王琳娜，陳常勇，陳小永，郭存霞，陳香美

[1.河南省中醫(yī)院腎病科，河南 鄭州 450002；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院放射科，湖南 長(zhǎng)沙 410008；3.中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院腎臟病科（腎臟疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），北京 100853]

·論著·

當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)尿毒癥大鼠心肌纖維化組織瞬時(shí)受體電位M7通道表達(dá)及膠原蛋白合成的影響*

王琳娜1，陳常勇2，陳小永1，郭存霞1，陳香美3

[1.河南省中醫(yī)院腎病科，河南 鄭州 450002；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院放射科，湖南 長(zhǎng)沙 410008；3.中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院腎臟病科（腎臟疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），北京 100853]

目的觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯（DBD）對(duì)尿毒癥大鼠心肌組織瞬時(shí)受體電位M7通道（TRPM7）表達(dá)及膠原蛋白合成的影響，探討DBD抗尿毒癥心肌纖維化（UMF）作用機(jī)制。方法采用腺嘌呤核苷酸灌胃制作尿毒癥模型，雄性SD大鼠32只，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、依那普利組及DBD組。依那普利和DBD組自造模第1天開(kāi)始分別以依那普利10 mg/（kg·d）或DBD 6 g/（kg·d）灌胃；直至第21天，模型組和對(duì)照組以等體積的生理鹽水灌胃。造模后第21天處死大鼠，留取血液標(biāo)本檢測(cè)血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）和心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnⅠ）。留取心肌標(biāo)本，行蘇木精-伊紅染色（HE）和Masson染色，觀察各組大鼠心肌組織病理改變。采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)心肌組織TRPM7 mRNA和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）mRNA的表達(dá)。應(yīng)用Western blot檢測(cè)心肌組織TRPM7、Ⅰ型膠原蛋白（ColⅠ）和Ⅲ型膠原蛋白（ColⅢ）的表達(dá)。結(jié)果 與對(duì)照組比較，模型組大鼠心肌病理評(píng)分增加，心肌間質(zhì)膠原蛋白相對(duì)面積增大，血清BUN、Scr和（cTnⅠ）水平提高，TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，心肌組織TRPM7、ColⅠ和ColⅢ的表達(dá)增強(qiáng)。與模型組比較，經(jīng)依那普利和DBD治療后，心肌組織病理評(píng)分和心肌間質(zhì)膠原蛋白相對(duì)面積縮小，血清BUN、Scr和cTnⅠ水平下降，TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)減弱，心肌組織TRPM7、ColⅠ和ColⅢ的表達(dá)減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與依那普利組比較，DBD組能明顯降低TGF-β1mRNA的表達(dá)。結(jié)論DBD可減輕尿毒癥大鼠心肌纖維化程度，這一作用與抑制心肌組織TRPM7表達(dá)，從而抑制膠原蛋白合成有關(guān)。

心肌纖維化；尿毒癥；瞬時(shí)受體電位M7通道；當(dāng)歸補(bǔ)血湯

心血管疾病是慢性腎疾病的常見(jiàn)并發(fā)癥，尿毒癥心肌纖維化（uremic myocardial fibrosis，UMF）是在慢性腎疾病基礎(chǔ)上并發(fā)心肌肥大和心室重塑的主要病理基礎(chǔ)[1]。成纖維細(xì)胞是主要心肌細(xì)胞之一，占心肌細(xì)胞總量的75%。近期研究表明，鈣離子通道在心肌成纖維細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）成分的合成中起重要作用[2]。瞬時(shí)受體電位通道（transient receptor potential，TRP）是Ca2+、Mg2+陽(yáng)離子信號(hào)通道，其在心肌成纖維細(xì)胞中廣泛表達(dá)，瞬時(shí)受體電位M7通道（transient receptor potential melastatin 7，TRPM7）在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β1）信號(hào)通路中也起重要的調(diào)節(jié)作用。那么TRPM7在UMF組織中的表達(dá)如何，當(dāng)歸補(bǔ)血湯（danggui buxue decoction，DBD）對(duì)UMF和TRPM7表達(dá)有無(wú)影響，目前未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)UMF大鼠模型觀察TRPM7、TGF-β1、Ⅰ型膠原蛋白（collageⅠ，ColⅠ）及Ⅲ型膠原蛋白（collageⅢ，ColⅢ）表達(dá)的變化，探討DBD抗纖維化作用與TRPM7的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

