鄭 琛 李春燕 隋嘯一 趙 楠 劉公言 李福昌

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，泰安 271018)

核黃素不僅參與機(jī)體內(nèi)碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)和核酸的代謝，而且間接參與免疫細(xì)胞分化、增殖和DNA、RNA及抗體合成等。因此，核黃素是機(jī)體必需營養(yǎng)素之一。核黃素在某種程度上可提高抗感染能力和生長性能［1］。核黃素缺乏時脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，核黃素可以抑制該過氧化物反應(yīng)過程［2－3］。核黃素在人的心血管疾病防治中發(fā)揮重要作用。有研究顯示，核黃素有降血脂、抗血小板聚集、抑制脂質(zhì)過氧化等作用［4－5］。目前，我國還未正式出臺獺兔完整的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，獺兔核黃素需要量的研究匱乏，國外關(guān)于家兔在核黃素的研究主要集中在視覺角膜交聯(lián)的治療方面［6］。本試驗以生長獺兔為研究對象，探討飼糧添加不同水平核黃素對其生長性能、毛皮質(zhì)量、血液指標(biāo)和抗氧化功能的影響，尋求獺兔飼糧中核黃素適宜添加水平，為我國制定獺兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼糧

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1977)家兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0(對照組)、3、6和12 mg/kg核黃素，制成4種試驗飼糧，加工成直徑4～6 mm的顆粒飼糧，通風(fēng)干燥保存。4個組飼糧核黃素實(shí)測含量分別為 2.62、4.43、8.35 和 14.94 mg/kg。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

試驗選用健康、體重(1 882±144)g的3月齡獺兔160只，公母各占1/2，隨機(jī)分成4組，每組40個重復(fù)，每個重復(fù)1只獺兔。分別飼喂以上4種試驗飼糧，預(yù)試期7 d，正試期53 d。統(tǒng)計試驗期間的采食量和體增重。試驗兔單籠飼養(yǎng)，期間早晚各喂1次，自由飲水，采用常規(guī)飼養(yǎng)管理和免疫程序，自然采光、通風(fēng)。

1.3 樣品的采集與制備

試驗結(jié)束后空腹12 h稱重，每組隨機(jī)抽取8只試驗兔，心臟采血，37℃水浴 40 min后，3 000 r/min離心 15 min，分離所得血清分裝于Eppendorf管中，置于－20℃冷凍保存;采血完成后將試驗兔頸動脈放血屠宰，采集肝臟樣品放于液氮罐速凍和保存，待測脂質(zhì)抗氧化指標(biāo);屠宰后的試驗兔剝皮，分析毛皮質(zhì)量。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能指標(biāo)

試驗結(jié)束后，以重復(fù)為單位稱量試驗兔的體重，并統(tǒng)計全期的喂料量，計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血液指標(biāo)

血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、尿素氮(UN)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量均采用日本和光純藥工業(yè)株式會社提供的試劑盒，按說明書在日立7020型全自動分析儀上進(jìn)行測定。

1.4.3 血清和肝臟抗氧化指標(biāo)

血清和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性及總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量均在UV－2450型紫外可見分光光度計上測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 毛皮質(zhì)量

將剝下的獺兔皮稱重，測定其皮毛質(zhì)量;皮毛平鋪于托盤內(nèi)，直尺垂直于皮毛測量被毛長度;然后測量其長度和寬度(皮長度是從頸中部量起至尾根;寬度指前肢后緣的胸圍寬度;長、寬相乘即為皮的面積)［7］，計算其面積;毛皮折疊，用游標(biāo)卡尺測厚度，皮毛厚度為所測值的1/2。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)以平均值和均方根誤差(R-MSE)表示，采用SAS 9.1統(tǒng)計軟件中的GLM進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，若有顯著差異，則采用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較。

2 結(jié)果

2.1 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔生長性能的影響

由表2所示，試驗兔的初始體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)，飼糧核黃素添加水平對平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著影響(P＞0.05)。

表2 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔生長性能的影響Table 2 Effects of dietary riboflavin supplemental level on growth performance of growing Rex rabbits(n=8)

