張璐靚

鄭州市第九人民醫(yī)院　鄭州　450053

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PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細胞的價值探討

張璐靚

鄭州市第九人民醫(yī)院鄭州450053

【摘要】目的探討PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細胞的臨床價值。方法選取我院收治的急性淋巴細胞白血病患兒44例為研究對象(觀察組)，采用PCR定量檢測方法對腦脊液標(biāo)本的微量白血病細胞進行檢測，同時選擇40例健康兒童為對照組，行相同的檢測。觀察比較2組檢查結(jié)果，并對急性淋巴細胞白血病患者中PCR陽性情況與腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時間等進行對照。結(jié)果對照組均為PCR陰性，觀察組中16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測為PCR陽性，其中TCRr陽性4例，IgH CDR-Ⅲ陽性16例。先于常規(guī)腦脊液檢查，同時與腦脊液檢測獲得陽性結(jié)果的分別有5例和9例。臨床癥狀出現(xiàn)前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀，且經(jīng)腦脊液檢查無異常。所有PCR陽性患者經(jīng)治療后均轉(zhuǎn)陰。結(jié)論PCR方法能對早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細胞進行較準(zhǔn)確的檢測，且檢查的敏感性較高，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】PCR檢測；中樞神系統(tǒng)白血??；臨床價值

研究證實，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病是造成急性淋巴細胞白血病患者復(fù)發(fā)的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者的長期存活率[1]。本文就我院收治的急性淋巴細胞白血病患兒為研究對象，探討PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細胞的臨床價值。報告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選取我院收治的急性淋巴細胞白血病患者44例為研究對象，本次參與調(diào)查研究的患者均為12歲以下，且所有患者均符合《小兒急性白血病診療建議》中制定的診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)[2]。男26例，女11例；年齡4～12歲，平均(7.3±1.4)歲。其中，36例處于疾病的緩解期，8例為治療期。選擇40例健康兒童作對照，男30例，女14例，年齡4～12歲，平均(7.1±1.5)歲。2組被檢測者在性別、年齡等方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分別采集被檢測者的腦脊液標(biāo)本，每份4～6 mL，其中處于緩解期的急性淋巴細胞白血病患者每人采集3份腦脊液標(biāo)本，治療期患者和健康兒童每人采集1份腦脊液標(biāo)本，急性淋巴細胞白血病的患者和健康兒童分別采集116份和40份腦脊液標(biāo)本。將腦脊液進行離心分離，獲得細胞沉淀物后加入蒸餾水(0.5 mL)混合至均勻，轉(zhuǎn)移到EPP endorf管中，水浴加熱15 min，冷卻后再次離心，去除細胞碎片，在上清液中加醋酸鈉與無水乙醇，二者的劑量分別為上清液的1/10和2倍，置于-20 ℃的冰箱中冷凍>2 h，再次離心，室溫下進行干燥，并在TE10中溶解。

以TD-Veq和TD-Jr作為PCR引物擴增TCRr基因，以TD-V和TD-J擴增IgH CDR-Ⅲ基因。將模板DNA加入反應(yīng)體系中，經(jīng)高溫(95 ℃)變性，加Taq dNA聚合酶以及石蠟封口，不同溫度下循環(huán)反應(yīng)(依次選擇93 ℃、55 ℃和72 ℃)后。將PCR反應(yīng)液與溴酚藍載樣液混合、點樣，在紫外檢測儀上觀察。

2結(jié)果

觀察2組PCR檢測結(jié)果可見，40例健康兒童檢測均為PCR陰性，44例急性淋巴細胞白血病患兒中，16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測為PCR陽性，其中TCRr陽性4例，IgH CDR-Ⅲ陽性16例。

將急性淋巴細胞白血病患者中PCR陽性情況與患兒的腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時間等進行對照，可見先于常規(guī)腦脊液檢查、同時與腦脊液檢測獲得陽性結(jié)果的分別有5例和8例，無陽性表現(xiàn)2例。先于臨床癥狀出現(xiàn)之前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀，且經(jīng)腦脊液檢查無異常。

3討論

白血病是臨床較常見的一種造血系統(tǒng)惡性腫瘤，對患者健康造成巨大威脅。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進步和發(fā)展，急性淋巴細胞白血病的治療取得很大進步，患者的完全緩解率、治療后生存時間等均顯著提高，但復(fù)發(fā)率仍高達30%～40%[3]。而研究證實微小殘留病是引起白血病復(fù)發(fā)的重要因素。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理構(gòu)造的特殊性常成為白血病復(fù)發(fā)的根源，研究認為急性淋巴細胞白血病患者一半左右的B細胞，幾乎所有的T細胞內(nèi)均存在TCRr基因重排現(xiàn)象，而4/5的B細胞和1/10 T細胞均存在IgH CDR-Ⅲ基因(免疫球蛋白重鏈基因重排產(chǎn)生的第3互補決定區(qū))重排現(xiàn)象[4]，通過PCR引物對其進行體外擴增則可對患者腦脊液中的微量白細胞進行有效檢測。

本文健康兒童的PCR檢測結(jié)果均呈陰性，而16例患者的檢測結(jié)果呈陽性，與常規(guī)腦脊液檢查結(jié)果及臨床表現(xiàn)對照后，只有2例不符合，且28.6%的患者檢測陽性先于腦脊液，78.6%的患者先于臨床癥狀出現(xiàn)。同時，考慮復(fù)發(fā)早期腦脊液中的白血病數(shù)量少，易漏診。故PCR檢測的敏感性更強。

總之，PCR方法能對早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細胞進行較準(zhǔn)確的檢測，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

4參考文獻

[1]呂曉東，辛亞萍，丁晶，等.急性白血病骨髓中微小殘留病與中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的關(guān)系[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，17(17)：59-60.

[2]宋斌，陳雁.腦脊液Cystatin C對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的早期診斷價值[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，23(21)：2 360-2 361.

[3]徐翀，何妙俠，鄭建民.兒童急性淋巴細胞白血病微小殘留病檢測及其進展[J].海峽醫(yī)學(xué)，2013，28(4)：342.

[4]羅建蓉，賈永前.實時熒光定量PCR在監(jiān)測微量殘留性白血病中的應(yīng)用[J].華西醫(yī)學(xué)，2006，21(2)：417-418.

(收稿2015-03-15)

【中圖分類號】R733.7

【文獻標(biāo)識碼】B

【文章編號】1673-5110(2016)02-0102-02