清潔級(jí)雄性Sprague Dawley大鼠32只，體重180～220 g，由河南省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，分為造模組（24只）和對(duì)照組（8只）。造模組以3%腺嘌呤核苷酸灌胃制備尿毒癥大鼠模型，21 d成模后再分為模型組、DBD組和依那普利組，每組8只大鼠。DBD組自造模第1天開(kāi)始給予DBD 6 g/（kg·d）直至第21天；依那普利組自造模第1天開(kāi)始給予依那普利10 mg/（kg·d）直至第21天；模型組和對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃。

1.2 主要材料

總RNA提取試劑盒（R Neasy Mini Kit試劑盒）購(gòu)自美國(guó)Qiangen公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司，實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，real-time PCR）試劑盒（q-PCR Mixture）購(gòu)自日本TaKaRa公司，熒光探針實(shí)時(shí)定量PCR儀（ABI 7900HT）購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司。real-time PCR所用引物由上海生物工程有限公司合成，大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cardiac troponinⅠ，cTnⅠ）試劑盒購(gòu)自美國(guó)LDI公司，羊抗ColⅠ和羊抗ColⅢ多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruze公司，鼠抗TRPM7單克隆抗體和鼠抗β-actin單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，二抗購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescence，ECL）顯色液購(gòu)自美國(guó)Pierce公司。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.3.1 血肌酐（serum creatinine，Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）及cTnⅠ的檢測(cè)各組大鼠處死，經(jīng)心臟取血2 ml，冰上靜置10 min，4℃離心，取上清液，置入-20℃冰箱保存。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)Scr、BUN水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清中cTnⅠ的含量。

1.3.2 心肌組織蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE）心肌組織以4%多聚甲醛固定，常規(guī)包埋、切片，行HE染色，觀察腎組織病理變化，由高年資病理醫(yī)師進(jìn)行心肌細(xì)胞的光鏡檢查。評(píng)分分3個(gè)部位：右室前乳頭肌連同右室前游離壁、室間隔及左室前乳頭肌連同左室前壁，最后累積記分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0分，無(wú)明顯變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化；1分，散在的小灶性變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化；2分，局灶狀變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化；3分，廣泛的彌漫性變性灶伴大片炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化。

1.3.3 心肌組織Masson染色心肌組織以4%多聚甲醛固定，常規(guī)包埋、切片，Masson染色觀察腎組織膠原蛋白沉積，每例切片低倍鏡下觀察10個(gè)互不重疊的腎小管間質(zhì)視野。計(jì)算每張切片心肌間質(zhì)Masson染色陽(yáng)性面積占整個(gè)視野的百分比，作為心肌膠原蛋白含量的半定量分析。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分為無(wú)著色；1分為輕度，陽(yáng)性面積＜10%；2分為中度，陽(yáng)性面積11%～25%；3分為重度，陽(yáng)性面積26%～50%；4分為極重度，陽(yáng)性面積＞50%。

