李艷菊，張春莉，尹香利，惠起源

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，陜西延安716000)

結(jié)直腸癌KRAS基因突變檢測及臨床意義

李艷菊，張春莉，尹香利，惠起源

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，陜西延安716000)

目的 探討結(jié)直腸癌患者KRAS基因突變特點(diǎn)與臨床特征之間的關(guān)系。方法 采用突變熒光定量PCR檢測80例經(jīng)手術(shù)證實(shí)的結(jié)直腸癌患者石蠟包埋腫瘤組織中KRAS基因第12、13密碼子突變。結(jié)果 80例結(jié)直腸癌患者中有26例(32.5%)患者存在KRAS基因突變；第12密碼子突變19例，突變檢出率為23.75%，共檢出6種突變類型，其中以Gly12Asp突變率(15%)最高；第13密碼子檢出1種突變類型(Gly13Asp)7例，突變檢出率為8.75%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，KRAS基因突變與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期無明顯相關(guān)性。結(jié)論 結(jié)直腸癌中KRAS基因突變的發(fā)生率較高，其突變率與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期無相關(guān)性。

結(jié)直腸癌；KRAS基因；臨床病理特征

全世界結(jié)直腸癌每年的新發(fā)病例大約有120萬例，每年病死的人數(shù)超過60萬，其發(fā)病率居惡性腫瘤第3位，病死率居第4位。近年以來，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢和年輕化趨勢。隨著分子靶向治療藥物——表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑西妥昔單抗(Cetuximab)和帕尼單抗(Panitumumab)的問世，結(jié)直腸癌的治療進(jìn)入了靶向治療時代。KRAS基因突變檢測已經(jīng)成為臨床用藥的科學(xué)依據(jù)[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取延安大學(xué)附屬醫(yī)院2010-01～2014-01手術(shù)切除的結(jié)直腸癌標(biāo)本80例，術(shù)前均未進(jìn)行新輔助化療，其中男性43例，女性37例，年齡37～80歲，平均年齡58.5歲。

1.2 方法

根據(jù)《結(jié)直腸癌KRAS基因檢測專家共識》標(biāo)準(zhǔn)[1]，選取經(jīng)福爾馬林固定的石蠟標(biāo)本，選取癌組織，使用QIAGEN公司的DNA抽提試劑盒，提取DNA，按Real-time熒光定量PCR試劑盒的說明書，檢測KRAS基因突變情況。運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

80例中腫瘤位于結(jié)腸39例，直腸41例。結(jié)直腸癌患者中有26例，存在KRAS基因突變，占32.5%(26/80)；第12密碼子突變19例，突變檢出率為23.75%(19/80)，共檢出6種突變類型，其中以Gly12Asp突變率(12/80，15%)最高，第13密碼子檢出1種突變類型(Gly13Asp)7例，突變檢出率為8.75%(7/80)，(見表1)。

3 討論

2011年，美國《國家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)結(jié)直腸癌臨床實(shí)踐指南》指出，使用西妥昔單抗或帕尼單抗的患者應(yīng)檢測腫瘤KRAS基因突變狀態(tài)。中國衛(wèi)生部頒布的《結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2010年版)》中推薦西妥昔單抗用于治療KRAS基因狀態(tài)野生型患者。KRAS基因突變檢測可以輔助臨床醫(yī)生篩選受益抗EGFR治療的結(jié)直腸癌患者，為患者個體化治療提供科學(xué)的用藥依據(jù)，降低治療風(fēng)險，減少患者的醫(yī)療費(fèi)用。歐洲藥監(jiān)局和美國FDA明確規(guī)定了使用靶向藥物西妥昔單抗和帕尼單抗治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌必須先檢測KRAS基因。延安地區(qū)經(jīng)濟(jì)比較落后，基因檢測尚未普遍開展，因此，要檢測KRAS基因，必須要患者家屬同意，方可進(jìn)行。由于經(jīng)濟(jì)原因，使大部分患者喪失靶向治療的機(jī)會，使患者的生命質(zhì)量降低，生存率也比其他發(fā)達(dá)地區(qū)降低。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌的KRAS基因突變率為32.5%，即約3分之一的患者出現(xiàn)了KRAS基因突變，與我國及其他西方國家研究結(jié)果一致[2-4]。其中第12密碼子突變19例，突變檢出率為23.75%(19/80)，共檢出6種突變類型，其中以Gly12Asp突變率15%(12/80)最高，KRAS基因突變的發(fā)生率較高，其突變率與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期無相關(guān)性。黃鴻武等[5]采用免疫組織化學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)KRAS蛋白的表達(dá)與性別、腫瘤部位、腫瘤分期無相關(guān)性，僅與病理分化程度相關(guān)，分化越低，KRAS蛋白表達(dá)越多。

