蘇強(qiáng)， 李浪， 周游， 王江友

程序性細(xì)胞死亡因子4與豬冠狀動(dòng)脈微栓塞致心功能損傷的關(guān)系及機(jī)制研究*

蘇強(qiáng)， 李浪， 周游， 王江友

目的：探討巴馬系小型豬冠狀動(dòng)脈（冠脈）微栓塞（CME）致心功能損傷與程序性細(xì)胞死亡因子4（PDCD4）表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及關(guān)系。

方法：60頭巴馬系小型豬經(jīng)微導(dǎo)管左前降支注入微栓塞球構(gòu)建冠脈微栓塞組；注射生理鹽水構(gòu)建假手術(shù)組，每組小型豬均為30只。每組小型豬隨機(jī)分為0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h 六個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)觀察（每個(gè)時(shí)間點(diǎn)小型豬均為5頭）。應(yīng)用心臟超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心功能指標(biāo)；組織病理切片蘇木素-伊紅（HE） 染色和蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸（HBFP）染色進(jìn)行梗死區(qū)域測(cè)量；熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（PCR） 檢測(cè)心肌組織PDCD4與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）mRNA表達(dá)；蛋白免疫印跡法（Western blot） 檢測(cè)心肌組織PDCD4與TNF-α蛋白表達(dá)。

結(jié)果：超聲心動(dòng)圖參數(shù)顯示，冠脈微栓塞組除0 h、24 h外其余時(shí)間點(diǎn)左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）均較假手術(shù)組明顯降低（P＜0.05），伴隨著LVEF顯著下降，心臟超聲心動(dòng)圖表現(xiàn)為左心室短軸縮短率（LVFS）和心排血量（CO）下降及左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）增加。病理學(xué)顯示，冠脈微栓塞組3 h、6 h、9 h、12 h、24 h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)均可見微梗死灶，但各時(shí)間點(diǎn)之間的微梗死面積比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。熒光定量PCR結(jié)果顯示，冠脈微栓塞組心肌組織PDCD4與TNF-α mRNA表達(dá)都是在3 h開始升高，9 h達(dá)高峰，12 h和24 h下降（P＜0.05）；與假手術(shù)組比較，冠脈微栓塞組除0 h外其他時(shí)間點(diǎn)心肌組織PDCD4與TNF-α mRNA的表達(dá)量均顯著增加（均P＜0.05）。蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，冠脈微栓塞組心肌組織PDCD4與TNF-α的蛋白表達(dá)都是在3 h開始升高，9 h達(dá)高峰，12 h和24 h下降（P＜0.05）；與假手術(shù)組比較，冠脈微栓塞組除0 h外其他時(shí)間點(diǎn)心肌組織PDCD4與TNF-α蛋白表達(dá)水平均顯著增加（P均＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)論：PDCD4參與了冠脈微栓塞致心功能的損傷，并呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間變化規(guī)律，可能是通過調(diào)控心肌TNF-α的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。

冠狀動(dòng)脈微栓塞；血管內(nèi)介入；心功能；程序性細(xì)胞死亡因子4；

Methods: A total of 60 Bema miniature pigs were randomly divided into 2 groups: CME group, the animal model was established by injecting polyethylene microspheres into pigs’ left anterior descending artery (LAD) and Sham group, the animals received normal saline injection in LAD. n=30 in each group. Each group was further divided into 5 time points as 0h, 3h, 6h, 9h, 12h and 24h to observe the relevant indexes, n=5 in each time point. The myocardial function was detected by echocardiography, the area of infarction was examined by HIM and HBFP

staining, the expressions of mRNA and protein of myocardial PDCD4 and TNF-α were measured by RT-PCR and Western blot analysis at different time points in each group.

