湯珣，束雙雙，王悅，段娜，梁秀潔，章俊

（南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東 廣州 510280）

·臨床論著·

跨膜蛋白39A基因單核苷酸多態(tài)性與中國南方漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)性研究

湯珣，束雙雙，王悅，段娜，梁秀潔，章俊

（南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東 廣州 510280）

目的探討跨膜蛋白39A（TMEM39A）基因2個單核苷酸多態(tài)性位點（rs1132202，rs13082536）與中國南方漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）易感性有無關(guān)聯(lián)。方法采用PCR和直接測序法分別對116例SLE患者和90例健康對照者TMEM39A基因rs1132202、rs13082536的基因多態(tài)性進(jìn)行檢測，比較組間基因型和等位基因頻率的差異，并與主要臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果中國南方漢族人群SLE患者rs1132202 GG基因型缺失，CC、CG基因型及C、G基因頻率與正常對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。rs13082536 TT基因型缺失，GG、GT基因型及G、T基因頻率與正常對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。TMEM39A rs1132202、rs13082536基因型及等位基因頻率與中國南方漢族人群SLE患者抗核抗體及腎損害臨床表現(xiàn)均無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論TMEM39A rs1132202、rs1308253基因多態(tài)性與中國南方漢族人群SLE易感性及抗核抗體，腎損害主要臨床指標(biāo)均無顯著相關(guān)性。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；跨膜蛋白39A基因；單核苷酸多態(tài)性

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種多系統(tǒng)損害的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病。其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，以免疫系統(tǒng)異常、多種自身抗體產(chǎn)生、補體活化、免疫復(fù)合物沉積為主要特征[1]。SLE好發(fā)于女性，特別是育齡期婦女，男女的患病率之比約是1∶9[2]。SLE的發(fā)病率和患病率在世界不同人種、地區(qū)間亦有很大差異[3-4]。

SLE病因和發(fā)病機制至今尚未明確，但其易感性及臨床表型與遺傳因素密切相關(guān)，屬于多個易感基因參與的疾病。目前通過全基因組關(guān)聯(lián)分析（genome-wide association study，GWAS）已發(fā)現(xiàn)多個SLE易感位點，如HAN等[5]研究發(fā)現(xiàn)，中國人群SLE 9個新的易感基因（ETS1、IKZF1、RASGRP3、SLC15A 4、TNIP1、7q11.23、10q11.22、11q23.3和16p11.2）并證實7個已報道易感基因（BLK、IRF5、STAT4、TNFAIP3、TNFSF4、6q21和22q11.21）。另外，關(guān)于日本人群SLE的一項GWAS研究發(fā)現(xiàn)AFF1是一新的易感基因，并證實STAT4、TNFAIP3、HIP1、BLK和ETS1等基因與日本人群SLE發(fā)病亦相關(guān)[6]。ARMSTRONG等[7]報道歐洲人群SLE中13個新的非HLA區(qū)域易感基因以及4個已報道基因。這些均表明SLE遺傳易感性在不同人群中有相關(guān)性。此外，不同的自身免疫性疾病亦有共同的易感基因，如HLATNF-α即是多發(fā)性硬化的易感基因，同時也是SLE的易感基因[7-11]。國外已有研究表明，跨膜蛋白39A（TMEM39A）基因與多發(fā)性硬化癥、SLE等自身免疫性疾病的遺傳易感性相關(guān)，表明不同自身免疫性疾病在不同群體中可能有共同的易感基因[12]。本研究通過對TMEM39A基因兩個多態(tài)性位點rs1132202、rs13082536的等位基因及基因型頻率分析，探討其與中國南方漢族人群SLE易感性及主要臨床指標(biāo)是否相關(guān)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究納入的116例患者均為中國南部漢族人群，診斷依據(jù)為1997年美國風(fēng)濕病學(xué)的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，為病例組。通過與病例組年齡性別匹配后，收集90例南部地區(qū)健康體檢者做對照組，均為非SLE、自身免疫性及其他系統(tǒng)性疾病患者。

