包長(zhǎng)龍薩茹拉趙東鯤.內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古　通遼　08000; .內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古　呼和浩特　00000

HPLC法測(cè)定阿日申－18中梔子苷的含量

包長(zhǎng)龍1薩茹拉2趙東鯤1
1.內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古通遼028000; 2.內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010000

【摘要】目的:測(cè)定阿日申－18中梔子苷的含量.方法:采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈－水(15∶85)，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm，流速為1. 0 ml/min.結(jié)果:梔子苷在0. 065 0～0. 812 5 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.梔子苷平均加樣回收率為101. 7%，RSD為1. 5%(n =9).結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便、靈敏，可用于制劑的質(zhì)量控制.

【關(guān)鍵詞】阿日申－18;梔子苷; HPLC

阿日申－18是由楓香脂、冬葵果、決明子、黨參、草烏(制)、麻黃、苦參、黃精、梔子、文冠木、木香、五靈脂(制)、石菖蒲、訶子、川楝子、瞿麥、黑云香、人工麝香十八味藥組成的水丸，該方具有清熱、瀉火、涼血的功效[1－2]，可治療銀屑病、皮膚瘙癢、濕疹、癤腫、梅毒等各種皮膚病及風(fēng)濕病癥.該方主要成分之一梔子對(duì)本方臨床療效有重要作用，本文采用高效液相色譜法測(cè)定梔子中主要有效成分梔子苷的含量[3].實(shí)驗(yàn)表明，該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，可作為質(zhì)量控制的方法.

1　儀器與試藥

1. 1儀器Alltech高效液相色譜儀Series1500，UV201紫外檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器; TP－300超聲儀.

1. 2試藥梔子苷對(duì)照品(批號(hào): 110749－200613，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供);阿日申－18(批號(hào): 080705、090616、090617)由內(nèi)蒙古通遼市蒙醫(yī)研究所制劑室提供.

2　方法和結(jié)果

2. 1色譜條件色譜柱: Phenomenex C18柱(250mm× 4. 6mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈－水(15∶85);流速: 1. 0ml/min;進(jìn)樣量: 10μl;柱溫: 30℃;檢測(cè)波長(zhǎng): 238nm.理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000.

2. 2對(duì)照品溶液的制備稱取梔子苷對(duì)照品16mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(制成每1ml含梔子苷30μg的溶液).

2. 3樣品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品適量，研細(xì)，取約1. 6g，精密稱定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇25. 0ml，稱定重量，超聲處理(功率160W，50kHz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過.量取續(xù)濾液3. 0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得.

2. 4陰性對(duì)照試驗(yàn)按上述方法制備樣品溶液和對(duì)照品溶液.另取陰性樣品(按處方比例并以相同工藝制備的無梔子的樣品)，按阿日申－18溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液.分別精密吸取陰性溶液、阿日申－18溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入Alltech高效液相色譜儀Series1500，在同一色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果:陰性色譜圖中，在與梔子苷對(duì)照品及樣品阿日申－18色譜圖相同保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明配方中的其他組分對(duì)阿日申－18中梔子苷的測(cè)定無干擾.

2. 5線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、8、 10、15、20、25μl分別進(jìn)樣，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.結(jié)果梔子苷在0. 3762～3. 7620μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為: Y = 1. 5E + 6X + 3692. 7，r =0. 99985.

2. 6精密度試驗(yàn)精密量取梔子苷對(duì)照品溶液10μl，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梔子苷峰面積，結(jié)果梔子苷峰面積的RSD(n =6)為1. 2%.

2. 7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批樣品(批號(hào): 090616)6份，研細(xì)，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，測(cè)得每份樣品含量.結(jié)果梔子苷的平均含量(n =6)為2. 11mg/g，RSD為0. 1%.見表1.

表1　梔子苷含量重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2. 8穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、15、20h取樣10 μl，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定.RSD(n =6)為0. 2%，表明供試品溶液20h內(nèi)穩(wěn)定.

2. 9加樣回收試驗(yàn)取供試品(含量1. 864 mg/g)9份，各約0. 8 g，精密稱定，分別置9個(gè)具塞錐形瓶中，再分別在其中3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入濃度為0. 1738 mg/ml的梔子苷對(duì)照品甲醇溶液5 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的75%)及甲醇溶液20 ml，另3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入上述對(duì)照品溶液12 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的100%)及甲醇溶液13 ml，其余3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入上述對(duì)照品溶液16 ml(約相當(dāng)于供試品含有量的125%)及甲醇溶液9 ml，分別稱定重量，超聲處理30min，取出，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過.各取續(xù)濾液10 μl進(jìn)樣，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，梔子苷平均回收率(n =6)為101. 7%.RSD為1. 5%.結(jié)果見表2.

2. 10樣品測(cè)定按含量項(xiàng)下方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，三批樣品的測(cè)定結(jié)果見表3.

表2　梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表3　樣品中梔子苷含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3. 1提取條件的優(yōu)化根據(jù)文獻(xiàn)[4－5]，中藥梔子的梔子苷含量測(cè)定方法中，選用甲醇作為提取溶劑，故本研究也采用甲醇作為提取溶劑.分別對(duì)不同溶劑體積及不同超聲時(shí)間進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，最后得到最優(yōu)化的提取方法為:溶劑甲醇，加入量25 ml，超聲處理30min.

3. 2檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)本文中定量方法準(zhǔn)確、靈敏、專屬性強(qiáng)，可作為控制阿日申－18制劑質(zhì)量的檢測(cè)方法.

參考文獻(xiàn)

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[3]劉瑛，張浩．梔子藥材中梔子苷的含量測(cè)定[J]．華西藥學(xué)雜志，2003，18(5): 374－375．

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收稿日期:( 2014. 12. 16)

【文章編號(hào)】1007－8517(2015)06－0013－02

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號(hào)】R284. 1