馬長(zhǎng)路 侯晟 羅紅霞 王麗 柳青 賈紅亮 劉超 汪長(zhǎng)鋼 劉小飛

快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)蜂產(chǎn)品藥物殘留控制的前景分析

馬長(zhǎng)路 侯晟 羅紅霞 王麗 柳青 賈紅亮 劉超 汪長(zhǎng)鋼 劉小飛

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京102442）

國(guó)內(nèi)外對(duì)于蜂產(chǎn)品中藥物殘留的認(rèn)識(shí)和研究非常普遍，但如何更有效地在產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中加以控制存在一些問(wèn)題。為了有效控制藥物殘留，需要一些方便、快捷、準(zhǔn)確且便宜的快速檢測(cè)方法。通過(guò)分析和比較國(guó)內(nèi)外蜂產(chǎn)品中藥物殘留現(xiàn)狀、藥物殘留快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀和蜂產(chǎn)品中藥物殘留快速檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀，指出了目前能夠進(jìn)行快速檢測(cè)的農(nóng)藥殘留和一些有待于進(jìn)一步開發(fā)的檢測(cè)標(biāo)的和檢測(cè)方法，為加強(qiáng)蜂產(chǎn)品的藥物殘留控制提供積極的參考。

蜂產(chǎn)品；藥物殘留；快速檢測(cè)

1 蜂產(chǎn)品中藥物殘留現(xiàn)狀

由于蜂產(chǎn)品自身的特性，其農(nóng)藥、獸藥殘留比較普遍。國(guó)外，有人檢測(cè)了毒死蜱、丙溴磷和殺螟硫磷；有機(jī)氯農(nóng)藥（OCPs）、六六六（HCHs）、滴滴涕（DDTs）、氯丹、六氯苯（HCB）；磺酰胺抗生素；林可霉素、泰樂(lè)菌素；新煙堿類殺蟲劑（呋蟲胺，烯啶蟲胺，噻蟲嗪，噻蟲胺，吡蟲啉，啶蟲脒和噻蟲啉）；大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。國(guó)內(nèi)，研究者檢測(cè)了氨基甲酸酯、有機(jī)磷、擬除蟲菊酯類、磺胺類、硝基咪唑類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類、吡喹酮、喹諾酮類、磺胺類抗生素、氯霉素殘留。

表1列出了蜂蜜中最常見的農(nóng)藥殘留，從中可以看到有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥使用的較為普遍，而中國(guó)產(chǎn)蜂蜜中有機(jī)磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類藥物殘留較普遍。

表2列出了蜂產(chǎn)品中其他一些農(nóng)藥殘留物，而且這些都是通過(guò)色譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的。雖然，色譜檢測(cè)精度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)，但費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，而且成本很高，只適合于終產(chǎn)品的出廠檢驗(yàn)。如何確保蜂產(chǎn)品加工過(guò)程中產(chǎn)品的質(zhì)量，保證每批原料藥物殘留合格是需要解決的重要問(wèn)題。因此，采用快速、高效、經(jīng)濟(jì)的快速檢測(cè)方法是檢驗(yàn)每批原料是否合格的適用方法。

表1 蜂蜜中最常見的農(nóng)藥殘留[1]

2 快速檢測(cè)技術(shù)的現(xiàn)狀

2.1 酶抑制法

酶抑制速測(cè)法是基于食品中殘留的農(nóng)藥等對(duì)酶的抑制作用而建立的快速檢測(cè)方法。酶抑制法是國(guó)內(nèi)運(yùn)用最多、最成熟的主流快速檢測(cè)技術(shù)[12]。我國(guó)已將其列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》中作為農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法[13]。該方法中最常用的酶為乙酰膽堿酯酶?；谝阴Ｄ憠A酯酶抑制法原理設(shè)計(jì)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有試紙法、比色法和傳感器法[14]。2.2免疫反應(yīng)法

免疫速測(cè)法是利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)建立的快速檢測(cè)方法。根據(jù)檢測(cè)標(biāo)記物的不同,有放射免疫檢測(cè)(RIA)、酶免疫檢測(cè)(EIA)、熒光免疫檢測(cè)(FIA)、發(fā)光免疫檢測(cè)(LIA)等[15]。

2.3 傳感器法

傳感器是能感受規(guī)定的被測(cè)量并按照一定的規(guī)律轉(zhuǎn)換成可用信號(hào)的器件或裝置。農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等快速檢測(cè)領(lǐng)域運(yùn)用最多的是生物傳感器,它按感受器可分為酶?jìng)鞲衅?、免疫傳感器、?xì)胞傳感器、微生物傳感器等,按換能器又可分為電化學(xué)型、光學(xué)型、電導(dǎo)型、壓電型等[15]。

2.4 其他方法

活體生物學(xué)方法是利用敏感生物對(duì)有毒物的耐受程度而進(jìn)行測(cè)試的方法。此外,分子印跡技術(shù)、生物芯片技術(shù)、便攜式氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)等在快速檢測(cè)中的應(yīng)用亦有提及,但總體而言目前研究較少[15]。