Results:①Compared with Sham group, CME group presented decreased LVEF at each time point except for 0h, P＜0.05, and with LVEF decreasing, the FS and CO reduced, while LVEDD increased accordingly. ②In CME group, the micro infraction could be found at 3h, 6h, 9h, 12h and 24h time points, and the areas of infarction were similar among different time points, P＞0.05. ③In CME group, the mRNA expression of PDCD4 and TNF-α increased at 3h time point, reached the maximum at 9h and decreased at 12h and 24h time points, P＜0.05. Compared with Sham group, CME group had increased mRNA expression of PDCD4 and TNF-α at each point except for 0h, all P＜0.05. ④In CME group, the protein expression of PDCD4 and TNF-α increased at 3h time point, reached the maximum at 9h and decreased at 12h and 24h time points, P＜0.05. Compared with Sham group, CME group had increased protein expression of PDCD4 and TNF-α at each point except for 0h, all P＜0.05.

Conclusion: PDCD4 was involved in CME incurred myocardial dysfunction as time changing in experimental pigs, and this might be carried out by regulating myocardial TNF-α expression.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:176.)

冠狀動(dòng)脈（冠脈）微栓塞是急性冠脈綜合征（ACS）和經(jīng)皮冠脈介入治療（PCI）過程中由于粥樣硬化斑塊碎屑的脫落引起的遠(yuǎn)端微血管栓塞的棘手并發(fā)癥，可直接導(dǎo)致“無(wú)血流”或“慢血流”發(fā)生，是獨(dú)立的遠(yuǎn)期預(yù)后不良和主要心臟不良事件發(fā)生的強(qiáng)烈預(yù)測(cè)因子[1，2]。目前研究表明冠脈微栓塞致心功能損傷的機(jī)制主要與心肌局部炎癥有關(guān)，尤其與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）密切相關(guān)，但其具體的調(diào)控機(jī)制尚不明了[3]。程序性細(xì)胞死亡因子4 （PDCD4）是近年來新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，不僅對(duì)細(xì)胞的程序性死亡進(jìn)行重要調(diào)節(jié)，而且對(duì)于炎癥發(fā)生也有重要作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定性心絞痛患者PCI術(shù)后PDCD4表達(dá)明顯上調(diào)，促使TNF-α水平升高，介導(dǎo)了PCI術(shù)后心肌的炎癥反應(yīng)[5]。由于冠脈微栓塞是PCI過程中常見的并發(fā)癥，我們?cè)陬A(yù)實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)冠脈微栓塞后豬心肌PDCD4表達(dá)水平明顯升高。因此，PDCD4很有可能參與了冠脈微栓塞致心功能的損傷。為此，本研究擬探討冠脈微栓塞后PDCD4表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，及其與冠脈微栓塞后心功能變化的關(guān)系，為冠脈微栓塞致心功能損傷的分子機(jī)制提供一個(gè)新的認(rèn)識(shí)途徑。

1 材料與方法

材料：42 μm微栓塞球（Biosphere Medical Inc.，美國(guó)）；TRNzol-A+總RNA提取試劑（天根生化科技有限公司，中國(guó)）；RevertAidTMFistStrand cDNA Synthesis kit（Fermentas，立陶宛）；TNF-α mRNA、 PDCD4 mRNA、β肌動(dòng)蛋白（β-actin） mRNA引物（廣州賽哲生物科技有限公司，中國(guó)），羊抗豬PDCD4多克隆抗體（LifeSpan BioSciences，美國(guó)）；兔抗豬TNF-α多克隆抗體（Abcam，美國(guó)）；兔抗3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）多克隆IgG抗體（Proteintech Group，美國(guó)）。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康巴馬系小型豬60頭，雌雄不拘，體重25～30 kg，由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院提供。

