于婧，王鳳琴，姚文娟，張偉強(qiáng)(中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院，河北廊坊065000)

結(jié)直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin表達(dá)變化及意義

于婧，王鳳琴，姚文娟，張偉強(qiáng)
(中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院，河北廊坊065000)

摘要:目的觀察結(jié)直腸癌組織中3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1( PDK1)、Bcl-2、survivin表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)52例份結(jié)直腸癌組織(癌癥組)及癌旁正常腸黏膜組織(對(duì)照組)、38例份腺瘤組織(腺瘤組)中的PDK1、Bcl-2、survivin蛋白，分析其與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系及三者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果癌癥組PDK1、Bcl-2、survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腺瘤組和對(duì)照組，P均＜0.05。PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達(dá)均與結(jié)直腸癌T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)( P均＜0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤分級(jí)等因素?zé)o關(guān)( P均＞0.05)。結(jié)直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達(dá)兩兩互為正相關(guān)( P均＜0.05)。結(jié)論結(jié)直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin呈高表達(dá)，三者可能在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有一定的協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞:結(jié)直腸癌; 3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1; B淋巴細(xì)胞瘤/白血病2基因;生存素

3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1( PDK1)是蛋白激酶B ( PKB)、核糖體蛋白S6激酶、蛋白激酶C ( PKC)等AGC激酶活化環(huán)的上游激酶之一［1］，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移及抗凋亡作用［2］。目前，Bcl-2 和survivin均為研究比較成熟的細(xì)胞凋亡抑制因子，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2014年7～10月，我們采用免疫組化法檢測(cè)了結(jié)直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin蛋白的表達(dá)情況，探討其在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1　材料與方法

1.1臨床資料收集我院2013年2月～2014年6月存檔的診斷明確、臨床資料完整的結(jié)直腸癌標(biāo)本52例份(癌癥組)，患者中男30例、女22例，年齡( 59.38±9.72)歲，術(shù)前均未行化療或放射治療;腫瘤分級(jí)為高分化7例，中分化34例，低分化11例; T分期( AJCC，第7版) T1～T2期17例，T3期26例，T4期9例;無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例。隨機(jī)選取同期收治的結(jié)直腸腺瘤標(biāo)本38例份(腺瘤組)，患者中男22例、女16例，年齡( 54.63± 10.54)歲。收集癌癥組癌旁正常腸組織52例份作為對(duì)照組。三組年齡、性別具有可比性。

1.2 PDK1、Bcl-2、survivin表達(dá)檢測(cè)采用免疫組化SP法。PDK1、Bcl-2、survivin抗體均以1∶50稀釋后，按照SP-9000免疫組化試劑盒、ZLI-9017濃縮型DAB試劑盒說明進(jìn)行。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知PDK1、Bcl-2、survivin陽(yáng)性表達(dá)的組織切片為陽(yáng)性對(duì)照。PDK1蛋白陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜內(nèi)，Bcl-2、survivin蛋白陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒樣。每張切片于高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野，每視野細(xì)胞數(shù)不少于100個(gè)。采用半定量計(jì)分法，陽(yáng)性細(xì)胞比例0、≤25%、25%～50%、50%～75%、＞75%分別計(jì)0～4分，染色強(qiáng)度無(wú)、弱、中、強(qiáng)分別計(jì)0～3分，兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加≥2分為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。各組陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)及連續(xù)性校正的χ2檢驗(yàn)，蛋白表達(dá)相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組PDK1、Bcl-2、survivin陽(yáng)性表達(dá)率比較癌癥組、腺瘤組和對(duì)照組PDK1陽(yáng)性表達(dá)率分別為69.23%( 36/52)、21.05% ( 8/38)、7.69% ( 4/52)，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.46% ( 33/52)、23.68% ( 9/38)、9.62%( 5/52)，survivin陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.85% ( 41/52)、18.42% ( 7/38)、14.58 % ( 7/52)。癌癥組PDK1、Bcl-2、survivin陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于腺瘤組和對(duì)照組，P均＜0.05。

2.2 PDK1、Bcl-2、survivin表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1　 PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系［例( %)］

2.3直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin表達(dá)的關(guān)系相關(guān)性分析顯示，結(jié)直腸癌組織中PDK1與Bcl-2蛋白表達(dá)同時(shí)陽(yáng)性率為53.85% ( 28/52)，同時(shí)陰性率為21.15% ( 11/52)，二者呈正相關(guān)( r = 0.446，P＜0.05) ; PDK1與survivin蛋白表達(dá)的同時(shí)陽(yáng)性率為61.54% ( 32/52)，同時(shí)陰性率為13.46% ( 7/52)，二者表達(dá)呈正相關(guān)( r = 0.369，P＜0.05) ; survivin與Bcl-2蛋白同時(shí)陽(yáng)性率51.69% ( 30/52)，同時(shí)陰性率為15.38% ( 8/52)，二者呈正相關(guān)( r = 0.389，P＜0.05)。

3　討論

PDK1是一種63 kD的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，包括C端的血小板—白細(xì)胞C激酶底物同源性結(jié)構(gòu)域和N端的激酶結(jié)構(gòu)域［3］，PH結(jié)構(gòu)域結(jié)合P13K產(chǎn)物三磷酸肌醇，使PDKl靶向胞膜并激活A(yù)kt，從而作用于下游的多種底物如NF-кB、Caspase-9、內(nèi)皮型一氧化氮合酶等［4］，繼而影響細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、抗凋亡和血管生成等生物學(xué)效應(yīng)［5］。由PDK1介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)通路異常已被證明與多種惡性腫瘤有關(guān)［6～9］。本研究結(jié)果顯示，癌癥組PDK1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于腺瘤組、對(duì)照組，且與腫瘤T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