表2 蜂產(chǎn)品中其他農(nóng)藥殘留

表3 蜂產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法

表3列出了已搜集的蜂產(chǎn)品中藥物殘留的快速檢測(cè)方法，可以發(fā)現(xiàn)直接快速檢測(cè)蜂產(chǎn)品中藥物殘留的藥物和方法都較少。為了進(jìn)一步分析確定蜂產(chǎn)品中藥物殘留快速檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì)，表4列出蜂產(chǎn)品中常用的和已被檢測(cè)的農(nóng)藥在其他食品中快速檢測(cè)的方法。

3 蜂產(chǎn)品中快速檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用前景

3.1 藥物殘留種類分析

一方面，從表1和表2可以看出蜂產(chǎn)品中含有多種藥物殘留，而表3中只列出兩種藥物殘留快速檢測(cè)方法。結(jié)合表3和表4，可以看到：雖然，泰樂(lè)菌素、吡蟲啉、擬除蟲菊酯類、有機(jī)磷類藥物在蜂產(chǎn)品中的快速檢測(cè)方法沒(méi)有被檢索到，但是，他們?cè)谄渌称分械目焖贆z測(cè)方法都有研究報(bào)道。因此，他們?cè)诜洚a(chǎn)品中的快速檢測(cè)方法就有了良好的參照。

另一方面，在蜂產(chǎn)品中，硝基咪唑類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類、吡喹酮、新煙堿類殺蟲劑的快速檢測(cè)方法均未給出相關(guān)的參照。

因此，在文中引用的文獻(xiàn)背景下，氯霉素、磺胺類藥物在蜂產(chǎn)品中的快速檢測(cè)方法均有報(bào)道，其余在蜂產(chǎn)品中常見的藥物也有相關(guān)的快速檢測(cè)方法，只有幾類藥品的快速檢測(cè)方法未有報(bào)道。

3.2 快速檢測(cè)技術(shù)分析

酶抑制法：Hongkun Li等人研究了一種新的可視化快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的方法，采用檸檬酸被覆的金納米粒子比色探針。該法的原理是基于隨著乙酰膽堿酯酶催化水解乙酰硫代膽堿為硫代膽堿，誘導(dǎo)納米金顆粒聚集，顏色由酒紅色變成紫色或灰色，初始的522nm的表面等離子體共振吸收減弱，而在675nm出現(xiàn)新的吸收帶。有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的不可逆的抑制防止金納米顆粒的聚集,形成了不同的吸收。在最佳條件下，522 nm處納米金顆粒的吸光度同甲胺磷的濃度線性相關(guān)，線性范圍為0.02～1.42 ug／mL，檢測(cè)限1.40ng/mL。本比色法已成功地用于檢測(cè)蔬菜中甲胺磷結(jié)果令人滿意。該比色法具有良好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性，為有機(jī)磷農(nóng)藥的分析提供一個(gè)簡(jiǎn)單而快速方法[31]。

一種新的敏感的視覺篩選卡，一方面乙酰膽堿酯酶(AChE)催化吲哚乙酸水解，另一方面殺蟲劑對(duì)AchE產(chǎn)生抑制作用，其顏色強(qiáng)度在藍(lán)-綠間變化，從而能夠定量確定藥物殘留。最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)系統(tǒng)為氧化樂(lè)果、敵敵畏、甲胺磷、毒死蜱、西維因、抗蚜威的檢測(cè)限（LOD）分別為1 mg/mL，0.1 mg/mL，2 mg/mL，0.05 mg/mL，1.5 mg/mL，和0.8 mg/mL。用果汁和蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)的結(jié)果表明，該視覺檢查卡靈敏度高、重現(xiàn)性好、儲(chǔ)存性能穩(wěn)定，在農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中應(yīng)用的潛力巨大[30]。

免疫法：一種簡(jiǎn)單，快速和高通量熒光偏振免疫法（FPIA）使用廣泛的特異性單克隆抗體,同時(shí)測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量(OPs)。該法可同時(shí)檢測(cè)5種OPs，檢測(cè)限低于10 ng/mL,抗體與抗原相互作用的平衡時(shí)間不到10 min，從植物和環(huán)境樣品測(cè)得的加標(biāo)回收率為71.3～126.8%，變異系數(shù)為3.5～14.5%，同高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）相比，具有良好的精度和可重復(fù)性，適用于快速、高通量篩選OP污染，體現(xiàn)了高效、低成本的特點(diǎn)[28]。

使用熒光免疫分析法，獲得殺螟硫磷，倍硫磷，甲基毒死蜱、西維因、速滅威的檢測(cè)限為0.02 ng/mL，0.012 ng/mL，0.04 ng/mL，0.05 ng/mL，0.1 ng/mL，均低于歐盟農(nóng)藥數(shù)據(jù)庫(kù)報(bào)告的最大殘留限量。懸浮陣列具有特異性以及和其他化學(xué)物質(zhì)沒(méi)有明顯的交叉反應(yīng)，使用這種方法檢測(cè)農(nóng)業(yè)樣品同液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定的結(jié)果相比具有良好的一致性。結(jié)果表明，這種簡(jiǎn)單的方法是適合一些水果和蔬菜中五種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測(cè)[27]。