2010年結(jié)直腸癌診治觀點(diǎn)科學(xué)判讀強(qiáng)調(diào)結(jié)直腸癌晚期病人應(yīng)該堅持KRAS基因以及KRAS基因野生型是靶向治療的適應(yīng)癥[6]。2012年臨床腫瘤學(xué)重大進(jìn)展-美國臨床腫瘤學(xué)會年度報告指出，F(xiàn)DA批準(zhǔn)西妥單抗聯(lián)合FOL-FIRI化療成為KRAS基因突變陰性EGFR表達(dá)的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線治療方案，在化療的基礎(chǔ)上加上西妥單抗能延長患者的總生存期(OS)和無進(jìn)展生存期(PFS)[7]。2013年臨床腫瘤學(xué)重大進(jìn)展-美國臨床腫瘤學(xué)會年度報告回顧性分析了512名無KRAS基因突變的患者，增加帕尼單抗的使用，可以改善中位OS(26.0個月VS.20.2個月)和中位PFS(10.1個月VS.7.9個月)，但存在KRAS突變的患者不能從帕尼單抗中獲益，而且具有基因突變的患者聯(lián)合運(yùn)用帕尼單抗的效果要比FOLFIRI單獨(dú)化療的效果更差，其OS分別為15.6個月(帕尼單抗聯(lián)合FOLFIRI組)和19.2個月(單獨(dú)使用FOLFIRI組)[8]。

KRAS基因突變檢測已成為中晚期結(jié)直腸癌患者聯(lián)合化療的重要指標(biāo)之一，但是缺乏大樣本研究，希望更多患者能夠自愿參入研究，使得越來越多患者能夠從中受益。

[1]衛(wèi)生部病理質(zhì)控與評價中心.結(jié)直腸癌KRAS基因檢測專家共識[J].中華病理學(xué)雜志，2012.41(9)：635-636.

[2]Karapetis CS,Khambata-Ford S,Jonker DJ,et al.K-ras mutationsand benefit from cetuximab in advanced colorectal cancer[J].N Engl J Med,2008,359(17)：1757-1765.

[3]吳瑛，胡涵光，葉曉賢，等，KRAS基因突變與結(jié)直腸癌臨床病理因素的關(guān)系[J].中華外科雜志，2010，48(16)：1247-1251.

[4]陳慧娟，李洪波，李碩敏，等，KRAS基因突變與結(jié)直腸癌的關(guān)系[J].腫瘤研究與臨床，2010，22(7)：461-463.

[5]黃鴻武，李永翔.EGFR和KRAS在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].武警后勤學(xué)院學(xué)報，2013，22(5)：345-348.

[6]劉蔭華，徐玲，姚宏偉.2010年結(jié)直腸癌診治觀點(diǎn)科學(xué)判讀[J].中國實(shí)用外科雜志，2010，30(9)：763-768.

[7]潘燚，牛飛玉，蘇文媚，等，2012年臨床腫瘤學(xué)重大進(jìn)展-美國臨床腫瘤學(xué)會年度報告[J].循證醫(yī)學(xué)，2013，13(1)：4-29.

[8]茍?zhí)m英，高紅飛，韓解非，等，2013年臨床腫瘤學(xué)重大進(jìn)展-美國臨床腫瘤學(xué)會年度報告[J].循證醫(yī)學(xué)，2014，14(1)：4-29.

延安大學(xué)附屬醫(yī)院研究生創(chuàng)新基金(12YJ23)

李艷菊(1981—)，女，陜西延安人，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：腫瘤學(xué)。

R730.23

A

1672-2639(2015)02-0045-02

2015-01-15；責(zé)任編輯 徐文梅]