李 麗 孟令鍇 侯甲福 李怡潼 韓婼伊 李 潔

小白花地榆總皂苷的急性毒性實驗研究※

李 麗1孟令鍇2侯甲福2李怡潼3韓婼伊2李 潔1

目的 探討小白花地榆總皂苷的急性毒性反應。方法 選用SPF級健康昆明小鼠60只，采用灌胃給藥法給予小白花地榆總皂苷，24 h內(nèi)給藥2次，每次間隔8 h，記錄小鼠病死情況及檢測存活小鼠血液指標，計算小白花地榆總皂苷的LD50。結(jié)果 小白花地榆總皂苷LD50為67.24 g/kg，其95%置信區(qū)間為63.04～71.72 g/kg。結(jié)論 小白花地榆總皂苷毒性較低。

小白花地榆；總皂苷；半數(shù)致死量；急性毒性

小白花地榆[Sanguisorba parviflora(Maxim) Takeda]為薔薇科地榆屬植物，中藥地榆已有2000多年的歷史，具有涼血止血、解毒斂瘡的功效[1]。目前，作為治療白細胞減少癥藥物廣泛應用于臨床[2-3]。研究表明，地榆屬植物所含總皂苷具有促進巨核祖細胞的增值及分化功能[4-5]。黑龍江省地榆屬資源豐富，主要有地榆、小白花地榆等物種[1]。本實驗旨對小白花地榆總皂苷成分進行急性毒性反應，為進一步開發(fā)地榆屬植物藥用資源提供了基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗用藥材采自牡丹江市橫道河子地區(qū)，鑒定為薔薇科（Rosaceae）地榆屬（Sanguisorba L.）小白花地榆。

1.2 實驗動物 SPF級昆明小鼠80只，雌雄各半，體質(zhì)量18.00～22.00 g（由佳木斯大學實驗動物中心提供，許可證號：SYXK[黑]2011-021）。

1.3 實驗儀器 灌胃器、動物天平（上海?？惦娮觾x器廠）、RE-52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、AU-640生化分析儀（日本Olympus公司）。

1.4 方法

1.4.1 總皂苷的制備 取小白花地榆藥材 2 kg，75%乙醇提取，乙醚脫脂后，用水飽和正丁醇萃取濃縮，稀乙醇溶解，稀氫氧化鈉（NaOH）溶液調(diào)pH至14，加無水乙醇超聲清洗多次，濾過干燥，即得。

1.4.2 預實驗 參考相關(guān)文獻，按照經(jīng)典的急性毒性實驗方法要求[6-8]，選用SPF級健康昆明小鼠20只，雌雄各10只，隨機分為5組，每組4只，進行預實驗，組間距r=0.9，找出0%與100%的估計致死量。

1.4.3 半數(shù)致死量的測定 選用SPF級健康昆明小鼠60只，雌雄各30只；根據(jù)預實驗結(jié)果，正式實驗設置6個劑量組，分別為52.82 g/kg組、58.68 g/kg組、65.21 g/kg組、72.45 g/kg組、80.50 g/kg組及空白對照組，每組10只。實驗前，小鼠禁食、不禁水，12 h后開始灌胃給藥，每隔8 h給藥1次，24 h內(nèi)給藥2次，連續(xù)觀察7 d，記錄小鼠健康狀況及病死情況，計算小白花地榆總皂苷的LD50。頸椎脫臼處死存活小鼠，進行解剖，對主要臟器（心、肝、脾、胃、腎）病理檢查。

1.4.4 血液指標測定 分別將80.50 g/kg劑量組及空白對照組實驗后存活小鼠取眼球血，分離血清，測定血液指標，如丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷氯酰轉(zhuǎn)肽酶（GTT）、肌酐（Cr）、堿性磷酸酶（ALD）、血尿素氮（BUN）、直接膽紅素（DBIL）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用 SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 預實驗結(jié)果 小白花地榆總皂苷無病死的最小給藥劑量（LD0）為 52.82 g/kg，100%病死率的最大給藥劑量（LD100）為80.50 g/kg，見表1。

