徐　玫,張忠泉,王璟奕

(1.河南大學(xué) 藥學(xué)院 河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封475004)

同時(shí)測(cè)定銀黃膠囊中綠原酸、木犀草苷和黃芩苷的含量

徐玫1,張忠泉1,王璟奕2

(1.河南大學(xué) 藥學(xué)院 河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封475004)

摘要：目的建立同時(shí)測(cè)定銀黃膠囊中綠原酸、木犀草苷和黃芩苷含量的方法。方法HPLC等度洗脫法。C18色譜柱；流動(dòng)相為甲醇∶水∶磷酸(53∶47∶0.1)；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長328 nm；柱溫30℃。結(jié)果綠原酸在2.200～44.00 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 9)、木犀草苷在0.080～22.00 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 5)、黃芩苷在24.20～242.0 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 2)線性關(guān)系均良好；其平均回收率分別為99.6%、99.3%和99.7%。結(jié)論該方法操作簡便，成本低，工作效率高，可作為銀黃膠囊質(zhì)量的控制方法。

關(guān)鍵詞：HPLC法；銀黃膠囊；綠原酸；木犀草苷；黃芩苷；同時(shí)測(cè)定

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：識(shí)碼： A

文章編號(hào)：章編號(hào)： 1672-7606(2015)01-0029-03

收稿日期：2014-10-1

基金項(xiàng)目：河南大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(10NB028)。

作者簡介：徐玫(1968-)，女，河南開封人，副教授，從事藥物質(zhì)量控制工作。

Abstract:ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid, galuteolin and baicalin in Yinhuang Capsule. MethodsHPLC method Isocratic elution. column:C18column; mobile phase: methanol-water-phosphoric acid (53∶47∶0.1); flow rate:1.0 mL/min; detection wavelength:328 nm; column temperature:30 ℃. ResultsChlorogenic acid in within the range of 2.200～44.00 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9999), the average recovery was 99.6%; galuteolin in within the range of 0.080～22.00 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9995), the average recovery was 99.3%; baicalin in within the range of 24.20～242.0 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9992), the average recovery was 99.7%. Conclusion The method is simple and increases efficiency, can be used as a method of the determination of silver yellow capsule.

Simultaneous determination chlorogenic acid, galuteolin and baicalin of Yinhuang Capsule

XU Mei1, ZHANG Zhongquan1, WANG Jingyi2

(1.HenanUniversityCollegeofPharmacyDepartment,Kaifeng,Henan475004,China; 2.HenanUniversityCollegeofEducationScience,Kaifeng,Henan475004,China)

Key words: HPLC method; Yinhuang Capsule; chlorogenic acid; galuteolin; baicalin; simultaneous determination

銀黃制劑主要是由金銀花和黃芩藥材經(jīng)提取精致而成，金銀花其活性成分主要為有機(jī)酸類(綠原酸、異綠原酸等)、黃酮類(木犀草苷等)；黃芩中的主要成分為黃芩苷。該類制劑具有清熱解毒、消炎等功效，應(yīng)用于臨床多達(dá)十幾種劑型[1]。但現(xiàn)行版的《中國藥典》收載的劑型只有銀黃口服液和銀黃顆粒沖劑，均采用反相高效液相色譜法對(duì)其中的有效成分黃芩苷和綠原酸分別進(jìn)行測(cè)定[2]。目前國內(nèi)文獻(xiàn)[3-8]報(bào)道的對(duì)銀黃制劑分別測(cè)定及同時(shí)測(cè)定的目標(biāo)性物質(zhì)，也均是綠原酸和黃芩苷兩種有效成分。為更有效地控制銀黃制劑的質(zhì)量，提高工作效率、降低成本，對(duì)金銀花中另一主要活性成分木犀草苷[9-11]同時(shí)進(jìn)行測(cè)定很有必要。

1儀器、試劑與試藥

1.1　儀器

LC2010A高效液相色譜儀、二極管陣列檢測(cè)器(日本島津公司)； AS3120超聲儀(奧特賽恩斯儀器有限公司)；BP211D電子天平(Sartorius公司)。

1.2　藥品和試劑

銀黃膠囊(通化久銘藥業(yè)有限公司，批號(hào)：090801、090802、090803)；黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)：110715-200914)和綠原酸對(duì)照品(批號(hào)：110753-200913)，木犀草苷對(duì)照品(批號(hào)：1117202200604)(中國藥品生物制品檢定所)；甲醇(色譜純，天津賽孚世紀(jì)科技發(fā)展有限公司)；磷酸(分析純，濟(jì)南金恒益化工有限公司)；樂百氏飲用純凈水(樂百氏(廣東)食品飲料有限公司)。

