王 元，劉宏杰，沙依蘭古麗，王長江，王 琴

（1.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆昌吉 831100；2. 新疆畜牧科學(xué)院，新疆烏魯木齊 830000；3.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081）

新疆某種豬場豬瘟凈化試驗

王 元1，劉宏杰1，沙依蘭古麗2，王長江2，王 琴3

（1.新疆天康畜牧科技有限公司，新疆昌吉 831100；2. 新疆畜牧科學(xué)院，新疆烏魯木齊 830000；3.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081）

[目的]有效控制豬瘟，探索凈化方案，提供豬瘟凈化模式。[方法]通過對新疆某種豬場豬間隔半年2次活體采集扁桃體及對應(yīng)血清，分別采用豬瘟實時熒光定量RT-PCR（FQ RT-PCR）和ELISA方法進(jìn)行豬瘟病原學(xué)和抗體進(jìn)行檢測，累計淘汰病原學(xué)陽性種豬4頭，結(jié)合有效的疫苗免疫、完善生物安全措施和其他疫病防治等措施，進(jìn)行豬場豬瘟凈化試驗。[結(jié)果]該種豬場的豬瘟病毒感染率由凈化實施前的13%（3/23）降為0%（0/40），仔豬成活率由60%提高到95%。[結(jié)論]通過實施凈化方案，達(dá)到了豬瘟凈化的目的，建立了豬場豬瘟凈化模式。

種豬場；豬瘟；控制；凈化

豬瘟是由豬瘟病毒引起的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一，被OIE列為必須報告的傳染病，我國將其列為一類動物傳染病[1]。近年來，國內(nèi)豬瘟的流行特點和發(fā)病特征發(fā)生了明顯的變化，病程由急性變?yōu)槁?。臨床癥狀由典型變?yōu)榉堑湫偷臏睾托拓i瘟，特別是低毒力豬瘟病毒的存在，常導(dǎo)致豬瘟病毒持續(xù)感染，母豬表現(xiàn)不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎或木乃伊胎，初生弱仔豬表現(xiàn)為精神沉郁、間歇性腹瀉、死亡或免疫耐受，易形成持續(xù)性感染帶毒豬，造成豬瘟長期流行[2，3]。為了有效控制豬瘟，特別是從源頭控制豬瘟，我們在前期豬瘟凈化技術(shù)研究的基礎(chǔ)上，在新疆某規(guī)?；N豬場豬瘟開展了豬瘟凈化試驗示范。

1 豬場基本情況

新疆伊犁某父母代種豬場共存欄種母豬150頭、種公豬6頭。豬場其他生物安全措施一般，豬瘟凈化前豬場仔豬成活率約60%。死亡仔豬采集病料檢測，可檢到豬瘟病原。其他疫病通過免疫等措施已得到有效控制。

2 凈化方案

2.1 主要疫病控制和生物安全措施

2.1.1 對主要威脅的疫病進(jìn)行免疫預(yù)防。豬場免疫程序為：采用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞苗，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號：2013027）按使用說明進(jìn)行全群免疫，免疫劑量為每頭豬1頭份，仔豬零日齡首免、30日齡二免，種母豬每次配種前免疫1次，種公豬每年免疫2次。偽狂犬、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒、口蹄疫等按規(guī)定進(jìn)行免疫。通過免疫有效控制豬瘟等疫病流行。

2.1.2 完善定期消毒、引進(jìn)種豬隔離檢疫、人員管理等生物安全措施，嚴(yán)防疫病傳入。

2.2 樣品采集方法

對免疫豬瘟疫苗免疫后28天的種公豬、生產(chǎn)母豬和后備母豬抽樣活體采集扁桃體和血清，檢測豬瘟病原和抗體情況。然后，每半年進(jìn)行一次檢測，共檢測3次。每次采樣時，對所有種公豬全部采樣，對生產(chǎn)母豬則先分析全群生產(chǎn)母豬生產(chǎn)記錄，優(yōu)先選擇產(chǎn)仔少、流產(chǎn)或有過產(chǎn)死胎、病胎、弱胎或仔豬成活率低的母豬采樣。每次采10%～20%種豬的樣品。