2.2 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔毛皮質(zhì)量的影響

由表3所示，飼糧核黃素添加水平對生長獺兔毛皮面積有顯著影響(P＜0.05)，對毛皮重量有極顯著影響(P＜0.01)，毛皮重量和毛皮面積都隨核黃素添加水平增加而增加，飼糧核黃素添加水平對毛皮厚度、被毛長度均無顯著影響(P＞0.05)。

表3 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔毛皮質(zhì)量的影響Table 3 Effects of dietary riboflavin supplemental level on fur quality of growing Rex rabbits(n=8)

2.3 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血液指標(biāo)的影響

由表4所示，6 mg/kg添加組血清CHO含量顯著高于其他3組(P＜0.05)，飼糧核黃素添加水平對血清 TP、ALB、TG、UN、HDL-C 和 LDL-C 含量均無顯著影響(P＞0.05)。

2.4 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5所示，飼糧核黃素添加水平對血清GSH-Px活性有顯著影響(P＜0.05)，隨飼糧核黃素添加水平增加，GSH-Px活性呈先升高后降低趨勢，6 mg/kg添加組顯著高于對照組(P＜0.05)。飼糧核黃素添加水平對血清T-SOD活性無顯著影響(P＞0.05)，6 mg/kg添加組高于其他組。飼糧核黃素添加水平對血清MDA含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨飼糧核黃素添加水平增加，血清MDA含量呈先降低后升高趨勢。

飼糧核黃素添加水平對肝臟GSH-Px活性有極影響顯著(P＜0.01)，6 mg/kg添加組極顯著高于對照組(P＜0.01)。飼糧核黃素添加水平對肝臟T-SOD 活性無顯著影響(P＞0.05)，6 mg/kg添加組高于其他組。飼糧核黃素添加水平對肝臟T-AOC和 MDA 含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨飼糧核黃素添加水平增加，肝臟T-AOC先升高后降低，肝臟MDA含量先降低后升高，6 mg/kg添加組肝臟T-AOC最大，MDA含量最小。

表4 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血液指標(biāo)的影響Table 4 Effects of dietary riboflavin supplemental level on blood indices of growing Rex rabbits(n=8)

表5 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary riboflavin supplemental level on serum and liver antioxidant indices of growing Rex rabbits(n=8)

3 討論

3.1 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔生長性能的影響

核黃素通過參與構(gòu)成各種黃酶的輔基，與碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪的代謝密切相關(guān)。

飼糧中核黃素不足會顯著降低家禽的生長性能。飼糧中缺乏核黃素造成肉雞生長受阻、飼料利用率降低［8－10］。同時，核黃素可提高育肥豬料重比［11］。在本試驗中，飼糧核黃素添加水平對生長獺兔的平均日增重、平均日采食量、料重比均沒有產(chǎn)生顯著影響，但是從數(shù)據(jù)趨勢的分析可以看出6 mg/kg的添加水平最為適宜。

3.2 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔毛皮質(zhì)量的影響

獺兔毛皮具有很高的經(jīng)濟(jì)價值，皮張面積直接關(guān)系獺兔皮的使用價值，獺兔皮的厚薄直接影響鞣制質(zhì)量，被毛長度也是評判兔皮好壞的重要指標(biāo)之一。研究表明，豬缺乏維生素B2表現(xiàn)出被毛粗糙、皮炎等癥狀。核黃素缺乏可導(dǎo)致角膜混濁、鱗屑狀皮膚炎、后腿及胸腹部呈鱗屑狀皮膚炎并有紅斑［12］。本試驗結(jié)果表明，飼糧核黃素添加水平對生長獺兔的毛皮面積和毛皮重量有顯著或極顯著影響，并在添加水平為12 mg/kg時達(dá)到最大值。說明飼糧中添加核黃素對毛皮有益。但飼糧核黃素添加水平對生長獺兔毛皮厚度和被毛長度無顯著影響，其具體作用機(jī)理有待進(jìn)一步探究。

