康靜蕊，玉山江·艾克木

(新疆醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，新疆烏魯木齊 830000)

糖尿病腎病 (diabetic nephropathy，簡(jiǎn)稱DN)是糖尿病臨床常見(jiàn)的合并癥之一，是西方國(guó)家終末期腎病(ESRD)的首要原因，其發(fā)病率在我國(guó)也有上升趨勢(shì)［1］。探索糖尿病腎病患者的防治方案，提高糖尿病腎病患者生活質(zhì)量是目前人們最需要解決的問(wèn)題。糖尿病屬于中醫(yī)消渴范疇，其病機(jī)是陰虛為本、燥熱為標(biāo)，糖尿病腎病早期以陰虛為主，久病陰虛累積氣虛，而致氣陰兩虛，而燥熱漸消，氣虛無(wú)以助血運(yùn)行，阻滯經(jīng)脈，形成氣陰兩虛夾瘀證候。益氣養(yǎng)陰、解毒化瘀法是治療早期糖尿病腎病的基本原則，西紅康是在中醫(yī)絡(luò)病理論指導(dǎo)下，針對(duì) DN早期氣陰兩虛、絡(luò)脈瘀滯的病機(jī)研制的中藥制劑。本文通過(guò)建立DN動(dòng)物模型，考察西紅康對(duì)于腎臟尿微量白蛋白排泄的影響及對(duì)腎臟的保護(hù)作用。為更深入的研究和臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠32只，雄性，體重180～200 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院科技樓動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(新)2003-0001。所有動(dòng)物均分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度(20±2)℃，自然光照。所有大鼠均實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 試劑和儀器 日立7150型自動(dòng)生化儀器(日本日立公司);穩(wěn)豪型血糖試紙(強(qiáng)生(中國(guó))有限公司;H-7650型透射電鏡(日本HITACHI);BX63+DP72顯微鏡(日本OLYMPUS株式會(huì)社);BSA124S-CW精密電子秤(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);JY10001電子秤(上海精密科學(xué)儀器有限公司);Accu-chek Advantage血糖儀(德國(guó)羅氏)。

鏈尿佐菌素(Streptozocin，STZ)(美國(guó)Sigma公司);糖適平片(北京第六制藥廠);西紅康方，來(lái)自新疆自治區(qū)中醫(yī)院中藥房統(tǒng)一采購(gòu)的中藥(批號(hào):1010087)。按傳統(tǒng)方法煎熬過(guò)濾后，將藥液濃縮，使藥液濃縮至每毫升含生藥量1.9 g。

1.3 模型構(gòu)建 所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周，4周末按35 mg·kg-1腹腔注射STZ(采用2%枸櫞緩沖液配制)。72 h后取血，保留24 h尿量，檢測(cè)大鼠空腹血糖、尿量和尿糖確定模型是否構(gòu)建成功。模型建立標(biāo)準(zhǔn):空腹血糖≥14 mmol·L-1，尿量≥正常尿量50%;尿糖呈強(qiáng)陽(yáng)性者為DN模型成立，模型復(fù)制8周結(jié)束［2］。造模大鼠中符合納入標(biāo)準(zhǔn)者進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 Wistar大鼠32只，雄性，體重180～200 g，隨機(jī)分為4組:模型組，中藥西紅康組，糖適平陽(yáng)性組，正常對(duì)照組，每組8只。西紅康方配成混懸液，按每公斤體重(1.0 g藥粉·d-1，相當(dāng)于成人0.15 g·kg-1·d-1)灌胃，每日上午9～10點(diǎn)1次，連續(xù)給藥56 d(8周)。陽(yáng)性組:糖適平5 mg·kg-1·d-1(相當(dāng)于成人300 mg·d-1)，灌胃，每日1次。連續(xù)給藥56 d(8周)。模型組:每只生理鹽水2 mL，灌胃，每日1次。連續(xù)給藥56 d(8周)。正常組:不作任何處理。以上各組均自由取食，自由飲水。

