李艷東，劉 冰，郭發(fā)鋼，吳文換(西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，西安 70077;西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系)

Gab2是一個(gè)腳手架/接頭蛋白，是接頭蛋白Gab(growth factor receptor-bound protein2(Grb2)-associated binder)家族中的重要成員。研究發(fā)現(xiàn)，Gab2的表達(dá)及活化異常可能導(dǎo)致疾病的發(fā)生，尤其是惡性腫瘤。Gab2具有潛在的原癌基因特性，與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，在人類乳腺癌［1－3］、卵巢癌［4］、和急性髓細(xì)胞性白血病(acute myeloid leukemia，AML)/骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome，MDS)［5］等腫瘤中過表達(dá)。胃癌中Gab2的研究報(bào)道甚少，我們對(duì)Gab2在胃腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1．1 材料

收集本院2010－06～2012－06經(jīng)手術(shù)病理檢查的存蠟塊標(biāo)本，其中正常胃黏膜組織標(biāo)本20例，胃腺癌組織標(biāo)本65例。羊抗人Gab2抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1．2 免疫組織化學(xué)染色

取常規(guī)固定、包埋的組織塊標(biāo)本，作連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)。免疫組化采用PV6000兩步法，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。用已知陽性切片做陽性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1．3 結(jié)果判斷

Gab2陽性染色為細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒，觀察10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù):陰性為0分，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為1分，陽性細(xì)胞數(shù)10%－50%之間為2分，陽性細(xì)胞數(shù)50%－80%為3分，陽性細(xì)胞數(shù)＞80%為4分;染色強(qiáng)度按著色程度分為:無著色為0分，黃色為弱陽性為1分，淺棕色為2分，棕褐色為3分，總分為兩項(xiàng)評(píng)分之和，取總分≥4分為陽性表達(dá)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，以 P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 Gab2在胃腺癌中的表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示，在正常胃黏膜中除了胃底腺細(xì)胞少量表達(dá)，其余腺體均不表達(dá)Gab2(見圖1)，表達(dá)率為10．0%;Gab2表達(dá)在腺癌細(xì)胞胞質(zhì)，65例胃腺癌中Gab2表達(dá)陽性為45例，陽性率為69．2%(見表1)。免疫組織化學(xué)染色顯示Gab2在胃腺癌和正常胃黏膜中的表達(dá)有顯著的差異(P ＜0．05)。

表1 胃腺癌和正常胃黏膜組織中Gab2的表達(dá)情況 例(%)Table 1 Expression of Gab2 in gastric adenocarcinoma and normal gastric epithelium cases(%)

圖1 Gab2在胃腺癌組織及正常胃黏膜中免疫組織化學(xué)的表達(dá)Figure 1 Immunohistochemical expression of Gab2 in gastric adenocarcinoma and human normal gastric epithelium

2．2 胃腺癌中Gab2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

在胃腺癌中Gab2表達(dá)在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0．05)，但在不同病理分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，見表2)。

表2 Gab2的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系Table 2 Relationship between Gab2 expression and clinico-pathologic characteristics in 65 patients with gastric adenocarcinoma

3 討論

作為支架蛋白，Gab2在人體內(nèi)廣泛表達(dá)，Gab2蛋白在多種受體(如上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體及B細(xì)胞/T細(xì)胞抗原受體等)下游的信號(hào)通訊網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用。Gab2可被酪氨酸激酶磷酸化激活，接受胞外多種因子刺激，招募富含SH2結(jié)構(gòu)域的信號(hào)轉(zhuǎn)運(yùn)分子，活化下游SHP2/Ras/ERK和PI3K/AKT等一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡及遷移等生理過程中發(fā)揮重要作用［6］。

Gab2作為被認(rèn)識(shí)較晚的與腫瘤密切相關(guān)的基因，在乳腺癌中的研究最多，乳腺癌中，Gab2陰性的腫瘤細(xì)胞系呈現(xiàn)遷移能力的下降和Erk活化的減弱，提示它在促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮了重要作用［7］。臨床研究顯示，Gab2與乳腺腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)性［3］。Gab2也過表達(dá)在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中，而在黑色素痣和原發(fā)性黑色素瘤中低表達(dá)［8］。研究結(jié)果顯示，Gab2在肺癌組織中的蛋白和基因表達(dá)與癌旁正常組織相比，明顯過表達(dá)［9］。Gab2在乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌［10］等多種腫瘤中過表達(dá)，提示它可能是一個(gè)有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物和腫瘤治療的新靶點(diǎn)。

本研究顯示Gab2在胃癌中過表達(dá)，表達(dá)率為69．2%，而在除胃底腺以外的正常胃黏膜均不表達(dá)。Gab2的表達(dá)在胃腺癌不同病理分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，研究顯示Gab2可能在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

胃正常黏膜除胃底腺細(xì)胞均不表達(dá)Gab2，提示Gab2可能只在正常胃黏膜的胃底腺細(xì)胞發(fā)揮功能，而這個(gè)功能目前仍不清楚。依據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提出這樣的假設(shè):過表達(dá)Gab2的胃腺癌細(xì)胞可能來源于表達(dá)Gab2的胃底腺細(xì)胞。當(dāng)然，這需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明是否正確。

胃癌是嚴(yán)重危害人類生命健康的惡性腫瘤之一，盡管手術(shù)、放療及化療技術(shù)在不斷更新，但5年生存率一直徘徊在50%－60%［11］。腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移是胃癌患者高死亡率的重要原因。本研究顯示在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移的患者中Gab2表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此Gab2過表達(dá)可能在胃癌的發(fā)生及早期發(fā)展中起到重要作用。關(guān)于Gab2在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，需要進(jìn)一步深入研究。

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