HPLC法測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿的含量

錢芳陸超

江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇南京210029

【摘要】目的：用高效液相色譜法測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿含量。方法：采用Hedera C18柱(250×4.6 mm，5μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50，每100ml加十二烷基磺酸鈉 0.1g)為流動相，流速為1.0ml·min`(-1)，檢測波長265nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿的檢測濃度在3.8125～122.0μg·ml`(-1)范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，平均加樣回收率為100.70%，RSD=0.85%(n=6)。結(jié)論：HPLC法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿含量。

【關(guān)鍵詞】止癢洗劑；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿

作者簡介：錢芳(1975-)，副主任中藥師，主要從事中藥制劑和新藥研究工作。

【中圖分類號】R284.1

【文獻標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2015)22-0025-02

Abstract:Objective To establish a method for the determination of berberine hydrochloride in ZhiYang Lotion by HPLC. Methods The Hedera C18 column(250 mm x 4.6 mm，5 μm)was used，acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(50∶50，0.1 g sodium dodecyl sulfonate add in each 100 ml solution)as the mobile phase. The flow rate was 1.0 ml·min`(-1)，and the detection wavelength was 265 nm. Results The linear range of berberine hydrochloride was 0.8844-28.3 μg·ml`(-1) (r=1.0000)，the average recovery rate was 100.70%，and RSD was 0.85% (n=6).Conclusion The method is simple，rapid,accurate and reliable. It can be used for the content determination of berberine hydrochloride in ZhiYang Lotion.

Keywords:ZhiYang Lotion；HPLC；berberine hydrochloride

收稿日期：(2015.10.12)

Determination of Berberine Hydrochloride in ZhiYang Lotion by HPLC

QIAN FangLU Chao

Division of hospital medicine in Jiangsu Province，Nanjing 210029,China

止癢洗劑由黃柏、蛇床子、蒼術(shù)、枯礬等藥組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功能，主治濕瘡、疥癬等瘙癢性皮膚病。黃柏為方中主藥，鹽酸小檗堿為其所含的主要活性成分之一，其含量測定法中高效液相色譜法報道較多，較為穩(wěn)定，快捷。為保證藥品質(zhì)量，本實驗采用高效液相色譜法測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀：G1322A脫氣機，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A VWD檢測器，Agilent ChemStation(美國安捷倫公司)；1/10萬電子分析天平(BP-211D型，德國Sartorius)；KQ-1000E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；101-1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(南通滬通制藥機械設(shè)備廠)；HH-4數(shù)顯型恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2試藥鹽酸小檗堿對照品(批號110713-200208，供含量測定用)，購自中國藥品生物制品檢定所；止癢洗劑(批號120115、120227、120302)，江蘇省中醫(yī)院制劑部生產(chǎn)；高效液相色譜所用試劑為色譜純；水為超純水；其它試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件[1]色譜柱：Hedera C18柱(250×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50，每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g)；檢測波長：265nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml·min-1；進樣量10μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml含244μg的溶液。

2.2.2供試品溶液的制備精密吸取止癢洗劑樣品2ml，置50ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲20min，再加甲醇定容至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對照品溶液的制備按照止癢洗劑的制備工藝制備缺黃柏的陰性樣品，按“2.2.2”的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，在上述色譜條件下分別進樣10 μl，記錄色譜圖。由色譜圖可知，供試品溶液色譜中，在與鹽酸小檗堿對照品色譜峰相應(yīng)位置上有相應(yīng)峰，而陰性對照品溶液色譜中無此峰，說明陰性對照品無干擾。在此條件下，鹽酸小檗堿峰與樣品中其它組分色譜峰可達基線分離，分離度大于1.5；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算，應(yīng)小低于5000。見圖1。

2.4線性關(guān)系考察取上述對照品溶液，用甲醇分別稀釋至122.0、61.0、30.5、15.25、7.625、3.8125μg·ml-1，分別精密吸取各不同濃度的對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀中測定。經(jīng)線性回歸，得鹽酸小檗堿回歸方程y=45.65x﹢4.4244，r=0.9999，鹽酸小檗堿在3.8125～122.0μg·ml-1范圍內(nèi)，與峰面積的積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗取同一對照品溶液，精密吸取10 μl，注入高效液相色譜儀，重復(fù)測定6次，以峰面積計算，RSD為0.48%(n=6)。試驗結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗精密吸取同一個批號的止癢洗劑樣品(120115)2ml，共6份，依法制備供試品溶液，測定，以鹽酸小檗堿含量計算，RSD為0.73%(n=6)。結(jié)果表明，重復(fù)性較好。

2.7穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0、2、4、6、8、12 h分別進樣，測定色譜峰面積，RSD為0.71%(n=6)，說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗按加樣回收率試驗要求，精密稱取已知含量的止癢洗劑樣品(批號120115)6份，分別加入鹽酸小檗堿對照品，依法制備供試品溶液，精密吸取10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，平均回收率為100.70%，RSD為0.85%。見表1。

表1　加樣回收率試驗結(jié)果表

2.9樣品含量測定取3個批號止癢洗劑樣品，每批兩份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣，測定，計算結(jié)果見表2。

表2　樣品含量測定結(jié)果表

3討論

3.1流動相的選擇本試驗曾先后參考藥典[1]和文獻[2-3]所用流動相測定樣品中的鹽酸小檗堿含量，結(jié)果采用藥典流動相系統(tǒng)分離效果最佳，保留時間適度。因此，確定其為本法的流動相。

3.2樣品超聲時間的選擇在本實驗中對樣品超聲時間 10、20、30、40min進行了考察，測定結(jié)果顯示，超聲處理20、30、40min鹽酸小檗堿含量接近，超聲10min含量低，故選擇超聲時間為20min。

3.3HPLC法測定HPLC法測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿含量簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：286.

[2]馬永貴，謝委，方建國，等．高效液相色譜法測定潔澤洗液中鹽酸小檗堿含量[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30(11)：1484-1486.

[3]吳曉明，金勝先，徐衡．泌感片的薄層鑒別和鹽酸小檗堿的含量測定[J]．安徽醫(yī)藥， 2009，13(5)：504-506.

文獻綜述