1.5 觀察指標(biāo) 一般情況:對(duì)各組大鼠的行為表現(xiàn)、飲水量、尿量、精神狀態(tài)、飲食、毛色、體重等進(jìn)行觀察，每天供給足量普通飼料及飲水。血糖測(cè)定:一次性腹腔注射鏈脈佐菌素72 h后及用藥8周后，使用內(nèi)徑為1.0 mm的毛細(xì)玻璃管刺入大鼠眶后靜脈叢取血，測(cè)定每只大鼠的血糖值。24 h尿微量白蛋白測(cè)定:分別于給藥前和8周末，用代謝籠留取每只大鼠 24 h尿液，記錄尿量;取 2 mL，-20℃冰箱保存，用于尿微量白蛋白測(cè)定測(cè)定。尿微量白蛋白用大鼠尿微量白蛋白ELISA(酶聯(lián)免疫法)試劑盒測(cè)定。腎臟病理切片的觀察:實(shí)驗(yàn)8周末，取所有大鼠腎臟病理切片，分別在光鏡和電鏡觀察4組大鼠的病理切片下的腎臟的情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有統(tǒng)計(jì)在SPSS 13.0軟件上完成。觀測(cè)數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，采用(±s)表示，均通過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)。各指標(biāo)資料均以給藥前的數(shù)據(jù)水平作為協(xié)變量，對(duì)8周后的觀測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)校正，據(jù)此進(jìn)行單因素方差—協(xié)方差分析及各組間的兩兩比較。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血糖和體重變化 各組大鼠血糖和體重兩指標(biāo)的資料列于表1?？紤]到該兩指標(biāo)在給藥前的數(shù)據(jù)水平會(huì)對(duì)用藥后8周的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，故行單因素方差—協(xié)方差分析，即以給藥前的數(shù)據(jù)作為協(xié)變量處理，對(duì)8周后的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)控制。整體分析結(jié)果(單因素方差—協(xié)方差分析)顯示:用藥8周后的血糖和體重資料的4組整體比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，遂繼續(xù)進(jìn)行各組間兩兩比較。

經(jīng)兩兩組間比較并結(jié)合數(shù)據(jù)來(lái)看:給藥前，模型組、陽(yáng)性組和西紅康組在血糖、體重指標(biāo)中均很接近。給藥8周后，陽(yáng)性組和西紅康組血糖水平相對(duì)于模型組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，陽(yáng)性組和西紅康組體重相對(duì)于模型組也均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);陽(yáng)性組和西紅康在血糖水平和體重均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血糖和體重變化(n=8，±s)

表1 各組大鼠血糖和體重變化(n=8，±s)

組別血糖/mmol·L-1給藥前 用藥后8周體重/g給藥前 用藥后8周A 組:正常組 6.72 ±1.23 6.81 ±1.52 336.32 ±13.42 441.12 ±16.23 B 組:模型組 19.11 ±4.32 17.81 ±5.23 313.23 ±11.29 299.23 ±13.26 C 組:陽(yáng)性組 18.76 ±4.06 12.24 ±3.78 319.10 ±12.47 365.21 ±14.23 D組:西紅康組 18.89 ±5.29 13.22 ±3.62 314.71 ±11.85 369.26 ±14.26整體方差—協(xié)方差分析(F，P)方差分析 18.440，0.000 11.47，0.000 6.297，0.002 126.95，0.000協(xié)方差分析 6.690，0.015 15.518，0.001校正后方差分析 — 4.11，0.016 — 105.22，0.000多重比較-LSD檢驗(yàn)(LSD-t，P)A 組 vs B 組 — 3.253，0.003 — 17.173，0.000 A 組 vs C 組 — 0.213，0.833 — 8.710，0.000 A 組 vs D 組 — 0.736，0.468 — 7.672，0.000 B 組 vs C 組 — 3.040，0.005 — 8.464，0.000 B 組 vs D 組 — 2.517，0.018 — 9.501，0.000 C 組 vs D 組 — 0.523，0.605 — 1.038，0.308