Bcl-2是發(fā)現(xiàn)較早的凋亡抑制因子，是線粒體膜滲透性改變的內(nèi)源性抑制物，在增殖狀態(tài)的細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)維持細(xì)胞代謝有重要作用。染色體易位可導(dǎo)致Bcl-2過量表達(dá)，通過阻止線粒體釋放細(xì)胞色素C從而阻斷蛋白酶連鎖反應(yīng)的激活，延長(zhǎng)細(xì)胞生存期，使細(xì)胞增殖與凋亡平衡紊亂，促使腫瘤發(fā)生發(fā)展［10］。survivin基因是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，定位于人類染色體17q25。有研究發(fā)現(xiàn)，survivin直接與Caspase-9結(jié)合抑制其促凋亡功能，或通過結(jié)合線粒體釋放的Caspases激活物間接抑制細(xì)胞凋亡［11，12］。細(xì)胞凋亡的過程較為復(fù)雜，已有大量文獻(xiàn)證實(shí)，Bcl-2與survivin表達(dá)在胃癌［13］、結(jié)腸癌［14］、宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中呈正相關(guān)，具有協(xié)同抗凋亡作用。Kawasaki等［15］檢測(cè)171例結(jié)腸癌組織中survivin、Bcl-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者顯著相關(guān)，二者均可被缺少TATA而富含GC的啟動(dòng)子調(diào)控，在增生活躍的細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄。提示它們有著共同或相似的轉(zhuǎn)錄激活機(jī)制，并協(xié)同發(fā)揮抗凋亡作用。Rajput等［16］研究顯示，PDK1的磷酸化激活，通過影響線粒體損傷以及Bcl-2、Bcl-xL、survivin的調(diào)節(jié)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程。本研究結(jié)果顯示，癌癥組Bcl-2、survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于腺瘤組及對(duì)照組，與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且二者與PDK1表達(dá)互為正相關(guān)。因此，結(jié)直腸癌組織中PDK1、Bcl-2、survivin高表達(dá)，三者可能在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中具有一定的協(xié)同作用。

參考文獻(xiàn):

［1］Tamgüney T，Zhang C，F(xiàn)iedler D，et al.Analysis of 3-phophoinositide-dependent kinase-1 signaling and function in ES cells［J］.Exp Cell Res，2008，314( 11-12) : 2299-2312.

［2］Bayascas JR.PDK1: the major transducer of PI3-kinase actions ［J］.Curr Top Microbiol Immunol，2010，346( 1) : 9-29.

［3］Carnero A.The PKB/AKT Pathway in Cancer［J］.Curr Pharm Des，2010，16( 1) : 34-44.

［4］Ding Z，Liang J，Li J，et al.Physical association of PDK1 with AKT1 is sufficient for pathway activation independent of membrane localization and phosphatidylinositol 3 kinase［J］.PLoS One，2010，5( 3) : 9910.

［5］于婧，陳奎生，李亞南，等.RNA干擾抑制食管癌EC9706細(xì)胞中3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1基因的表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響［J］.中華腫瘤雜志，2011，33( 6) :

410-414.

［6］Raimondi C，F(xiàn)alasca M.Targeting PDK1 in cancer［J］.Curr Med Chem，2011，18( 18) : 2763-2769.

［7］Lin HJ，Hsieh FC，Song H，et al.Elevated phosphorylation and activation of PDK-1/AKT pathway in human breast cancer［J］.Br J Cancer，2005，93( 12) : 1372-1381.

［8］Saji M，Ringel MD.The PI3K-Akt-mTOR pathway in initiation and progression of thyroid tumors［J］.Mol Cell Endocrinol，2010，321( 1) : 20-28.

［9］宋世鐸，周健，朱東明，等.PDK1在胰腺癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.世界華人消化雜志，2012，20( 27) : 2632-2637.

［10］Konturek PC，Konturek SJ，Sulekova Z，et al.Expression of hepatocyte groht factor，transforming growth factor alpha，apoptosis related proteins Bax and Bcl-2，and gastrin cancer［J］.Alimeni Phannaeol Ther，2001，15( 7) : 989-999.

［11］Du C，F(xiàn)ang M，Wang XS.Smac，a mitochondrial protein that promotes cytochrome c-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition［J］.Cell，2000，102( 1) : 33-42.

［12］Verhagen AM，Ekert PG，Pkausch M，et al.Identification of DIABLO，a mammalian portein that promotes apoptosis by binding to and antagonizing IAP proteins［J］.Cell，2000，102( 1) : 43-53.

［13］周露婷，王翠翠，景洪標(biāo)，等.survivin和Bcl-2蛋白在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及其與化療藥物耐藥性關(guān)系的研究［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，22( 7) : 1627-1629.

［14］劉亮，陳建，劉鳳軍.結(jié)腸癌中hTERT的表達(dá)及其與survivin和bcl-2表達(dá)的關(guān)系［J］.中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2010，13( 3) : 173-176.

［15］Kawasaki H，Altieri DC，Lu CD，et al.Inhibition of apoptosis by survivin predicts shorter survival rates in colorectal［J］.Cance Res，1998，58( 22) : 5071-5074.

［16］Rajput S，Kumar BN，Dey KK，et al.Molecular targeting of Akt by thymoquinone promotes G( 1) arrest through translation inhibition of cyclin D1 and induces apoptosis in breast cancer cells［J］.Life Sciences，2013，93( 21) : 783-790.

收稿日期:( 2015-02-01)

文章編號(hào):1002-266X( 2015) 30-0034-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R735.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.013