1.3.4 TRPM7、TGF-β1的RT-PCR檢測(cè)①組織總RNA的提取：按照R Neasy Mini Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)提取組織總RNA，抽提的總RNA用紫外分光光度計(jì)測(cè)光密度值，比值為1.9～2.0。取3μl RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，可見(jiàn)5、18和28 S 3條清晰的RNA帶，提示RNA無(wú)污染和降解。②cDNA的合成：用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，再以該cDNA為模板進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)操作。RT-PCR的引物序列如下，β-actin正向引物：5'-GGCCAACCGTGAAAAGATG A-3'，反向引物：5'-GACCAGAGGCATACAGGGACA A-3'；TGF-β1正向引物：5'-CAACAATTCCTGGCGT TACCTT-3'，反向引物：5'-AAGCCCTGTATTCCGTCT CCTT-3'；TRPM7正向引物：5'-CCGGAATTCCGGAT GAAACCCAAATCCATACCAT-3'，反向引物：5'-CGC GGATCCGCGCTATAACATCAGACGAAGAGAA-3'。③RT-PCR檢測(cè)：在ABI 7900型熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，96孔板加樣，設(shè)計(jì)復(fù)孔和標(biāo)準(zhǔn)曲線，用Se-quence Detection System軟件分析各檢測(cè)樣本的Ct值（達(dá)到一定熒光閾值的循環(huán)數(shù)），計(jì)算2-ΔΔCt，評(píng)價(jià)TGF-β1和TRPM7在心肌組織中的表達(dá)水平。1.3.5心肌組織TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的Western blot檢測(cè)①心肌總蛋白質(zhì)的提取。取組織塊100 mg加入組織總蛋白提取液1 ml勻漿，冰上裂解30 min，4℃、12 000 r/min離心15 min，取上清液，按Bio-rad蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行蛋白定量，取80μl上清加5×變性緩沖液20μl混勻，100℃下變性10 min。②Western blot檢測(cè)。灌制10%分離膠和4%堆積膠，取總蛋白100μg行上樣電泳，電泳結(jié)束后260 mA電轉(zhuǎn)印90 min至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜。封閉液（5%牛奶）搖床上封閉2 h，加入抗TRPM7（1∶100）、ColⅠ（1∶200）、ColⅢ（1∶200）和β-Actin抗體（1∶100），4℃搖床過(guò)夜。洗膜后再加相應(yīng)的二抗，室溫孵育1 h，加ECL液后顯影、定影，以β-actin為內(nèi)參照。將膠片掃描后，采用Quantity One軟件分析各條帶灰度值，將各目的條帶灰度值除以同一標(biāo)本內(nèi)參照β-actin條帶灰度值得到比值，將該比值除以同一膠片上對(duì)照組的比值做為該目的蛋白表達(dá)量的半定量結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清Scr、BUN及cTnⅠ水平

模型組大鼠血清Scr、BUN及cTnⅠ水平較對(duì)照組明顯增高（F=287.122、367.371和90.041，P=0.000）。經(jīng)DBD治療后，大鼠血清SCr、BUN及cTnⅠ水平較模型組明顯降低（F=87.122、67.371和30.041，P= 0.000、0.002和0.005），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)依那普利治療后，大鼠血清SCr、BUN及cTnⅠ水平較模型組明顯降低（F=76.901、69.055和26.621，P=0.000、0.003和0.006），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DBD組和依那普利組大鼠血清Scr、BUN及cTnⅠ水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.124、0.102和0.087，P=0.892、0.900和0.963）。見(jiàn)表1。

2.2 心肌組織病理改變

2.2.1 HE染色對(duì)照組大鼠心肌纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞質(zhì)豐富均勻，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰，未見(jiàn)心肌纖維變性、壞死的病理性改變。模型組大鼠心肌纖維排列紊亂，部分心肌細(xì)胞質(zhì)強(qiáng)嗜伊紅染成深粉紅色，細(xì)胞核固縮變性，核仁消失，心肌間隔明顯增寬，間質(zhì)纖維化，間質(zhì)明顯水腫，可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。依那普利組大鼠心肌與模型組比較，病變程度輕、病變范圍小，心肌纖維排列尚可，結(jié)構(gòu)清晰，少量心肌細(xì)胞質(zhì)強(qiáng)嗜伊紅染成深粉紅色，細(xì)胞核固縮變性，核仁消失，心肌纖維間隔略增寬，間質(zhì)輕度水腫，偶見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。DBD組大鼠心肌與模型組比較，病變程度明顯減輕、心肌纖維排列清晰，心肌纖維間隔略增寬，間質(zhì)輕度水腫，偶見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖1、2。

