小兒清咽顆粒中青黛的薄層色譜鑒別研究

張曉南毛云宏游燕周林

云南省藥物研究所，云南昆明650111

【摘要】目的：對(duì)小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜檢驗(yàn)存在的困難進(jìn)行研究，以期為提升小兒清咽顆粒的法定標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄中薄層色譜法和衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第六冊(cè)中小兒清咽沖劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)小兒清咽顆粒中青黛進(jìn)行薄層色譜研究。結(jié)果：采用回流或溫浴超聲的方法提取能明顯改善青黛提取效果，樣品在與靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)照品的位置可見(jiàn)清晰的斑點(diǎn)，陰性實(shí)驗(yàn)無(wú)干擾。結(jié)論：改進(jìn)后的方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠，增強(qiáng)了小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜鑒別的重復(fù)性和可鑒別性。

【關(guān)鍵詞】小兒清咽顆粒；青黛；薄層色譜

【中圖分類號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2015)22-0021-02

Abstract:Objective To solve the problem of Indigo Naturalis testing by TLC in the real job，to improve the assay for identification. Methods The research work was according to The People's Republic of China Pharmacopoeia 2010 edition and Pharmaceutical Standards of Traditional Chinese Medicine Drugs Preparation, to determine method. Results The spots in the chromatogram obtained with the test solution correspond in position and color to the spots in the reference solution, while there was no the same color spots in the control sample. Conclusion The assay method is feasible and rational, can be validated in the quality control.

Keywords:Xiao Er Qing Yan Granule;Indigo Naturalis;TLC

收稿日期：(2015.08.24)

Identification ofIndigoNaturalisin Xiao Er Qing Yan Granule by TLC

ZHANG XiaonanMAO YunhongYOU YanZHOU Lin

Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650111，China

小兒清咽顆粒是由玄參、蒲公英、牛蒡子(炒)、薄荷、蟬蛻、板藍(lán)根、連翹、牡丹皮、青黛九味藥材經(jīng)煎煮、濃縮、加入蔗糖、糊精等輔料制成的復(fù)方顆粒。具有清熱解表、解毒利咽的功效，用于小兒外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱頭痛、咳嗽音啞、咽喉腫痛。其標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第六冊(cè)(標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為：WS3-B-1092-92)[1]。小兒清咽顆粒的療效好、見(jiàn)效快、毒副作用低且口感較好，容易被兒童接受。小兒清咽顆粒的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定要進(jìn)行青黛的薄層色譜檢驗(yàn)，但按照現(xiàn)有法定標(biāo)準(zhǔn)的方法操作[1-2]，不論是按標(biāo)準(zhǔn)工藝將青黛包煎，提取浸膏制粒，還是在提取好的浸膏中直接散入青黛再制粒，薄層色譜檢驗(yàn)的結(jié)果都是陰性。在市場(chǎng)上購(gòu)買了多家廠商，多個(gè)批次的小兒清咽顆粒進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)也都呈現(xiàn)同樣的陰性結(jié)果。有文獻(xiàn)指出，按法定方法難以檢出靛藍(lán)，并從藥材相互助溶的角度加以探討[3]。由此可見(jiàn)，法定標(biāo)準(zhǔn)中的青黛鑒別方法存在一定的缺陷，需要改進(jìn)。

在檢測(cè)小兒清咽顆粒的另一味藥材牛蒡子時(shí)，其樣品液的提取工藝是回流提取，發(fā)現(xiàn)提取液可見(jiàn)微弱的藍(lán)色，分析原因可能來(lái)自于青黛的靛藍(lán)，以此推測(cè)青黛的提取效果受溫度的影響比較大。研究通過(guò)提高提取溫度，有可能解決青黛檢測(cè)困難的問(wèn)題，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

1.1儀器AG285型電子天平；XMTD-4000型水浴鍋；SK3200LH型超聲波清洗器；OBS-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2材料靛藍(lán)(批號(hào)：110716-201111，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；靛玉紅(批號(hào)：110717-200204，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；自制小兒清咽顆粒1批；陰性樣品顆粒(自制)；市售小兒清咽顆粒3批(編號(hào)1：批號(hào)2014018，重慶太極集團(tuán)四川南充制藥有限公司；編號(hào)2：批號(hào)20140803，建省泉州羅裳山制藥廠；編號(hào)3：批號(hào)141008，四川同人泰藥業(yè)有限公司)。水為純化水，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1供試品溶液制備

2.1.1方法1取本品4g，加含2%水合氯醛的三氯甲烷20ml，室溫26℃，40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)雍?%水合氯醛三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液(標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法)。