2.2 各組大鼠尿微量白蛋白比較 各組大鼠24 h尿微量白蛋白資料列于表2。同前方法，行單因素方差—協(xié)方差分析。整體分析結(jié)果(單因素方差—協(xié)方差分析)顯示:該指標(biāo)用藥8周后的4組整體比較，均有統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.05)，遂繼續(xù)進(jìn)行各組間兩兩比較。

經(jīng)兩兩組間比較并結(jié)合數(shù)據(jù)來(lái)看，正常組相對(duì)于模型組、陽(yáng)性組、西紅康組均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);模型組相對(duì)于陽(yáng)性組、西紅康組也均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);此外，陽(yáng)性組相對(duì)于西紅康組也有顯著性差異(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠24 h尿微量白蛋白比較(n=8，±s)/μg

表2 各組大鼠24 h尿微量白蛋白比較(n=8，±s)/μg

組別 給藥前 用藥后8周A組:正常組86.56 ±14.41 85.35 ±13.39 B 組:模型組 504.24 ±56.23 757.81 ±75.23 C 組:陽(yáng)性組 500.22 ±63.21 656.92 ±89.78 D 組:西紅康組 509.26 ±51.98 532.22 ±43.53整體方差—協(xié)方差分析(F，P)方差分析 138.947，0.000 178.30，0.000協(xié)方差分析 6.317，0.018校正后方差分析 — 26.13，0.000多重比較-LSD檢驗(yàn)(LSD-t，P)A 組 vs B組 — 14.664，0.000 A 組 vs C組 — 11.407，0.000 A 組vs D 組 — 7.137，0.000 B 組vs C組 — 3.257，0.003 B組 vs D 組 — 7.527，0.000 C組vs D組 — 4.270，0.000

2.3 各組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)變化 正常組大鼠腎臟腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)體積增大;模型組大鼠腎小球體積增大，系膜細(xì)胞發(fā)生中度增生，腎間質(zhì)可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，系膜區(qū)增寬，毛細(xì)血管基底膜彌漫性增厚，腎小球上皮細(xì)胞腫脹;陽(yáng)性組腎小球體積減少，系膜細(xì)胞發(fā)生增生緩解，輕度增生，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，系膜區(qū)增寬減少，毛細(xì)血管基底膜輕度增厚;西紅康組腎小球降低，系膜細(xì)胞輕度增生，腎間質(zhì)可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，少量膠原纖維，基底膜輕度增厚。見(jiàn)圖1。

正常組大鼠腎臟系膜細(xì)胞、濾過(guò)膜內(nèi)皮細(xì)胞和足細(xì)胞均結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核清晰，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)各細(xì)胞器;模型組毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)模糊，系膜細(xì)胞基質(zhì)增生，足細(xì)胞呈不規(guī)則形，可見(jiàn)較大電子密度高的泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)局部融合;陽(yáng)性組和西紅康組病理狀態(tài)均有所改善，毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)較清晰，系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)基本恢復(fù)正常，足細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，可見(jiàn)核局部，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)融合程度下降。見(jiàn)圖2。

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病最常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一。在糖尿病中的發(fā)病率高達(dá)47.66%，是造成慢性腎功能衰竭的常見(jiàn)病因，占糖尿病患者死亡率的60%，其臨床表現(xiàn)為不同時(shí)期的蛋白尿、腎臟結(jié)構(gòu)改變、腎小球?yàn)V過(guò)率改變(早期增加，晚期進(jìn)行性下降)、高血壓、腎功能衰竭等［3］。糖尿病腎病發(fā)病隱匿，早期不易被發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)癥狀時(shí)腎臟的病變已經(jīng)不可逆轉(zhuǎn)。長(zhǎng)年糖尿病導(dǎo)致腎臟的濾過(guò)功能被破壞，最初表現(xiàn)為微量白蛋白尿。隨著病程延長(zhǎng)，尿蛋白增加，腎臟排除血中毒素的能力逐漸減退，最終發(fā)展為終末期腎?。?］。