表1 各組大鼠血清Scr、BUN和cTnⅠ水平比較（n=8±s）

表1 各組大鼠血清Scr、BUN和cTnⅠ水平比較（n=8±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P＜0.01；2）與模型組比較，P＜0.01；3）與依那普利組比較，P＞0.05

組別SCr/（μmol/l）BUN/（mmol/l）cTnⅠ/（ng/ml）對(duì)照組23.00±5.625.12±0.240.12±0.05模型組270.54±95.361）52.28±17.251）0.29±0.031）依那普利組108.94±41.322）21.15±15.642）0.21±0.052）DBD組105.81±65.272）3）22.84±19.372）3）0.20±0.062）3）F值87.12267.37130.041 P值0.0000.0020.005

圖1 各組大鼠心肌組織病理改變（HE×200）

圖2 各組大鼠心肌組織損傷評(píng)分

2.2.2 Masson染色普通光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織Masson染色切片，心肌細(xì)胞呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，膠原蛋白纖維呈綠色。對(duì)照組心肌組織無(wú)膠原蛋白沉積；模型組心肌組織可見(jiàn)大量染成綠色的膠原蛋白纖維；依那普利組和DBD組心肌可見(jiàn)少量染成綠色的膠原蛋白纖維。見(jiàn)圖3、4。

圖3 各組大鼠心肌組織病理改變（Masson×200）

圖4 各組大鼠心肌組織膠原蛋白相對(duì)面積

2.3 Real-time PCR檢測(cè)

模型組大鼠心肌組織TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯增多（F=104.136和167.175，P=0.000）；依那普利組大鼠心肌組織TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)較模型組減少（F=35.091和45.971，P=0.001和0.000）；DBD組大鼠心肌組織TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA的表達(dá)較模型組也減少（F=49.033和77.175，P= 0.001和0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DBD組和依那普利組的TRPM7 mRNA表達(dá)比較（F=1.106，P=0.992），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TGF-β1mRNA的表達(dá)比較（F= 15.274，P=0.041），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠腎組織TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA表達(dá)（n=8±s）

表2 各組大鼠腎組織TRPM7 mRNA和TGF-β1mRNA表達(dá)（n=8±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P＜0.01；2）與模型組比較，P＜0.01；3）與依那普利組比較，P＜0.05

組別例數(shù)TRPM7TGF-β1對(duì)照組61.00±0.051.00±0.03模型組82.54±1.061）4.32±1.351）依那普利組81.94±1.002）2.29±1.672）DBD組81.91±0.572）1.94±1.032）3）F值49.03377.175 P值0.0010.000

2.4 Western blot檢測(cè)

模型組TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的表達(dá)較對(duì)照組明顯增多（F=173.558、133.098和129.366，P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；依那普利組心肌組織TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的表達(dá)較模型組減少（F=98.655、87.654和83.781，P=0.001）；DBD組心肌組織TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的表達(dá)較模型組減少（F=102.687、89.064和90.386，P=0.000、0.000和0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；依那普利組和DBD組心肌組織TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的表達(dá)比較（F=1.032、1.028和1.009，P=0.912、0.961和0.985），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖5。

圖5 各組大鼠心肌組織TRPM7、ColⅠ及ColⅢ表達(dá)的變化

3 討論

UMF是在慢性腎臟病基礎(chǔ)上并發(fā)心肌肥大和心室重塑的主要病理基礎(chǔ)。瞬時(shí)受體電位通道是位于細(xì)胞膜上的一類重要陽(yáng)離子通道蛋白，在心肌成纖維細(xì)胞中廣泛表達(dá)，是心肌成纖維細(xì)胞中主要的Ca2+離子通道[3]。TRPM7為TRP家族成員之一，是具有陽(yáng)離子通道和蛋白激酶雙重結(jié)構(gòu)的雙功能膜蛋白。TRPM7通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡，調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖、活化和細(xì)胞外基質(zhì)沉積等，在TGF-β促纖維化作用信號(hào)通路中起重要作用[4]。

cTnⅠ是心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)的特異性抗原，在正常心肌組織中cTnⅠ均勻分布；在心肌損傷時(shí)，cTnⅠ易從心肌細(xì)胞中釋放入血。

