣候交替控制，干濕季節(jié)分明，冬暖夏涼。野生川續(xù)斷居群地理分布及生長環(huán)境調(diào)查(見表1)。野生川續(xù)斷主要分布在海拔1 500 m～2 400 m的云南松針葉林、櫟類、榿木等稀樹闊葉林下和海拔2 200 m～2 650 m的稀樹草坡中。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目及測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)

于2012年10月下旬至11月上旬，野生川續(xù)斷種子成熟期對(duì)各居群野生川續(xù)斷植株進(jìn)行調(diào)查采樣。使用鋼卷尺測(cè)量植莖高度、葉柄長、葉寬、葉長和肉質(zhì)根長等;使用游標(biāo)卡尺測(cè)量總苞縱徑和直徑，肉質(zhì)根直徑等;使用精確值0.01 g的電子稱量肉質(zhì)根質(zhì)量和種子千粒重;干燥根藥效成分檢測(cè)采用高效液相色譜法，測(cè)定項(xiàng)目及測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表1 野生川續(xù)斷居群地理位置與生境概況

表2 野生川續(xù)斷性狀測(cè)定項(xiàng)目及測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)

1.3 調(diào)查數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。通過對(duì)川續(xù)斷植株性狀的變異系數(shù)分析法(CV)分析植株形狀變異度，采用主成分分析法(PCA)確定川續(xù)斷植株性狀差異的主要因素，多元線性回歸分析法預(yù)測(cè)植株表性間的相關(guān)性，使用聚類分析法(UPGMA)分析居群間植株性狀的相似度。

2 結(jié)果與分析

2.1 植株性狀變異系數(shù)分析

從表3可以看出，植株性狀變異系數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明:川續(xù)斷存在豐富的遺傳多樣性，野生居群間植株的表性差異程度普遍存在，且差異程度各不相同。居群間植株表現(xiàn)性狀以根體積的變異性最大，變異系數(shù)超過60%;肉質(zhì)根質(zhì)量的變異系數(shù)超過40%，總苞數(shù)的變異系數(shù)超過38%，葉面積的變異系數(shù)超過30%;總苞縱橫徑比和種子千粒重的變異性較小，變異系數(shù)分別在12%和10%以下。居群內(nèi)植株表性同樣存在豐富的變異性，居群內(nèi)植株性狀變異以永興居群的基生葉面積(74.39%)、基生葉寬長比(58.71%)、單株總苞數(shù)(72.92%)、肉質(zhì)根體積(80.82%)和肉質(zhì)質(zhì)量(65.15%)等變異系數(shù)較大;漁門居群的莖高(54.98%)、肉質(zhì)根體積(96.41%)和肉質(zhì)根質(zhì)量(77.77%)等變異系數(shù)較大;格薩拉居群的葉柄長(57.07%)、肉質(zhì)根質(zhì)量(64.32%)等變異系數(shù)較大;啊喇居群的總苞體積(42.01%)，撒蓮居群的總苞縱橫徑比(11.49%)等性狀變異系數(shù)最大;攀蓮居群肉質(zhì)根條數(shù)(68.43%)，肉質(zhì)根體積(97.72%)和肉質(zhì)質(zhì)量(83.08%)等變異系數(shù)最大;9個(gè)野生川續(xù)斷居群的干燥根藥效成分含量以格薩拉居群最高(11.27%);其次是攀蓮居群(9.32%)，撒蓮居群(8.55%)和漁門居群(8.30%)和永興居群(8.28%);干燥根藥效成分含量較低的是普威居群(6.41%)、啊喇居群(6.22%)和平地居群(6.20%)。

表3 野生川續(xù)斷植株性狀變異系數(shù)和藥效成分含量(%)

2.2 植株表性主成分分析

表4植株表性主成分分析結(jié)果表明:12個(gè)特征因子中前4個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率為90.541%，足以代表9個(gè)野生川續(xù)斷居群植株性狀的大部分信息。第一主成分占45.44%，主要反映了肉質(zhì)根質(zhì)量(0.907)、肉質(zhì)根條數(shù)(0.807)和基生葉面積(0.827)、單株總苞數(shù)(0.819)的特點(diǎn)，第二主成分占20.719%，主要反映的是干燥根藥效成分含量(0.821)和總苞體積(0.77)、基生葉寬長比(0.717)的特點(diǎn)，第三主成分占12.882%，主要反映的是種子千粒重的特點(diǎn)(0.659)，第四主成分占11.499%，主要反映的是苞縱橫徑比(-0.575)、總苞體積(0.56)的特點(diǎn)。其中，地下部分以肉質(zhì)根質(zhì)量、肉質(zhì)根條數(shù)和干燥根藥效成分含量3個(gè)植株性狀相關(guān)系數(shù)高于0.80;地上部分以基生葉面積、莖高、單株總苞數(shù)、總苞體積、基生葉柄長和基生葉長寬比等6個(gè)植株性狀相關(guān)系數(shù)均高于0.71。這9個(gè)植株表性是構(gòu)成野生川續(xù)斷居群間植株性狀差異的主要因素。