表1 5組預實驗小鼠存活狀況

2.2 致死量實驗結(jié)果 通過觀察，中毒小鼠先后出現(xiàn)卷縮，活動減少，懶動，匍匐不動，直至病死。將存活小鼠頸椎脫臼處死并解剖，經(jīng)觀察心、肝、脾、胃及腎均正常。經(jīng)計算，LD50為67.24 g/kg，其95%置信區(qū)間為63.04～71.72 g/kg，見表2。

表2 6組實驗小鼠存活狀況

2.3 血液分析結(jié)果 80.50 g/kg組與空白對照組各血液指標比較差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表3。

表3 兩組小鼠血液酶學等指標(±s)

表3 兩組小鼠血液酶學等指標(±s)

組別 只數(shù) ALT(U/L) AST(U/L) ALD(U/L) 80.50 g/kg劑量組 10 41±10 181±36 259±29空白對照組 10 41±11 181±34 254±27組別 BUN (mmol/L) DBIL (mmol/L) Cr (μmmol/L) GTT (U/L) 80.50 g/kg組 6.9±0.9 0.5±0.9 34.0±1.0 2.7±1.2空白對照組 6.6±0.8 0.5±0.9 33.3±1.1 2.7±1.1

3 討論

中藥的急性毒性研究是中藥新藥研究與開發(fā)的前提，為科學實驗及臨床用藥提供重要的信息。急性毒性實驗通過觀察給藥后實驗動物出現(xiàn)的毒性反應及病死情況，測定引起急性中毒的劑量，進而為毒性實驗的觀察和劑量的分組提供參考[9]。

本實驗結(jié)果顯示，①其LD50為67.24 g/kg，根據(jù)課題組前期對小白花地榆中總皂苷含量的測定結(jié)果進行計算[10]，其相當于成人日用生藥劑量的1306倍；②通過對其主要臟器檢查，無明顯變化；③血液分析結(jié)果表明，80.50 g/kg組與空白對照組各血液指標比較差異均無統(tǒng)計學意義。提示小白花地榆總皂苷毒性較小，臨床用藥比較安全，為進一步對小白花地榆進行藥效學研究提供了實驗依據(jù)。

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The Acute Toxicological Study on Total Saponins of Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda

Li Li Meng Lingkai Hou Jiafu Li Yitong Han Ruoyi Li Jie

【Absstract】Objective To observe the acute toxicity of total saponins of Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda. Methods Selection of SPF grade healthy Kunming mice 60,The intragastric administration was given total saponins of Sanguisorba parviflora,24 h administered 2 times,each time interval of 8 h,record dead mice and detection of live mice blood indicators,calculated the median lethal dose of total saponins of Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda. Results The median lethal dose of the total saponins was 67.24 g/kg.and its 95% confident limit was 63.04～71.72 g/kg. Conclusion There is lower toxicity total saponins of Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda.

Sanguisorba parviflora(Maxim.)Takeda;Total saponins;Median lethal dose;Acute toxicity trial

R927.1

A

1673-5846(2015)09-0017-02

1牡丹江醫(yī)學院附屬紅旗醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157011

2牡丹江醫(yī)學院，黑龍江牡丹江 157011

3四川大學華西藥學院，四川成都 610041

黑龍江省衛(wèi)生廳科研項目（編號：2013201）；牡丹江醫(yī)學院科研項目（編號：ZS201307）；黑龍江省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練

計劃項目（編號：201410229025）

李麗（1963-），碩士研究生，主任醫(yī)師。研究方向：年輕急性淋巴細胞白血病治療

李潔（1982-），碩士研究生，主治醫(yī)師。研究方向：年輕急性淋巴細胞白血病治療。E-mail：mdlbaby@163.com