DBD是金元時(shí)代李東垣所著《內(nèi)外傷辯惑論》的經(jīng)典益氣補(bǔ)血方劑，由黃芪和當(dāng)歸以5∶1組成。該方劑在配伍時(shí)重用黃芪大補(bǔ)脾腎之氣，以資氣血生化之源，配以當(dāng)歸苷辛而溫，養(yǎng)血和營(yíng)，黃芪為君，當(dāng)歸為臣。黃芪甲苷是黃芪的主要成分之一，是評(píng)價(jià)黃芪藥材質(zhì)量的優(yōu)劣標(biāo)準(zhǔn)，有明確的心肌保護(hù)作用。黃芪甲苷能通過(guò)下調(diào)TGF-β及其下游p-Smad2/3和Smad4的表達(dá)，抑制ColⅠ沉積，抑制病毒性心肌炎心肌纖維化形成[5]。阿魏酸為非胍類內(nèi)皮素受體拮抗劑，是當(dāng)歸的主要有效成份之一，為其活血成分的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。阿魏酸具有抗血小板聚集、抗炎、抗氧化作用，拮抗心、肝、腎組織纖維化的形成[6-7]。

DBD的配伍有明確的科學(xué)依據(jù)。黃芪中的主要成分—黃芪甲苷難溶于水，生物利用度差，而當(dāng)歸中主要成分阿魏酸能明顯促進(jìn)黃芪甲肝在大鼠十二指腸的吸收[8]，同時(shí)芪歸配比5∶1組阿魏酸析出比例最高；芪歸配比5∶1對(duì)大鼠免疫功能及抗炎能力改善影響最大[9]。孟立強(qiáng)[10]、MENG[11]、孫麗霞等[12]對(duì)黃芪當(dāng)歸的配伍抗纖維化的研究發(fā)現(xiàn)，黃芪當(dāng)歸配伍對(duì)肝、腎纖維化有多靶點(diǎn)抑制作用。

前期研究表明，DBD含藥血清能抑制心肌成纖維細(xì)胞的增殖、活化及分泌ColⅠ。利用DBD對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠進(jìn)行早期干預(yù)能抑制TGF-β和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的表達(dá)，改善腎間質(zhì)纖維化及血管病變。本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察DBD對(duì)尿毒癥大鼠心肌纖維化及心肌組織TGF-β1、TRPM7及膠原蛋白合成的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤核苷酸造模21 d大鼠，Scr、BUN及cTnⅠ較對(duì)照組明顯升高，心肌間質(zhì)出現(xiàn)水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化改變。說(shuō)明尿毒癥大鼠腎功能損傷同時(shí)伴隨心肌損害。經(jīng)依那普利和DBD治療后，Scr、BUN、cTnⅠ和心肌損害評(píng)分比模型組明顯降低，說(shuō)明DBD和依那普利在改善腎功能的同時(shí)對(duì)心肌損害也有一定的保護(hù)作用。模型組大鼠TGF-β1mRNA、TRPM7 mRNA、TRPM7、ColⅠ及ColⅢ的表達(dá)明顯增強(qiáng)。說(shuō)明伴隨心肌纖維化損害同時(shí)出現(xiàn)TGF-β1、TRPM7表達(dá)增強(qiáng)，ECM成分沉積增多，TRPM7表達(dá)與心肌纖維化呈正相關(guān)。經(jīng)DBD和依那普利治療后，上述指標(biāo)明顯降低。DBD治療組的TGF-β1mRNA表達(dá)與依那普利組比較明顯降低，說(shuō)明DBD抑制纖維化主要因子表達(dá)的作用優(yōu)于依那普利。該作用說(shuō)明中藥復(fù)合成分的多靶點(diǎn)長(zhǎng)時(shí)程抗纖維化作用強(qiáng)于腎素-血管緊張素系統(tǒng)抑制劑。腎素-血管緊張素系統(tǒng)抑制劑在纖維化早期的作用要強(qiáng)于纖維化形成期和晚期，該作用與筆者前期在腎間質(zhì)纖維化中的研究結(jié)果一致[13]。DBD能明顯改善UMF組織的病理改變，減少心肌組織TGF-β1、TRPM7的表達(dá)，減少ECM成分，對(duì)UMF起明顯的治療作用。