傳感器法：Shuo Wu等人研究了一次性乙酰膽堿酯酶（AChE）低電位（50毫伏）生物傳感器，擁有基于電化學(xué)還原氧化石墨烯和Nafion混合納米復(fù)合材料的修飾電極。該納米復(fù)合材料能夠?qū)щ?，擁有三維互穿網(wǎng)絡(luò)，是具備優(yōu)良特性的電極修飾材料。生物相容性基質(zhì)吸附乙酰膽堿酯酶后，該修飾電極用于電化學(xué)檢測(cè)敵敵畏。通過(guò)巧妙地控制的電化學(xué)還原變量和優(yōu)化電極的制備參數(shù)，該電化學(xué)生物傳感器具有靈敏度高(5～100ng/mL)，線性范圍寬（1～20 g/mL），檢測(cè)限低（2 ng/ mL），良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。而且，通過(guò)對(duì)真實(shí)樣品的分析，結(jié)果精確度高，表明能夠用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)[23]。

Jingjing Wang等開發(fā)了一種基于薄膜體聲波諧振器的高度敏感的無(wú)標(biāo)記的免疫傳感器用來(lái)檢測(cè)農(nóng)藥殘留。質(zhì)量敏感型薄膜體聲波諧振器在2 GHz工作。人工抗原通過(guò)自組裝方法被固定在諧振器的傳感表面，用于競(jìng)爭(zhēng)免疫分析。競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)是通過(guò)測(cè)量諧振頻率變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)的。根據(jù)農(nóng)藥存在和不存在條件下頻移量的縮減，確定農(nóng)藥的水平。檢測(cè)得到的檢測(cè)限是低硫磷0.08 g/L。進(jìn)一步用于檢測(cè)蔬菜樣品中痕量農(nóng)藥殘留，結(jié)果表明，該免疫傳感器與氣相色譜法相比，是一種快速、方便、高精度的檢測(cè)方法[32]。

Karaseva等利用聚合物為材料制作的壓電傳感器檢測(cè)了食品(肉、牛奶、雞蛋、蜂蜜)中的氯霉素殘留，檢測(cè)限為0.2 ng/mL,線性區(qū)間為0.5～100.0 ng/mL[16]。

Ferguson等報(bào)道了表面等離共振生物傳感器與Qflex氯霉素試劑盒檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留。在傳感器芯片上涂上氯霉素衍生物和抗體進(jìn)行測(cè)定,檢出限為0.02 g/kg[17]。氯霉素與合成的氯霉素胺類衍生物連接并固定于不能再生的右旋糖酐膜表面,通過(guò)表面離子共振產(chǎn)生信號(hào),該方法對(duì)蜂蜜樣品中氯霉素的檢測(cè)限為42.4 pg/mL[18]。

4 結(jié)論

雖然，用于直接檢測(cè)蜂產(chǎn)品中藥物殘留的研究報(bào)道不多，但殘留在蜂產(chǎn)品中的藥物在其他食品中的快速檢測(cè)方法有較多的報(bào)道。蜂產(chǎn)品中氯霉素、磺胺類抗生素的快速檢測(cè)方法均有研究；泰樂(lè)菌素、吡蟲啉、擬除蟲菊酯類、有機(jī)磷類藥物在蜂產(chǎn)品中的快速檢測(cè)方法雖沒(méi)有被檢索到，但在相關(guān)食品中的檢測(cè)方法都有報(bào)道；硝基咪唑類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類、吡喹酮、新煙堿類殺蟲劑的快速檢測(cè)方法均未給出相關(guān)的參照。

蜂產(chǎn)品過(guò)程中藥物殘留的控制需要一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)的檢測(cè)方法。因此，試紙法和比色法具有較強(qiáng)的應(yīng)用前景，同時(shí)，生物傳感器的進(jìn)一步研究與應(yīng)用對(duì)于藥物殘留快速檢測(cè)方法的改進(jìn)具有重要意義。

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Prospect analysis on drug residues controlled by rapid detection in bee products

Ma Changlu,Hou Sheng,Luo Hongxia,Wang Li,Liu Qing,Jia Hongliang,Liu Chao,Wang Changgang,Liu Xiaofei
(Beijing Vocational College of Agriculture,Beijing102442,China)

Studies on drug residues in bee products have been universal at home and abroad,but how to control it is a difficult problem.To effectively control drug residues,some easy,quick,accurate and cheap rapid detection methods must be developed.Through the analysis and comparation among the current status of drug residues in bee products,the current status of rapid detection methods on drug residues and the current status of rapid detection methods on drug residues in bee products,some veterinary drugs and pesticides are detectable with existiong technology,while some need to be developed further,which is proactive refference for drug controlling in bee products.

bee products;drug residues;rapid detection

北京市2014年“菜籃子”科技能力提升工程項(xiàng)目、北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院院級(jí)科研項(xiàng)目（XY-YF-13-15），北京高等學(xué)?！扒嗄暧⒉庞?jì)劃”（YETP1832）

馬長(zhǎng)路（1978-），男，黑龍江佳木斯人，副教授，碩士，研究方向：蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全控制技術(shù)。