2.3 檢測陽性豬的淘汰

對豬瘟病原陽性的種豬予以淘汰。對豬瘟抗體不合格的種豬進(jìn)行補免，對多次免疫豬瘟抗體仍不合格的豬予以淘汰。

2.4 對新引進(jìn)豬的監(jiān)測和處理

對新引種豬檢測豬瘟抗體和豬瘟病原，淘汰病原檢測陽性豬；豬瘟抗體不合格的豬進(jìn)行加強免疫，加強免疫后抗體仍不合格的豬予以淘汰。

3 檢測材料和方法

3.1 材料

3.1.1 樣品來源。新疆伊犁某種豬場血清109份、扁桃體108份。

3.1.2 試劑與儀器。扁桃體活體采樣器；10ml一次性采血器；美國IDEXX CSFV抗體檢測試劑盒；美國Thermo MK3酶標(biāo)儀；德國ependorf微量移液器；德國1-14K高速、低溫離心機(jī)；美國伯樂熒光定量PCR儀；TaKaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit；CSFV FQ-PCR檢測引物；熒光探針（MGB-P）、Rnase-free H2O、TaKara One Step PrimeScript? RT-PCR Kit。

3.2 方法

3.2.1 豬瘟抗體檢測

按照美國IDEXX CSFV Ab試劑盒說明操作，并采用Herdchek軟件判定結(jié)果。

3.2.2 豬瘟病原的檢測

3.2.2.1 病毒RNA提取 按TaKara 提取盒RNA說明操作。

3.2.2.2 按下列組分配制FQ RT-PCR反應(yīng)液（反應(yīng)液配制最好在冰上進(jìn)行）。

試劑 使用量 終濃度2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ 12.5 ul 1× TaKaRa Ex Taq HS（5U/ul） 0.5 ul PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ 0.5 ul PCR Forward Primer（10 um） 0.5 ul PCR Reverse Primer（10 um） 0.5 ul TaqMan Probe 1 ul Total RNA 2 ul RNase Free dH2O 7.5 ul Total 25 ul

3.2.2.3 反應(yīng)條件：42℃ 5min，95℃ 10s ×1；88℃ 8s，60℃ 35s，×40。

3.2.3 結(jié)果判定

陽性對照CT≤35，并具有典型的擴(kuò)增曲線；陰性對照無典型的擴(kuò)增曲線，實驗成立。樣品CT≤35，并具有典型的擴(kuò)增曲線判為陽性，否則判為陰性。

4 結(jié)果

4.1 豬瘟抗體ELISA檢測結(jié)果（見表1）

4.2 豬瘟病原FQ RT-PCR檢測結(jié)果（見表2）

5 結(jié)果分析與討論

5.1 目前，世界上主要發(fā)達(dá)國家已經(jīng)通過凈化措施消滅了豬瘟。我國雖然采取了全國性的強制免疫措施，大規(guī)模的疫情暴發(fā)得到了有效控制，但是各地散發(fā)流行仍然十分普遍，尤其是“帶毒母豬綜合征”妊娠母豬的感染率可達(dá)43%。這是造成我國豬瘟長期持續(xù)存在和散發(fā)流行惡性循環(huán)的主要根源，這種持續(xù)帶毒現(xiàn)象對豬瘟的控制產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響[4，5]。

表1 三次采集豬血清樣品檢測豬瘟抗體結(jié)果

表2 三次采集豬扁桃體樣品檢測豬瘟病原結(jié)果

5.2 扁桃體是豬感染豬瘟病毒最先定居的器官，也是含毒量最多和帶毒時間最長的器官。研究表明，F(xiàn)Q RT-PCR 方法具有快速、敏感、高通量等優(yōu)點[6]。因此，采集扁桃體樣品進(jìn)行FQ RT-PCR檢測，對豬瘟病毒感染可進(jìn)行早期診斷與凈化。