表4 野生川續(xù)斷植株表現(xiàn)性狀主成分分析表

2.3 植株表性相關(guān)分析

從9個(gè)野生川續(xù)斷居群中選擇90株單株進(jìn)行多元線性回歸分析(每個(gè)居群中選擇10株肉質(zhì)根質(zhì)量較重的單株)，預(yù)測(cè)野生植株表性之間的相關(guān)性。地上部分植株表性以莖高(χ1)、基生葉柄長(χ2)、基生葉面積(χ3)、基生葉長寬比(χ4)、單株總苞數(shù)(χ5)和總苞體積(χ6)等構(gòu)成野生居群間地上部分植株性狀差異的6個(gè)主要因素為自變量，地下部分以肉質(zhì)根質(zhì)量(經(jīng)濟(jì)性狀)為依變量。

表5植株表性相關(guān)線性回歸方差分析結(jié)果:植株地上部分6個(gè)表性與肉質(zhì)根質(zhì)量之間存在極顯著的線性關(guān)系，最優(yōu)回歸方程為:^y=9.605+0.135χ1+0.317χ2+0.018χ3-0.266χ4+0.205χ5+0.639χ6。植株地上部分表性對(duì)肉質(zhì)根質(zhì)量影響由大到小依次為:總苞體積＞基生葉柄長＞單株總苞數(shù)＞株高＞基生葉面積＞基生葉寬長比，基生葉寬長比對(duì)肉質(zhì)根質(zhì)量起到負(fù)向作用，表明狹長型葉片對(duì)川續(xù)斷肉質(zhì)根的質(zhì)量影響更大。

表5 野生川續(xù)斷植株表性相關(guān)線性回歸方差分析

2.4 植株表性聚類分析

對(duì)9個(gè)野生川續(xù)斷居群的12個(gè)植株表性進(jìn)行聚類分析，研究野生川續(xù)斷居群間植株表性的相似度，結(jié)果見圖1。歐氏距離在10閾值時(shí)，9個(gè)居群可聚為兩大類，其中，撒蓮居群、攀蓮居群、啊喇居群、格薩拉居群、平地居群和普威居群歸為一大類，在這一大類中以格薩拉居群的干燥根藥效成分含量高;永興居群、漁門居群和中壩居群歸為一大類，在這一大類中以永興居群的肉質(zhì)根的質(zhì)量最重。格薩拉居群和永興居群可分別代表一個(gè)大類。

圖1 野生川續(xù)斷植株表現(xiàn)性狀聚類圖

3 討論

3.1 野生川續(xù)斷存在著豐富的遺傳多樣性。植株莖高、基生葉柄長、基生葉面積、基生葉長寬比、單株總苞數(shù)、總苞體積、肉質(zhì)根質(zhì)量、肉質(zhì)根條數(shù)和干燥根藥效成分含量等性狀特征是構(gòu)成居群間性狀差異的9個(gè)主要因素。

3.2 川續(xù)斷的地上部分表性與肉質(zhì)根質(zhì)量之間存在極顯著的線性回歸關(guān)系。在良種復(fù)選時(shí)應(yīng)選擇莖干高大，基生葉葉柄長、葉片大而狹長，單株結(jié)苞量多且苞球較大的植株作為采種單株;以簡(jiǎn)化良種復(fù)選工作和保護(hù)野生資源。

3.3 野生川續(xù)斷居群間的12個(gè)植株表性存在較強(qiáng)的相關(guān)性。9個(gè)居群可聚為兩大類。單株肉質(zhì)根質(zhì)量和干燥根藥效成分含量兩個(gè)性狀是川續(xù)斷作為中藥材種植的產(chǎn)量和品質(zhì)的重要經(jīng)濟(jì)指標(biāo)。以此作為優(yōu)良種源篩選的重要依據(jù)，干燥根藥效含量最高的格薩拉居群和肉質(zhì)根質(zhì)量最重的永興居群可分別代表一個(gè)大類作為優(yōu)良種源。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編委會(huì).中國植物志(第73卷)［M］.北京:科學(xué)出版社;1996.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(2010)［S］.一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社;2010:309～310.

［3］萬德光，彭成，趙軍寧，等.四川道地中藥材志［M］.成都:四川出版集團(tuán).四川科學(xué)出版社;2005:544～551.

［4］李春喜，王志和，王文林，等.生物統(tǒng)計(jì)學(xué)(第二版)［M］.北京:科學(xué)出版社;2006.

［5］艾強(qiáng)，周濤，江維克，等.川續(xù)斷種質(zhì)資源遺傳多樣性的SRAP分析［J］.中草藥，2013，43(15):2155～2159.

［6］劉永，魏瑩芳，閆婕，等.不同產(chǎn)地川續(xù)斷中總皂苷含量測(cè)定［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(11):2767～2768.

［7］師文貴，李永志，李鴻雁，等.扁蓿豆不同分布區(qū)野生居群形態(tài)多樣性研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2009，29(5):1001～1005.

［8］曾斌，羅淑萍，李疆，等.新疆野扁桃天然居群形態(tài)變異的研究［J］.生物多樣性，2008，16(5):484～491.

［9］韓秉進(jìn)，潘相文，金劍，等.大豆植株性狀相關(guān)性與產(chǎn)量回歸關(guān)系分析［J］.中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，16(6):1429～1433.