2方法與結(jié)果

2.1　色譜條件

色譜柱：C18柱(5 μm 250 mm×4.6 μm)；流動(dòng)相為甲醇∶水∶磷酸(53∶47∶0.1)；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長：328 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

2.2　對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品0.220 0 mg、木犀草苷對(duì)照品0.110 0 mg和黃芩苷對(duì)照品1.210 0 mg，分置3個(gè)5 mL棕色量瓶中；各加體積分?jǐn)?shù)60%甲醇適量，超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得44.00 μg/mL綠原酸對(duì)照液、22.00 μg/mL木犀草苷對(duì)照液及242.0 μg/mL黃芩苷對(duì)照液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20 μL測(cè)定，混合對(duì)照品色譜圖見圖1。

2.3　供試品溶液的制備

取同批次銀黃膠囊20粒，去除囊殼，稱取內(nèi)容物5份，每份約0.1 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑約40 mL，超聲提取50 min，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑至刻度，搖勻，過濾。精密量取1 mL濾液至25 mL棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得，供試品色譜圖見圖2。

2.4　線性關(guān)系的考察

分別精密量取黃芩苷對(duì)照液、綠原酸對(duì)照液和木犀草苷對(duì)照液各適量，分別加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑稀釋制成不同梯度濃度的溶液。按上述色譜條件，分別精密吸取各系列對(duì)照液20 μL進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，黃芩苷回歸方程：y=34.728x-158.73，r2=0.999 2；綠原酸回歸方程：y=51.161x+0.785 6，r2=0.999 9；木犀草苷回歸方程：y=2 537.98x+269.08，r2=0.999 5。

2.5　精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一黃芩苷、綠原酸和木犀草苷對(duì)照品混合溶液20 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得三者峰面積的RSD分別為1.7%、1.8%和2.0%。

2.6　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取供試品溶液20 μL，依上述色譜條件分別于0，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，黃芩苷、綠原酸和木犀草苷峰面積的RSD分別為1.9%、1.7%和2.3%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7　回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取同批次樣品9份(約半粒內(nèi)容物的量)于10 mL棕色量瓶中；按以下要求分別加入依“2.2”法制備的黃芩苷、綠原酸和木犀草苷對(duì)照液。在1～3號(hào)樣品中加入3.0 mL對(duì)照液；4～6號(hào)樣品中加入4.0 mL對(duì)照液；7～9號(hào)樣品中加入5.0 mL對(duì)照液。加體積分?jǐn)?shù)60%甲醇溶劑適量，超聲提取50 min，定容，過濾，按上述色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算出回收率，結(jié)果見表1。

表1　黃芩苷、綠原酸和木犀草苷的回收率實(shí)驗(yàn)(n=9)

2.8　樣品含量測(cè)定

分別取3批次銀黃膠囊，按“2.3”法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，按回歸方程計(jì)算，每批次平行測(cè)定3次，結(jié)果見表2。

3討論

用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)綠原酸、木犀草苷和黃芩苷的對(duì)照品色譜峰進(jìn)行紫外掃描：綠原酸次強(qiáng)吸收分別在218 nm和318 nm，最強(qiáng)吸收在328 nm；黃芩苷次強(qiáng)吸收在328 nm，最強(qiáng)吸收在278 nm；木犀草苷最強(qiáng)吸收在220 nm，但此處溶劑峰會(huì)產(chǎn)生干擾，次強(qiáng)吸收分別在255 nm和350 nm處。由于銀黃膠囊中木犀草苷的含量低于綠原酸且兩者含量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于黃芩苷，若以最低含量的木犀草苷的次強(qiáng)吸收255 nm和350 nm為檢測(cè)波長，綠原酸、黃芩苷的吸收均較弱(吸收處于峰谷或峰末尾處)；而在綠原酸的最強(qiáng)吸收328 nm處，黃芩苷有次強(qiáng)吸收，木犀草苷也有較強(qiáng)吸收。因此，為減小測(cè)量誤差，以三者吸收均較強(qiáng)的328 nm作為檢測(cè)波長。

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[責(zé)任編輯李武營]