5.3 豬瘟病毒凈化，首先要確保種公豬豬瘟病毒陰性，以防止在配種時引起的交叉感染。因此，必須逐頭采集種公豬的扁桃體和血清，進(jìn)行豬瘟病毒篩查。其次，通過日常對種豬生產(chǎn)性能記錄的分析，對發(fā)過病或產(chǎn)仔少、流產(chǎn)、死產(chǎn)等母豬作為重點采集樣品進(jìn)行病原檢測，可以減少檢測的盲目性，提高檢出率，加快豬瘟的凈化進(jìn)程。通過第三次檢測結(jié)果可以看出，經(jīng)2次檢測淘汰病原學(xué)陽性種豬，使種豬的豬瘟病原學(xué)陽性率由13%降到0%。從2014年起，該豬場的仔豬成活率已由凈化前的60%左右提高到95%，到達(dá)了凈化要求。

5.4 從本試驗結(jié)果可以看出，在采取嚴(yán)格消毒、引進(jìn)種豬的隔離檢疫、人員管理、高效豬瘟弱毒疫苗強化免疫等生物安全措施及做好其他豬病防治的基礎(chǔ)上，定期進(jìn)行2～3次有目的的豬瘟病原學(xué)和血清學(xué)檢測，堅決淘汰病原檢測陽性和多次免疫抗體不合格種豬，是規(guī)模養(yǎng)豬場進(jìn)行豬瘟凈化的有效方式。

[1] 陳溥言．獸醫(yī)傳染病學(xué)［M］.5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：210-216.

[2] 寧宜寶，亢文華，王琴. 非典型性豬瘟及其預(yù)防控制[J]. 河北畜牧獸醫(yī)，2005，21（7）：11- 15.

[3] 郝飛，湯德元，羅險峰，等.規(guī)模化豬場豬瘟凈化措施的研究[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2013，45（7）：89- 92.

[4] 邱惠深.豬瘟的持續(xù)性感染的根源在于帶毒母豬[J].養(yǎng)豬，2004（3）：29-30.

[5] 王琴.豬瘟流行現(xiàn)狀及中國豬瘟凈化策略[J].中國豬業(yè)，2012（10）：45-47.

[6] 劉俊，王琴，范學(xué)政，等.豬瘟病毒野毒株TaqMan-MGB熒光定量PCR鑒別方法的建立與應(yīng)用[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42（12）：4366-4371.

Trial Eradication of Classical Swine Fever in a Breeding Pig Farm in Xinjiang

Wang Yuan1，Liu Hongjie1，Shah IIan Guli2，Wang Changjiang2，Wang Qin3
（1.Xinjiang Tiankang animal husbandry science and technology limited company，Changji 831100，Xinjiang；2.Animal Science Academy of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830000，Xinjiang；3.China Institute of Veterinary Drug Control，Bejing，100081）

[Objective] For effective control of classical swine fever, the eradication scheme was explored to provide a model for eradication of classical swine fever. [Method] Samples of tonsils and corresponding sera were collected from pigs two times with an interval of half year in one breeding pig farm，and were detected for CSF pathogen and antibody respectively by RT-PCR（FQ RT-PCR）and ELISA，and the pathogen positive pigs were eliminated. Meanwhile, an effective vaccination was carried out and the bio-safety measures and other disease prevention and control measures were improved. [Result] CSFV infection rate in the pig farm was dropped to 0%（0 / 40） from 13%（3 / 23），the survival rate of piglets increased from 60% to 95%. [Conclusion] CSF was successfully eradicated in the breeding pig farm and an effective CSF eradication model was established for breeding pig farms.

breeding pig farm；classical swine fever；control；eradication

S858.28

B

1005-944X（2015）03-0008-03

新疆維吾爾自治區(qū)科技支疆項目“新疆部分種豬場豬瘟凈化技術(shù)的集成研究與示范”（201291150）

王長江