模型的建立與分組：巴馬系小型豬60頭，分為冠脈微栓塞組（30頭）和假手術(shù)組（30頭）。參考Ma等[6]的方法，先經(jīng)鹽酸氯胺酮注射液（5～10 mg/kg）肌內(nèi)注射基礎(chǔ)麻醉，約3～5 min后實(shí)驗(yàn)豬出現(xiàn)站立不穩(wěn)，倒地后沖洗干凈，常規(guī)消毒、鋪巾，5?號(hào)頭皮針穿刺豬耳緣靜脈成功后留置并靜注地西泮作為維持麻醉，用量為0.5 mg/（kg·h）。分離穿刺一側(cè)股動(dòng)脈，植入6F動(dòng)脈鞘，經(jīng)鞘注入肝素200 U/kg達(dá)肝素化，隨后以100 U/（kg·h）維持。行冠脈造影，并經(jīng)指引導(dǎo)管送入微導(dǎo)管至左前降支分出第一對(duì)角支后的遠(yuǎn)端，經(jīng)微導(dǎo)管注入微栓塞球建立豬冠脈微栓塞模型，注入微栓塞球10萬(wàn)個(gè)[將微球懸浮在含十二烷基硫酸鈉（SDS）的1.5 ml生理鹽水中]。術(shù)畢肌注80萬(wàn)單位青霉素預(yù)防感染，建成冠脈微栓塞模型。同樣操作，以注射生理鹽水1.5 ml為假手術(shù)組。冠脈微栓塞組、假手術(shù)組小型豬分別隨機(jī)分為0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h 六個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察（每個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)5頭小型豬）。

小型豬心功能的檢測(cè)：分別于術(shù)后0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h經(jīng)超聲心動(dòng)圖檢測(cè)小型豬左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室舒張末期內(nèi)徑

（LVEDd）、左心室短軸縮短率（LVFS）和心排血量（CO）。探頭頻率為12 MHz。所有超聲心動(dòng)圖檢查均由一位具有豐富超聲心動(dòng)圖檢查經(jīng)驗(yàn)的?？漆t(yī)生完成。

組織取材及樣品處理：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的5頭小型豬檢測(cè)心功能后，在麻醉狀態(tài)下，經(jīng)耳緣靜脈注入10%氯化鉀處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，開胸，取出心臟，平行于房室溝將心室切成6層（層厚5～8 mm），取左心室前壁心肌300 mg固定于4%中性甲醛，制備病理切片后行蘇木素-伊紅（HE）染色和蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸（HBFP） 染色檢測(cè)心肌微梗死面積。

心肌微梗死面積測(cè)量：蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色是診斷早期心肌缺血的一種重要染色方法，缺血心肌、紅細(xì)胞呈紅染，正常心肌胞漿黃染、胞核藍(lán)染。DMR+Q550病理圖像分析儀檢查，每張?zhí)K木素堿性復(fù)紅苦味酸染色切片隨機(jī)選取5個(gè)視野（×100），使用Leica Qwin分析軟件平面法測(cè)量梗死區(qū)域，并表示為占總分析切片的面積百分比，取平均值[7]。

熒光定量PCR檢測(cè)PDCD4與TNF-α mRNA表達(dá)量：按照Trizol操作說明提取左心室心肌組織的總RNA，并用Nanodrop分光光度計(jì)測(cè)量其濃度，采用cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄。采用SYBR GreenⅠ熒光標(biāo)記法檢測(cè)PCR產(chǎn)物，PDCD4引物：上游：5'-GCTACGGTGCTCCTGAGTAT-3'，下游：5'-GGCAATGTTCAGCTTCCGAT-3'；TNF-α引物：上游：5'-GGCCCAAGGACTCAGATCAT-3'，下游：5'-GCATACCCACTCTGCCATTG-3'；β-actin引物：上游：5'-CACCTTCTACAACGAGCTGC-3'，下游：5'-TCATCTTCTCACGGTTGGCT-3'，按試劑盒說明設(shè)置反應(yīng)體系及參數(shù)，每個(gè)樣本均做復(fù)孔檢測(cè)，同時(shí)每次反應(yīng)均設(shè)置陰性孔。PCR產(chǎn)物經(jīng)過測(cè)序檢測(cè)。結(jié)果采用2-ΔΔCT法比較。

蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測(cè)心肌組織中PDCD4與TNF-α蛋白表達(dá)：用組織裂解液提取心肌組織總蛋白，采用Lowry法測(cè)定蛋白濃度[5]，取50 μg蛋白樣品，10%SDS-PAGE膠電泳，100 mA×2 h濕轉(zhuǎn)將蛋白條帶轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。封閉液室溫封閉1 h，TBST（含0.05%Tween20的TBS緩沖液，pH 7.5）洗脫后，加入羊抗豬PDCD4多克隆抗體（1：1000）或兔抗豬TNF-α多克隆抗體（1：200）室溫孵育2 h，以兔抗3-磷酸甘油醛脫氫酶多克隆IgG抗體（1：2000）作內(nèi)參照，洗膜后各以相應(yīng)的二抗孵育1 h?？乖?抗體復(fù)合物用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯示，暗室X光膠片曝光，數(shù)碼相機(jī)拍照，采用Bio-Rad公司的Gel Doc2000凝膠圖像中專用軟件分析目標(biāo)條帶的積分吸光度值（Intergrated absorbance，IA=平均吸光度×面積），經(jīng)3-磷酸甘油醛脫氫酶校正后，分別以PDCD4、TNF-α IA值/3-磷酸甘油醛脫氫酶IA值反映PDCD4、TNF-α相對(duì)蛋白表達(dá)量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小型豬心功能指標(biāo)的變化情況

與假手術(shù)組相比，冠脈微栓塞組除0 h外其他各時(shí)間點(diǎn)心功能均降低，表現(xiàn)為心肌收縮功能障礙和左心室擴(kuò)張即LVEF、LVFS、CO下降，在6 h、9 h、12 h下降顯著（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LVEDd在 6 h、9 h、12 h增加顯著（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；冠脈微栓塞組LVEF、LVFS、CO在3 h、6 h、9 h進(jìn)行性下降，但12 h和24 h開始有恢復(fù)趨勢(shì)，24小時(shí)基本恢復(fù)，24 h與本組6 h、9 h、12 h比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表1

表1 小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心功能指標(biāo)的變化

表1 小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心功能指標(biāo)的變化

注：LVEF：左心室射血分?jǐn)?shù) CO：心排血量 LVEDd：左心室舒張末期內(nèi)徑 LVFS：左心室短軸縮短率。與假手術(shù)組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較aP＜0.05；與同組6 h、9 h 、12 h 時(shí)間點(diǎn)比較bP＜0.05

?

2.2 冠脈微栓塞病理學(xué)觀察

蘇木素-伊紅染色和蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染

色結(jié)果：蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色示假手術(shù)組偶見心內(nèi)膜下缺血，未見明顯的梗死灶。冠脈微栓塞組3 h、6 h、9 h、12 h、24 h均可見多發(fā)微梗死灶，多為楔形，呈局灶性分布，以心內(nèi)膜下和左心室多見（圖1）。蘇木素-伊紅染色示微梗死灶內(nèi)心肌細(xì)胞核溶解或消失，胞漿紅染，周邊心肌水腫、變性，周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和紅細(xì)胞滲出，微動(dòng)脈內(nèi)可見微栓塞球（圖2）。冠脈微栓塞組 3 h、6 h、9 h、12 h、24 五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的梗死面積分別為（8.59±3.03）%、（8.82±2.95）%、（9.23±3.59）%、（9.07±3.44）%、（9.16±3.24）%，各組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

圖1 小型豬蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色示冠狀動(dòng)脈微栓塞組心肌微梗死灶（×200）

圖2 小型豬蘇木素-伊紅染色示冠狀動(dòng)脈微栓塞組局部心肌微梗死灶（×200）

2.3 各組PDCD4 mRNA與TNF-α mRNA表達(dá)水平的變化

與假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)比較，冠脈微栓塞組除0 h外其他相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)小型豬心肌細(xì)胞中PDCD4與TNF-α mRNA的表達(dá)水平均顯著增加（P均＜0.05）；冠脈微栓塞組PDCD4與TNF-α mRNA的表達(dá)水平都是在3 h開始升高，9 h達(dá)高峰，12 h和24 h下降（P均＜0.05）。圖3、4

圖3 熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)分析小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心肌程序性細(xì)胞死亡因子4 mRNA表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化

圖4 熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)分析小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心肌腫瘤壞死因子-α mRNA表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化