2.1.2方法2取取本品4g，加三氯甲烷20ml，40℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3方法3取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.4方法4取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴回流30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2對(duì)照品溶液的制備取靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)照品，分別加三氯甲烷配制為每毫升含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3陰性對(duì)照溶液的制備取陰性樣品顆粒4g，其余制法同供試品溶液制備方法3。

2.4展開(kāi)劑及展開(kāi)方式選擇法定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的展開(kāi)劑：甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)，上行展開(kāi)。

2.5檢視方法的選擇選擇法定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢視方法：取出，晾干，置日光下檢視，斑點(diǎn)顏色清晰。

2.6薄層板的選擇硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；硅膠G薄層板(青島美高集團(tuán)有限公司)；硅膠G薄層板(上海默克化工)，都可以取得較好的展開(kāi)效果。實(shí)驗(yàn)選擇斑點(diǎn)顯色最為清晰的上海默克化工技術(shù)有限公司生產(chǎn)的硅膠G薄層板。

2.7點(diǎn)樣方式與點(diǎn)樣量點(diǎn)樣方式為接觸點(diǎn)樣；點(diǎn)樣量為3、5、10、15μl。對(duì)照品溶液點(diǎn)樣量10μl及供試品溶液點(diǎn)樣量為10μl時(shí)能明顯檢出。

2.8溫度及相對(duì)濕度的影響按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察在20℃、25℃、35℃，相對(duì)濕度為35%～70%時(shí)展開(kāi)對(duì)薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果在上述溫度、相對(duì)濕度范圍內(nèi)對(duì)該薄層色譜結(jié)果無(wú)明顯影響。

2.9預(yù)平衡的影響按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察未飽和、飽和15min、飽和30min對(duì)薄層色譜斑點(diǎn)的影響。結(jié)果在上述條件下，薄層色譜斑點(diǎn)均清晰明顯，分離度好。為了簡(jiǎn)化操作程序，采用未經(jīng)飽和展開(kāi)。

2.10結(jié)果在上述條件下，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液的點(diǎn)樣量都為10μl，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)，取出，晾干，置日光下檢視，自制的小兒清咽顆粒和市售的3批小兒清咽顆粒樣品，采用方法2、3、4制備的供試品溶液，所得薄層色譜都可呈現(xiàn)與靛藍(lán)及靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)應(yīng)的清晰斑點(diǎn)，而方法1(標(biāo)準(zhǔn)方法制備)的供試品溶液色譜圖中未見(jiàn)明顯斑點(diǎn)。由此可知，提取溫度為40℃或60℃時(shí)，超聲提取和60℃回流提取樣品中的靛藍(lán)及靛玉紅都可以得到滿意的提取效果。由薄層色譜中靛藍(lán)及靛玉紅斑點(diǎn)的清晰程度來(lái)看，三種提取方法的提取效果沒(méi)有明顯差別，都較為理想。見(jiàn)圖1、2。

圖1　小兒清咽顆粒青黛不同提取方法的薄層色譜

圖2　不同批次小兒清咽顆粒青黛的薄層色譜

4討論

由結(jié)果可知，將提取溫度由室溫提高到40℃或60℃后，無(wú)論是超聲還是回流提取都能得到較為理想的結(jié)果，建議在將來(lái)法定標(biāo)準(zhǔn)提高時(shí)能將青黛鑒別檢驗(yàn)的樣品溶液處理方法變更為回流或溫浴超聲。另外，靛玉紅在供試品色譜中也呈現(xiàn)出了明顯的斑點(diǎn)，在將來(lái)的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高中，可考慮將靛玉紅也納入鑒別，以便青黛能得到更為全面的質(zhì)量控制。此外，筆者考察過(guò)水合氯醛對(duì)提取效果的影響，結(jié)果表明影響并不明顯，為操作簡(jiǎn)便，可以選擇不加入。

法定方法建立時(shí)，必定也經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，研究通過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，當(dāng)室溫達(dá)到32℃時(shí)，超聲提取不需要溫浴所得提取液就可以在薄層色譜中顯現(xiàn)較為明顯的斑點(diǎn)。另外，小兒清咽顆粒的處方中還含有板藍(lán)根，板藍(lán)根中也含有靛藍(lán)和靛玉紅，但陰性樣品的薄層色譜中并未清晰顯現(xiàn)靛藍(lán)和靛玉紅的斑點(diǎn)，由此可知小兒清咽顆粒中的靛藍(lán)和靛玉紅主要來(lái)自于青黛，而來(lái)源于板藍(lán)根的靛藍(lán)和靛玉紅由于藥材中的含量就較低[4-5]，轉(zhuǎn)移到制劑中的量過(guò)少，故而不能被薄層色譜法檢出。

參考文獻(xiàn)

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