1.2 基因組DNA的制備

在知情同意的原則下，收集SLE患者及健康對照者晨間空腹EDTA-K2抗凝靜脈血2 ml，用試劑盒（Axygen，USA）提取全血基因組DNA。方法嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，提取產(chǎn)物溶于TE緩沖液，置入-20℃冰箱保存。

1.3 PCR擴增及產(chǎn)物純化測序

采用DNA Star設(shè)計引物和探針，BLAST同源性檢索，與其他基因無同源性。交由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成，正向引物：5'-GGCAGTGTCGTCTTCT ATCA-3'，反向引物：5'-CCTCAGCCTCAGGATAGTA G-3'。PCR反應(yīng)體系包括：10×Buffer 2.5μL，2.0 mmol/L dNTP 1μL，10μmol/L正反引物各1μL，DNA Taq酶1μ，100mg/L DNA模版3μL，ddH2O 16.1μL。PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)：95℃預(yù)變性2 min，94℃變性15 s，60℃退火復(fù)性15 s，72℃延伸30 s，35個循環(huán)，最后72℃延伸3 min。PCR擴增后取3μL，PCR產(chǎn)物用Exol和Fast AP純化，純化后進(jìn)行延伸反應(yīng)。擴增后經(jīng)60 g/L聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物，并將回收的PCR產(chǎn)物交由上海英駿生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，Hardy-Weinberg平衡和計數(shù)資料用χ2檢驗分析病例組與對照組基因型和等位基因分布差異，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在病例組中按抗核抗體陽性與抗核抗體陰性，有無腎損害時兩多態(tài)性位點的等位基因和基因型頻率分布情況，校正了性別、年齡等混雜因素后，TMEM39A基因rs1132202、rs13082536多態(tài)性與SLE臨床表現(xiàn)的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 中國南方漢族人群SLE易感性與TMEM39A rs1132202、rs13082536多態(tài)性分析

對116例SLE患者與90例健康對照TMEM39A rs1132202、rs13082536多態(tài)性分析，篩出rs1132202CC、CG基因型及rs13082536GG、GT基因型（見附圖）。

附圖 TMEM39A基因rs1132202、rs13082536多態(tài)性位點基因型

TMEM39A rs1132202，rs13082536基因型分布在對照組中符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），具有群體代表性。這兩個多態(tài)性位點基因型及等位基因頻率在病例組及對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 病例組與對照組TMEM39A基因rs1132202、rs13082536等位基因及基因型頻率分析例（%）

2.2 TMEM39A rs1132202、rs13082536多態(tài)性與中國南方漢族人群抗核抗體及腎損害相關(guān)性分析

病例組中抗核抗體陽性與抗核抗體陰性，有無腎損害時TMEM39A rs1132202、rs13082536多態(tài)性位點的等位基因頻率和基因型頻率分布情況見表2。在校正了性別、年齡等混雜因素后，該兩個SNP位點與抗核抗體和有無腎損害的發(fā)生間均不存在差異性（P＞0.05）。

表2 TMEM39A基因rs1132202、rs13082536與中國南方人群SLE相關(guān)臨床癥狀分析

3 討論

SLE的發(fā)病與遺傳、環(huán)境、性激素以及機體免疫系統(tǒng)功能紊亂等因素有關(guān)，其病情遷延反復(fù)，并出現(xiàn)多種自身抗體，這些抗體引起免疫復(fù)合物沉積、補體激活以及免疫細(xì)胞功能紊亂，最終導(dǎo)致多器官損害。中國人群SLE發(fā)病率為31～70/10萬，與白種人相比，亞洲人群SLE腎臟受累更常見，臨床表現(xiàn)也更嚴(yán)重[3-4，13]。因此發(fā)現(xiàn)新的SLE易感基因?qū)τ诮沂維LE的發(fā)病機制，從而達(dá)到早期防治的目的具有重要意義。