2.4 各組PDCD4與TNF-α蛋白表達(dá)水平的變化

蛋白免疫印跡定量分析顯示：與假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)比較，冠脈微栓塞組除0 h外其他相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)小型豬心肌細(xì)胞中PDCD4（24 h除外）與TNF-α相對(duì)蛋白表達(dá)水平均顯著增加（P均＜0.05）；冠脈微栓塞組PDCD4與TNF-α的蛋白表達(dá)水平都是在3 h開始升高，9 h達(dá)高峰，12 h和24 h下降（P均＜0.05）。圖5、6

2.5 小豬冠脈微栓塞后心肌細(xì)胞PDCD4與TNF-α表達(dá)與LVEF相關(guān)性分析

心肌細(xì)胞PDCD4表達(dá)水平與LVEF呈顯著負(fù)相

關(guān)（r=-0.618，P=0.000），TNF-α表達(dá)水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)（r=-0.692，P=0.000），PDCD4表達(dá)水平與TNF-α水平呈正相關(guān)（r =0.720，P=0.000）。

圖5 蛋白免疫印跡分析小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心肌程序性細(xì)胞死亡因子4蛋白表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化

圖6 蛋白免疫印跡分析小型豬冠狀動(dòng)脈微栓塞后心肌腫瘤壞死因子-α蛋白表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化

3 討論

冠脈微栓塞是經(jīng)皮冠脈介入治療過程中棘手的并發(fā)癥，一旦發(fā)生可顯著影響患者預(yù)后，目前尚無(wú)有效的防治方法[8]。研究表明，冠脈微栓塞后急性期局部心肌出現(xiàn)微梗死灶，心功能呈進(jìn)行性下降[9]。Skyschally等[10]發(fā)現(xiàn)，通過向狗的冠脈內(nèi)注入微栓塞球，結(jié)果顯示冠脈血流的短暫減少即刻可恢復(fù)正常，但局部心肌的收縮功能卻進(jìn)行性地下降，冠脈微栓塞致心功能損傷的機(jī)制并非冠脈血流減少。近年研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α在冠脈微栓塞致心功能損傷中起關(guān)鍵作用[11]。趙獻(xiàn)明等[3]研究發(fā)現(xiàn)冠脈微栓塞后TNF-α、白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-10等炎癥因子mRNA表達(dá)水平呈動(dòng)態(tài)變化，并與左心室功能改變密切相關(guān)。Dorge等[12]在犬的冠脈內(nèi)注射微栓塞球前，分別給予TNF-α及其抗體干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-α能加劇微栓子所致心肌收縮功能障礙，而抗TNF-α抗體則能一定程度增強(qiáng)心肌細(xì)胞對(duì)微血管栓塞的耐受程度，減少心肌收縮功能障礙。因此，TNF-α水平表達(dá)升高是冠脈微栓塞后致心功能損傷的中心環(huán)節(jié)，但確切上游調(diào)控機(jī)制尚不明了。

本研究中，發(fā)現(xiàn)冠脈微栓塞后，TNF-α無(wú)論是mRNA水平還是蛋白表達(dá)水平都顯著的升高，并且呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)的變化，該變化與心功能的變化呈明顯的負(fù)相關(guān)，說明TNF-α在冠脈微栓塞致心功能損傷中起到關(guān)鍵作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)冠脈微栓塞組各時(shí)間點(diǎn)之間的微梗死面積比較并無(wú)顯著差異，微梗死面積的大小與梗死的時(shí)間也無(wú)關(guān)，因此，可以排除由于微梗死面積大小的差異而導(dǎo)致的心功能進(jìn)行性下降。

PDCD4是近年新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制因子，不僅對(duì)細(xì)胞的程序性死亡進(jìn)行重要調(diào)節(jié)，而且對(duì)于炎癥發(fā)生也有重要作用。Hilliard等[13]研究顯示，敲除小鼠PDCD4基因后，小鼠抵抗炎癥的能力增加，淋巴細(xì)胞分泌IL-10、IL-4炎癥因子明顯增多，并抑制TNF-α產(chǎn)生。我們?cè)谂R床研究中發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定性心絞痛患者經(jīng)皮冠脈介入治療術(shù)后PDCD4表達(dá)明顯上調(diào)，促使TNF-α水平升高，介導(dǎo)了經(jīng)皮冠脈介入治療術(shù)后心肌的炎癥反應(yīng)[5]。既然PDCD4參與了經(jīng)皮冠脈介入治療術(shù)后TNF-α的調(diào)控，TNF-α水平升高又是冠脈微栓塞致心功能損傷的主要因素，因此我們推測(cè)冠脈微栓塞后PDCD4很有可能參與了TNF-α水平的調(diào)控，并進(jìn)而導(dǎo)致心功能的損傷。