隨著對(duì)UMF認(rèn)識(shí)的深入，抗纖維化治療在UMF的發(fā)生中越來(lái)越受到重視。TRPM7-Ca2+信號(hào)通路的存在為心肌纖維化治療提供新的策略。DBD配方簡(jiǎn)單，抗心肌纖維化作用明顯，值得進(jìn)一步臨床應(yīng)用推廣。

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（張蕾 編輯）

Effect of Danggui Buxue Decoction on expression of transient receptor potential melastatin 7 and collagen synthesis in myocardial fibrosis tissue of uremia rats*

Lin-na WANG1,Chang-yong CHEN2,Xiao-yong CHEN1, Cun-xia GUO1,Xiang-mei CHEN3
[1.Department of Nephrology,Henan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou,Henan 450002,P.R.China;2.Department of Radiology,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,Hunan 410008,P.R.China;3.Department of Nephrology (State Key Laboratory of Kidney Disease),the General Hospital of Chinese PLA,Beijing 100853,P.R.China]

【Objective】To investigate the effect of Danggui Buxue Decoction(DBD)on the expression of transient receptor potential melastatin 7(TRPM 7)and collagen synthesis in rats of uremia myocardial fibrosis (UMF).【Methods】UMF model was induced by gavage of adenine nucleotide.Male Sprague-Dawley rats(n=32)were randomly divided into control group,UMF model group,Enalapril group and Danggui Buxue Decoction(DBD)group.The rats were treated with Enalapril 10 mg/(kg·d）or DBD 6 g/(kg·d）by gastric gavage in the Enalapril group and Danggui Buxue Decoction group,respectively.The rats were treated with identical dose of normal saline in the control and model groups.All the rats were sacrificed on the 21st day.Serum creatinine(Scr),urea nitrogen(BUN)and troponinⅠ(cTnⅠ)were measured.Pathological changes of the myocardial tissue were observed under light microscopy by HE and Masson staining.The expressions of TRPM 7 mRNA and TGF-β1mRNA were detected by real-time PCR.The expressions of TRPM 7,collagenⅠ(ColⅠ)and collagenⅢ(ColⅢ)were detected by Western blot.【Results】Compared with the control group, serum creatinine,urea nitrogen and troponinⅠ,the myocardial tissue pathologial damage index,relative collagen area,the expressions of TRPM 7 mRNA and TGF-β1mRNA and the levels of TRPM 7,ColⅠand ColⅢin the uremia myocardial tissue significantly increased in the model group(P＜0.05).After the treatment by Enalapril and DBD,there were significant reductions in myocardial tissue damage index,relative collagen area and the levels of BUN,Scr and cTnⅠin the Enalapril group and DBD group(P＜0.05).Meanwhile,Enalapril and DBD inhibited the expression of TRPM7 mRNA,TGF-β1mRNA,TRPM 7,ColⅠand ColⅢcompared with the model group(P＜0.05).Compared with the Enalapril group,DBD attenuated the expression of TGF-β1mRNA.【Conclusions】DBD significantly attenuates myocardial fibrosis by supressing the expression of TRPM 7 and then ameliorating collagen deposition.It may be one of the anti-fibrosis mechanisms of DBD in uremia myocardial tissue.

myocardial fibrosis；uremia；transient receptor potential melastatin 7；Danggui Buxue Decoction

1005-8982（2015）30-0007-06

2015-04-22

河南省中醫(yī)藥科學(xué)研究專項(xiàng)課題（No：2014ZY02021）

R285；R-332

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