HPLC法測定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量

陳健

(重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶408000)

摘要：目的建立含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量測定的高效液相色譜方法。方法色譜柱為Agilent C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水(75∶25)；流速為1.0 mL·min`(-1)；檢測波長為321 nm；柱溫為30 ℃。結(jié)果白花前胡甲素質(zhì)量濃度在10.13～200.26 μg·mL`(-1)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 2)，加樣回收率為98.9%，RSD為0.46%(n=6)；白花前胡乙素質(zhì)量濃度在10.36～200.72 μg·mL`(-1)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 1)，加樣回收率為98.6%，RSD為0.55%(n=6)。結(jié)論該方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量測定。

關(guān)鍵詞:白花前胡甲素；白花前胡乙素；含化上清片；高效液相色譜法

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.010

中圖分類號：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2015)03-0251-03

Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets. Methods Agilent C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with methanol-water(75∶25) as the mobile phase.The detection wavelength was 321 nm;The flow rate was 1.0 mL·min`(-1). The column temperature was 30 ℃.Results The sample of praeruptorin A in the range of 10.13-200.26 μg·mL`(-1) showed the good linear relation with the peak area (r=0.999 2).The average recovery rate was 98.9%，and RSD was 0.46%(n=6).The sample of praeruptorin B in the range of 10.36-200.72 μg·mL`(-1)showed the good linear relation with the peak area (r=0.999 1).The average recovery rate was 98.6%，with RSD 0.55%(n=6).Conclusion The method is simple, accurate and reproducible.It can be used to determine praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets.

收稿日期：(2014-10-29)

Determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets by HPLC

CHEN Jian(Fuling Institute for Food and Drug Control, Chongqing 408000，China)

Key words: praeruptorin A；praeruptorin B；Hanhuashangqing Tablets；HPLC

含化上清片由前胡、桔梗、天花粉等7味中藥組成，具有利咽生津、清喉散火的功效。方中的前胡是主藥，有效成分為白花前胡甲素和白花前胡乙素等。原標(biāo)準(zhǔn)未作前胡的含量測定[1]，筆者參考文獻(xiàn)[2-5]，采用高效液相色譜法對含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量進(jìn)行測定。

1儀器與試藥

1.1儀器安捷倫1260高效液相色譜儀；Sartorius-ME215S電子天平。

1.2試藥含化上清片(漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司，批號20140101， 20140113,20140301)；白花前胡甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號111904-201203，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%)；白花前胡乙素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號111711-200602，質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%)；甲醇為色譜純(經(jīng)0.45 μm濾膜過濾)；水為超純水；其余試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent C18柱；流動相為甲醇-水(75∶25)；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為321 nm；柱溫為30 ℃。

2.2溶液制備精密稱取白花前胡甲素對照品20.26 mg、白花前胡乙素對照品20.72 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，作為母液；再精密量取2 mL，置于50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，即得對照品溶液。精密取樣品約2 g，置于錐形瓶中，加入三氯甲烷100 mL，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)15 min，放冷，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按含化上清片制備工藝，制備缺前胡的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1陰性干擾實(shí)驗(yàn)按擬定的色譜條件，取2.2項(xiàng)下3種溶液，依法進(jìn)行測定。結(jié)果在供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時(shí)間處有一致的色譜峰，陰性對照品溶液無此色譜峰，見圖1。

2.3.2線性關(guān)系考察取2.2項(xiàng)下的母液對照品，分別精密量取1,5,10,15,20 mL，分別定容于100 mL量瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定，以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)、以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得回歸方程：白花前胡甲素:Y=14 561X+1.455 8,r=0.999 2,質(zhì)量濃度在10.13～200.26 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。白花前胡乙素:Y=18 911X+43.213，r=0.999 1，質(zhì)量濃度在10.36～200.72 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1HPLC圖

A.陰性對照品； B.對照品； C.供試品 ；1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素

Fig.1 HPLC chromatograms

A.sample withoutRadixpeucedani;B.reference substances;C.sample;1.praeruptorin A;2.praeruptorin B

2.3.3精密度實(shí)驗(yàn)取2.2項(xiàng)下對照品溶液，進(jìn)樣量10 μL，連續(xù)測定6次，結(jié)果白花前胡甲素、白花前胡乙素的峰面積的RSD為0.64%和0.72% (n=6)。

2.3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取批號為20130901的樣品，依法制備6份供試品溶液，分別測定含量，白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量的RSD為0.53%和0.57% (n=6)。

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于制備后0,2,4,8,12和24 h后進(jìn)樣10 μL，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面積的RSD分別為0.67%和0.73% (n=6)。

2.3.6加樣回收實(shí)驗(yàn)取批號為20140101的樣品6份，精密加入白花前胡甲素對照品(質(zhì)量濃度為0.040 52 mg·mL-1)和白花前胡乙素對照品(質(zhì)量濃度為0.041 44 mg·mL-1)適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定，計(jì)算回收率,結(jié)果白花前胡甲素平均回收率為 98.87%，RSD%為0.46%(n=6)；白花前胡乙素平均回收率為 98．64%，RSD%為0.55(n=6)，結(jié)果見表1。

表1回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab. 1 Results of recovery tests

( n=6)

2.4樣品測定按擬定含量測定方法測定3批樣品，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果3批(批號20140101，20140113 ，20140301)中含化上清片白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量分別為0.261 2和0.103 1,0.251 8和0.094 2,0.257 5和0.091 6 mg·g-1。

3討論

取白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品溶液，在200～400 nm波長處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品均在320 nm處有最大吸收，參照《中國藥典》2010年版一部 “前胡”項(xiàng)下的檢測波長，將檢測波長定為321 nm。

參考文獻(xiàn)：

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[2]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:248.

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