本研究中發(fā)現(xiàn)，冠脈微栓塞后，與假手術(shù)組相比，PDCD4無(wú)論是基因水平還是蛋白水平都顯著的升高，并且呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，并且與心肌TNF-α的

表達(dá)呈明顯的正相關(guān)，與心功能的變化呈明顯的負(fù)相關(guān)。因此，進(jìn)一步證實(shí)了我們的設(shè)想，PDCD4參與了冠脈微栓塞后致心功能的損傷，很有可能是通過調(diào)控心肌TNF-α的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。

研究表明，PDCD4的表達(dá)受多種不同因素的調(diào)節(jié)。在人自然殺傷細(xì)胞和T細(xì)胞中，PDCD4經(jīng)IL-12作用后其表達(dá)水平顯著增加[14]。在分子生物學(xué)水平上，微小核糖核酸-21可以特異性結(jié)合PDCD4 mRNA 3′-UTR，從而抑制PDCD4的翻譯[15，16]。在蛋白質(zhì)水平上，蛋白激酶B和核糖體蛋白S6激酶1（S6K1）可以催化PDCD4蛋白發(fā)生磷酸化，從而促進(jìn)其發(fā)生降解[17，18]。因此，冠脈微栓塞后可能是出現(xiàn)上述一種或多種方式調(diào)控PDCD4的表達(dá)，促使TNF-α的分泌增多，加重心功能的惡化。

本研究存在的不足：冠脈微栓塞建模使用的微栓塞劑為塑料微球，與臨床實(shí)際動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂形成的富有血小板、紅細(xì)胞等具有生物活性的栓塞物質(zhì)不同，可能與斑塊破裂后導(dǎo)致的冠脈微栓塞的實(shí)際病理生理改變有一定的差距。

綜上所述，PDCD4參與了冠脈微栓塞致心功能的損傷，并呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間變化規(guī)律，可能是通過調(diào)控心肌TNF-α的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本研究結(jié)果，冠脈微栓塞后在9 h內(nèi)抑制PDCD4表達(dá)可能會(huì)是減少冠脈微栓塞致心功能損傷的重要手段，并有望成為冠脈微栓塞致心功能損傷防治的新藥研發(fā)靶點(diǎn)。

[1] Bose D, von Birgelen C, Zhou XY, et al. Impact of atherosclerotic plaque composition on coronary microembolization during percutaneous coronary interventions. Basic Res Cardiol, 2008, 103: 587-597.

[2] Bahrmann P, Werner GS, Heusch G, et al. Detection of coronary microembolization by Doppler ultrasound in patients with stable angina pectoris undergoing elective percutaneous coronary interventions. Circulation, 2007, 115: 600-608.

[3] 趙獻(xiàn)明, 李浪, 陸永光, 等. 冠狀動(dòng)脈微栓塞后大鼠心肌組織炎癥細(xì)胞因子表達(dá)和心功能的動(dòng)態(tài)變化及關(guān)系. 中國(guó)循環(huán)雜志, 2009, 24: 258-262.

[4] Wang Q, Dong Z, Liu X, et al. Programmed cell death-4 deficiency prevents diet-induced obesity, adipose tissue inflammation, and insulin resistance. Diabetes, 2013, 62: 4132-4143.

[5] Su Q, Li L, Liu Y, et al. Effect of Intensive atorvastatin therapy on periprocedural PDCD4 expression in CD4+ T lymphocytes of patients with unstable angina undergoing percutaneous coronary intervention. Cardiology, 2014, 127: 169-175.