3.3 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血液指標(biāo)的影響

血液中的CHO主要來源于肝臟合成，血液中的CHO一部分到組織中構(gòu)成細(xì)胞結(jié)構(gòu)的成分，另一部分轉(zhuǎn)變?yōu)橹匾墓檀佳苌锟勺優(yōu)榫S生素D3促進(jìn)鈣的吸收或類固醇激素代謝，血清CHO含量是反映機(jī)體血脂的重要指標(biāo)［12］，霍思遠(yuǎn)等［14］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適量核黃素可促進(jìn)機(jī)體CHO的吸收，提高代謝效率，但核黃素添加水平過高或過低都會抑制機(jī)體代謝。本試驗中添加6 mg/kg核黃素顯著提高血清CHO的含量，說明添加核黃素可以促進(jìn)機(jī)體對CHO的吸收，極高機(jī)體代謝。

核黃素對血清TP、ALB、UN含量均無顯著影響，但可以看出其含量隨飼糧核黃素添加水平的增加而增加，血清ALB含量是反映肝功能、腎功能的主要指標(biāo)，血清TP含量高表明機(jī)體蛋白質(zhì)代謝旺盛;動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和飼糧氨基酸平衡狀況的重要指標(biāo)之一就是血清中UN含量。其原因可能是核黃素其生理功能主要是黃素單核苷酸和黃素腺嘌呤二核苷酸的前體，二者作為中間代謝多種酶的輔酶參與機(jī)體蛋白質(zhì)的代謝，但可能并不直接作用于獺兔蛋白質(zhì)代謝關(guān)鍵酶，故不能對蛋白質(zhì)和氨基酸代謝產(chǎn)生顯著影響［15］。

LDL-C可以將肝臟合成的內(nèi)源性CHO轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織，保證組織細(xì)胞對CHO的需求，HDL-C是從肝外組織將CHO轉(zhuǎn)運(yùn)到肝內(nèi)進(jìn)行代謝［16］。TG是一種能量儲備物質(zhì)，是游離脂肪酸和甘油結(jié)合形成的。有研究證明，核黃素缺乏細(xì)胞中載脂蛋白B分泌減少可干擾體內(nèi)脂質(zhì)平衡［17］。而HDL-C通過載脂蛋白A1激活卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶，生成膽固醇脂。

3.4 飼糧核黃素添加水平對生長獺兔血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

GSH-Px是一種重要的過氧化物分解酶，其活性可以反映機(jī)體清除自由基的能力。Kotegawa等［18］研究發(fā)現(xiàn)，核黃素缺乏導(dǎo)致晶狀體谷胱甘肽還原酶(GR)活性顯著降低，GSH-Px活性增加，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量增加。本試驗發(fā)現(xiàn)，隨飼糧核黃素添加水平的增加，血清和肝臟中的GSH-Px活性在核黃素添加水平為6 mg/㎏時高于其他組，這可能是因為添加適宜水平的核黃素可以促進(jìn)體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)，清除自由基，發(fā)揮抗氧化作用。超氧化物歧化酶(SOD)是一種金屬酶，是體內(nèi)最為重要的自由基清除劑。經(jīng)動物試驗表明核黃素缺乏組大鼠紅細(xì)胞含較高水平的脂質(zhì)過氧化物，GSH-Px活性升高，但 SOD活性未受影響［3］。本試驗中飼糧核黃素添加水平對血清和肝臟中的T-SOD活性無顯著影響，這與上述研究結(jié)果相符。

T-AOC用于衡量機(jī)體抗氧化能力的綜合性指標(biāo)，MDA為脂質(zhì)過氧化物之一，其含量可間接反映細(xì)胞損傷程度。吳暉云等［19－20］研究發(fā)現(xiàn)，核黃素缺乏組大鼠紅細(xì)胞膜流動性下降，紅細(xì)胞膜MDA含量顯著高于核黃素添加組。本試驗發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧核黃素添加水平的增加，肝臟和血清中的MDA含量呈降低的趨勢，而T-AOC有升高的趨勢，并在核黃素添加水平為6 mg時MDA含量最低，而T-AOC最高。由此可見，飼糧中添加適宜水平的核黃素能提高生長獺兔的抗氧化功能。

4 結(jié)論

綜上所述，生長獺兔的飼糧核黃素添加水平為6 mg/kg(飼糧核黃素實(shí)測含量為8.35 mg/kg)時能顯著提高毛皮質(zhì)量和機(jī)體的抗氧化功能。

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