糖尿病腎病的治療史上，中醫(yī)醫(yī)學(xué)對(duì)糖尿病腎病的病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)和治療有著悠久的歷史，糖尿病腎病的形成多由稟賦不足、過(guò)食肥甘、情志所傷、勞欲過(guò)度等引起［5］。近代醫(yī)家對(duì)DN病機(jī)認(rèn)識(shí)頗多，但以本虛標(biāo)實(shí)為主，消渴日久，耗氣傷陰而致氣陰兩虛，漸致陰陽(yáng)五臟虧虛，而濕、濁、痰、瘀諸邪蘊(yùn)結(jié)于腎，故“本虛標(biāo)實(shí)”為本病的基本病機(jī)［6］。中醫(yī)從整體出發(fā)，根據(jù)“五臟皆柔弱者，善病消癉”，認(rèn)為糖尿病腎病早期以正氣虛損為主，久病必虛，氣陰兩虛，存在于從糖尿病到糖尿病腎病的全過(guò)程中［7］。

本研究認(rèn)為糖尿病腎病是在糖尿病以陰虛為本，氣陰兩虛為基本證型的基礎(chǔ)上進(jìn)一步演變而來(lái)。氣陰兩虛是糖尿病腎病本虛之基本病機(jī)，瘀血貫穿于糖尿病腎病始終，本病發(fā)生與腎、肝、脾、肺、心漸次受傷有關(guān)。為此本研究在老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上，結(jié)合新疆道地藥材及糖尿病腎病特點(diǎn)建立西紅康組方。西紅康針對(duì)糖尿病腎病氣陰兩虛夾血瘀的發(fā)病機(jī)制，采用益氣養(yǎng)陰，解毒化瘀法。方中黃芪、太子參補(bǔ)氣養(yǎng)陰，芡實(shí)、山茱萸、山藥補(bǔ)腎固精，熟大黃逐瘀清熱，川芎、草紅花、紅景天活血化瘀通絡(luò)，諸藥合用益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)腎活血功能［8］?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪及有效成分有較好地降低尿蛋白、降糖、降壓和擴(kuò)張血管作用，可明顯降低糖化血紅蛋白，減少微量白蛋白排出［9］;有研究亦表明，黃芪有防止或逆轉(zhuǎn)蛋白尿作用，其減少大多數(shù)腎臟疾病尿量的排泄被大家所公認(rèn)［10］。且黃芪可抑制腎臟一氧化碳(NO)的產(chǎn)生，可部分糾正糖尿病早期腎血流動(dòng)力學(xué)異常，對(duì)DN的發(fā)生有一定的預(yù)防作用［11］。山茱萸、山藥均有降糖的作用，大黃及有效成分可以抑制腎小球系膜細(xì)胞增殖，抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，具有延緩腎衰進(jìn)展，保護(hù)腎功能的作用［12］。川芎、草紅花、紅景天均有擴(kuò)張外周血管，增加器官血流量，抑制血小板凝集的功效。諸藥相配，共湊益氣養(yǎng)陰、解毒化瘀之效。

本研究中發(fā)現(xiàn)，西紅康給藥8周后，可明顯的降低模型大鼠的血糖水平，說(shuō)明該組方具有降血糖的功能，通過(guò)對(duì)尿微量白蛋白的檢測(cè)，西紅康顯著降低了尿微量白蛋白的含量，且優(yōu)于對(duì)照組，西紅康可改善糖尿病腎病的腎臟功能，通過(guò)對(duì)腎結(jié)構(gòu)的病理學(xué)觀察，西紅康可保護(hù)腎臟結(jié)構(gòu)受損。綜上述，西紅康湯具有較好地控制血糖、降低尿微量白蛋白的作用，從而可以延緩糖尿病腎病的進(jìn)展，保護(hù)腎功能，為臨床使用該組方提供了更豐富的理論資料。

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