[6] Ma JY, Qian JY, Jin H, et al. Acute hyperenhancement on delayed contrast-enhanced magnetic resonance imaging is the characteristic sign after coronary microembolization. Chin Med J, 2009, 122: 687-691.

[7] Li L, Su Q, Wang Y, et al. Effect of atorvastatin (Lipitor) on myocardial apoptosis and caspase-8 activation following coronary microembolization. Cell Biochem Biophys, 2011, 61: 399-406.

[8] Otto S, Seeber M, Fujita B, et al. Microembolization and myonecrosis during elective percutaneous coronary interventions in diabetic patients: an intracoronary Doppler ultrasound study with 2-year clinical follow-up. Basic Res Cardiol, 2012, 107: 289.

[9] Thielmann M, Dorge H, Martin C, et al. Myocardial dysfunction with coronary microembolization: signal transduction through a sequence of nitric oxide, tumor necrosis factor-alpha, and sphingosine. Circ Res, 2002, 90: 807-813.

[10] Skyschally A, Gres P, Hoffmann S, et al. Bidirectional role of tumor necrosis factor-alpha in coronary microembolization: progressive contractile dysfunction versus delayed protection against infarction. Circ Res, 2007, 100: 140-146.

[11] Li L, Qu N, Li DH, et al. Coronary microembolization induced myocardial contractile dysfunction and tumor necrosis factor-alpha mRNA expression partly inhibited by SB203580 through a p38 mitogen-activated protein kinase pathway. Chin Med J, 2011, 124: 100-105.

[12] Dorge H, Neumann T, Behrends M, et al. Perfusion-contraction mismatch with coronary microvascular obstruction: role of inflammation. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2000, 279: H2587-2592.

[13] Hilliard A, Hilliard B, Zheng SJ, et al. Translational regulation of autoimmune inflammation and lymphoma genesis by programmed cell death 4. J Immunol, 2006, 177: 8095-8102.

[14] Azzoni L, Zatsepina O, Abebe B, et al. Differential transcriptional regulation of CD161 and a novel gene, 197/15a, by IL-2, IL-15, and IL-12 in NK and T cells. J Immunol, 1998, 161: 3493-3500.

[15] Zhang Z, Zha Y, Hu W, et al. The autoregulatory feedback loop of microRNA-21/programmed cell death protein 4/activation protein-1 (MiR-21/PDCD4/AP-1) as a driving force for hepatic fibrosis development. J Biol Chem, 2013, 288: 37082-37093.

[16] 蘇強(qiáng). 微小核糖核酸-21與缺血性心臟病關(guān)系的研究進(jìn)展. 中國(guó)循環(huán)雜志, 2013, 28: 390-392.

[17] Dorrello NV, Peschiaroli A, Guardavaccaro D, et al. S6K1- and betaTRCP-mediated degradation of PDCD4 promotes protein translation and cell growth. Science, 2006, 314: 467-471.

[18] Schmid T, Jansen AP, Baker AR, et al. Translation inhibitor Pdcd4 is targeted for degradation during tumor promotion. Cancer Res, 2008, 68: 1254-1260.

Relationship Between Coronary Micro Embolism Incurred Myocardial Dysfunction and Dynamic Changes of PDCD4 Expression in Experimental Pigs

SU Qiang, LI Lang, Zhou You, Wang Jiang-you.
Department o f Cardiology, First Affliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning (530021), Guangxi, China

Objective: To explore the relationship between coronary micro embolism (CME) incurred myocardial dysfunction and dynamic changes of a programmed cell death 4 (PDCD4) expression in experimental pigs.

Coronary micro embolism; Percutaneous coronary intervention; Cardiac function; Programmed cell death 4

2014-06-23)

（編輯：常文靜）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81260042）；2014 年廣西研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（YCBZ2014023）

530021 廣西壯族自治區(qū)南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科

蘇強(qiáng) 博士研究生 主要研究方向?yàn)楣谛牟〗槿胫委熂捌浞乐?Email：suqiang1983@foxmail.com 通訊作者：李浪 Email：drlilang@163.com

R54

A

1000-3614（2015）02-0176-06

10.3969/j.issn.1000-3614.2015.02.020