王丹丹　汲　軍

不同濃度姜黃素抑制人肝癌細胞增殖的實驗研究※

王丹丹汲軍

目的探討姜黃素對人肝癌細胞株HepG2的抑制作用。方法將不同濃度的姜黃素作用于人肝癌細胞株HepG2，藥物作用48 h后，利用四唑鹽比色法（MTT）測定吸光度值，計算細胞增殖抑制率。結果不同濃度姜黃素（10、20、30、40、50 μg/ml）的抑制率分別為0.437、0.530、0.662、0.781、0.846。與空白對照組比較，姜黃素對人肝癌細胞HepG2有明顯的抑制作用。結論姜黃素可以明顯抑制HepG2的生長。

姜黃素；人肝癌細胞；四甲基偶氮唑鹽

肝癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在腫瘤發(fā)病率中列第3位[1]。肝癌一旦確診，多數(shù)屬于中晚期，常用的放化療方法雖有一定療效，但患者常因嚴重的不良反應而放棄治療，目前抗腫瘤的熱點集中于尋找高效低毒的中藥制劑進行治療。姜黃素是從姜黃中提取的有效成分，具有不良反應小、價格低廉等優(yōu)點，以往研究表明，其對胃癌、皮膚癌、結腸癌等均有一定抑制作用[2]。本實驗主要研究姜黃素在體外對人肝癌細胞HepG2的抑制效果，探討姜黃素的抗腫瘤活性，以期為姜黃素的體內活性及臨床應用研究提供理論依據。

1　材料與方法

1.1實驗材料二氧化碳培養(yǎng)箱：美國Forma公司；Olympus倒置顯微鏡：日本 Olympus公司；Bio-RAD550全自動酶標儀：美國伯樂公司；臺式高速低溫離心機5810R型：美國Eppendorf公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）：美國Sigma公司；RPMI-1640培養(yǎng)基：美國Gibco公司；小牛血清（FBS）：杭州四季青；無水二甲基亞砜（DMSO）、分析純：美國Sigma公司；胰酶：美國Sigma公司；姜黃素（含量＞80%）：美國Sigma公司；人肝癌細胞株HepG2：上海生物制品研究所，液氮中凍存保種。

1.2方法

1.2.1細胞培養(yǎng)采用加入小牛血清(FBS)并含雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝癌細胞株HepG2，置于37.5 ℃、5% CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中，72 h后細胞貼壁生長，用0.25%胰酶直接吹打法將貼壁生長的細胞傳代，每1～2天更換1次培養(yǎng)基，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。

1.2.2分組空白對照組：以RPMI-1640培養(yǎng)基和細胞（含0.1% DMSO）為對照；實驗組：姜黃素粉劑用少量DMSO溶解，配制濃度分別為10、20、30、40、50 μg/ml，每孔加入含 0.1% DMSO的RPMI-1640培養(yǎng)基、細胞和相應濃度的姜黃素。

1.2.3細胞形態(tài)學觀察加藥培養(yǎng)48 h后，將各組的肝癌細胞HepG2在倒置顯微鏡下放大200倍觀察細胞變化并拍照。

1.2.4MTT檢測藥物對細胞株增殖的影響按預實驗結果，將HepG2細胞株以濃度為1×104個/ml的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，于37 ℃、5% CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h后加入不同濃度的姜黃素溶液200 μl/孔，每組設6個平行孔。作用48 h后，每孔加入5 mg/mlMTT溶液20 μl，作用4 h，棄上清，加入DMSO溶液150 μl/孔振蕩10 min。采用酶標儀于490 nm波長，空白孔調零，測定吸光度，并計算細胞生長抑制率IR=（1－實驗組吸光度/對照組吸光度）×100%。

2　結果

2.1細胞形態(tài)學觀察空白組細胞輪廓清晰，形態(tài)伸展，成對數(shù)生長，見圖 1（1-1）。實驗組細胞體積縮小呈圓形，與周圍的細胞脫離，生長受到抑制。不同濃度姜黃素（10、20、30、40、50 ug/ml）對細胞影響見圖1（1-2～1-6）。

2.2MTT法測定姜黃素對肝癌細胞株HepG2的增殖抑制率姜黃素作用48 h后，用MTT法測定光密度后，計算藥物對細胞的抑制率，結果見表 1，抑制曲線見圖2。結果可見，不同濃度姜黃素（10、20、30、40、50 μg/ml）的抑制率分別為43.7%、53.0%、66.2%、78.1%、84.6%。與空白對照組比較，各實驗組對肝癌細胞HepG2均有明顯的抑制作用。

圖1　細胞形態(tài)學觀察

表1　姜黃素對HepG2細胞的抑制作用

圖2　姜黃素對HepG2細胞的抑制曲線

3　討論

目前，惡性腫瘤發(fā)病率極高，腫瘤藥物在抑制腫瘤細胞生長的同時，機體也會受到藥物的損害，因此尋找高效低毒的中藥治療勢在必行[3]。本實驗主要采用細胞形態(tài)學觀察與 MTT法相結合，研究了姜黃素在體外對人肝癌細胞 HepG2的抑制效果。結果表明，姜黃素體外可明顯抑制肝癌細胞HepG2的增殖，并且這種抑制作用有量效關系，以上實驗其結果為姜黃素這種低毒的中藥成分用于體內的抗腫瘤活性研究提供了科學依據，是臨床藥物開發(fā)的基礎研究。

[1] 劉允怡.肝癌治療新進展[J].臨床外科雜志,2007,15(1):2-5.

[2] 潘國鳳.姜黃素抗腫瘤作用及其機制研究最新進展[J].中藥藥理與臨床,2007,23(5):243-244.

[3] 胡惠軍,陳新來,潘勇權,等.姜黃素對肝細胞生長因子誘導的前列腺癌細胞上皮細胞間質化的逆轉作用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學, 2013,21(7):1425-1429.

Experimental Study of Different Concentrations of Curcumin Inhibits the Proliferation of Human Hepatocellular Carcinoma Cells

Wang DandanJi Jun

ObjectiveTo investigate the inhibitory effect of curcumin on human hepatocellular carcinoma cell line HepG2.MethodsThe effects of different concentrations of curcumin in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2,the role of drugs after 48 h,using four tetrazolium colorimetric assay(MTT)determination of absorbance, calculate the inhibition rate of cell proliferation.ResultsDifferent concentrations of curcumin(10,20,30,40,50 μg/ml) inhibition rates were 0.437,0.530,0.662,0.781,0.846.Compared with the blank control group,curcumin has obvious inhibitory effect on hepatoma cell line HepG2.ConclusionCurcumin can inhibit the growth of HepG2.

Curcumi;Human hepatocellular carcinoma cell;MTT

R735.7

A

1673-5846(2015)02-0014-02

長春醫(yī)學高等?？茖W校，吉林長春130031

※吉林省教育廳“十二五”科研規(guī)劃項目（2014610號）

王丹丹（1981-），碩士學位，主要從事腫瘤藥理學研究。E-mail：358595564@qq.com