單核苷酸多態(tài)性（SNP）是人類可遺傳變異中最常見的一種，可影響不同人群對疾病的易感程度、同種疾病的臨床表型以及對藥物的不同反應(yīng)。SNP在復(fù)雜疾病的基因定位、關(guān)聯(lián)分析、個體疾病易感性分析、同種疾病臨床表型分析中發(fā)揮著重要的作用。一項對多發(fā)性硬化的全基因組關(guān)聯(lián)性分析中表明TMEM39A基因rs1132200是其易感基因[13]，關(guān)于歐裔美國人SLE易感性的GWAS研究也表明rs1132200是其易感基因[12]。Rs1132200引起TMEM 39A 487位置的蛋白質(zhì)由丙氨酸變?yōu)樘K氨酸，但其引起疾病的具體機制有待進(jìn)一步研究。本前期研究表明rs1132202與中國人群SLE易感性相關(guān)，rs1132202與rs1132200呈高度連鎖不平衡狀態(tài)（r2=1），可能在疾病的發(fā)生、發(fā)展中共同起作用。在此基礎(chǔ)上，本文選擇TMEM39A兩個多態(tài)性位點（rs1132202、rs13082536）進(jìn)一步探討中國南方人群SLE易感性是否與TMEM39A基因相關(guān)。

筆者采用PCR和直接測序法對116例SLE患者和90例健康對照進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TMEM39A rs1132202、rs13082536等位基因頻率和基因型頻率均與中國南方漢族人群SLE易感性無關(guān)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)該兩個SNP位點與中國南方漢族SLE患者是否表現(xiàn)抗核抗體陽性和有無腎損害之間亦無相關(guān)性，提示TMEM39A基因這兩個多態(tài)性位點可能與中國南方漢族人群SLE易感性無關(guān)。但本研究觀察例數(shù)少，結(jié)果可能受此影響。因此TMEM39A基因多態(tài)性與中國南方漢族人群SLE易感性間的確切關(guān)聯(lián)還有待進(jìn)一步研究。

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（張蕾 編輯）

Polymorphisms of transmembrane protein 39A gene and risk of SLE in southern Chinese Han population

Xun TANG,Shuang-shuang SHU,Yue WANG,Na DUAN,Xiu-jie LIANG,Jun ZHANG
(Department of Nephrology,Zhujiang Hospital,Southern Medical University, Guangzhou,Guangdong 510280,P.R.China)

【Objective】To investigate the relationship between single nucleotide polymorphism sites rs1132202 and rs13082536 of transmembrane protein 39A(TMEM39A)gene and systemic lupus erythematosus (SLE)in southern Chinese Han population.【Methods】First,the two SNP sites(rs1132202 and rs13082536) were genotyped using polymerase chain reaction and direct sequencing in 116 SLE patients and 90 healthy controls from South China.Then the differences in genotypes and allele frequencies between the two groups were analyzed.In addition,the association between the two SNPs and the main clinical indicators of SLE was also analyzed.【Results】The GG genotype of rs1132202 was missing in southern Chinese Han population,and no statistical difference in CC/CG genotypic frequency or C/G allelic frequency was found between the SLE patients and the healthy controls(P＞0.05).The TT genotype of rs13082536 was also missing and GG/GT genotypic frequency or G/T allelic frequency had no significant difference between both groups(P＞0.05). TMEM39Ars1132202andrs13082536genotypesandallelefrequenciesintheSLEpatientswerenot correlated with antinuclear antibody(ANA)positivity or kidney damage(P＞0.05).【Conclusions】There is no association between SLE susceptibility and the two polymorphisms(rs1132202 and rs1308253)of TMEM39A gene in southern Chinese Han population.The two polymorphisms in the SLE patients are not correlated with ANA or renal damage.

systemiclupuserythematosus；transmembraneprotein39Agene；singlenucleotide polymorphism

R593.241

A

1005-8982（2015）30-0033-04

2015-04-13

章俊，E-mail：gzh_zj@qq.com