陳偉岳　俞勇　杜蓬

315000 寧波市中心血站(陳偉岳)；315000 寧波市第二醫(yī)院輸血科(俞勇); 310053 杭州，浙江醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校(杜蓬)

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核心抗原酶聯(lián)免疫檢測在丙型肝炎病毒感染診斷中的價值

陳偉岳俞勇杜蓬

315000 寧波市中心血站(陳偉岳)；315000 寧波市第二醫(yī)院輸血科(俞勇); 310053 杭州，浙江醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校(杜蓬)

【摘要】目的 探討丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)在丙型肝炎早期診斷中的應(yīng)用價值。方法 83例抗-HCV陽性、500例ALT異常但抗-HCV陰性血清同時進(jìn)行HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR。結(jié)果83例抗-HCV陽性血清中HCV-cAg和HCV RNA陽性分別為33例和36例，其中32例共陽性；500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清中有3例HCV-cAg和HCV RNA同為陽性?？?HCV陽性和陰性血清HCV-cAg和HCV RNA檢測結(jié)果符合率分別為94.0%和100%。結(jié)論HCV-cAg ELISA敏感性與HCV RT-PCR類似，能夠有效縮短窗口期，操作簡便，費用低廉，在丙型肝炎早期診斷中具有很好的前景。

【主題詞】丙型肝炎病毒；核心抗原；酶聯(lián)免疫吸附測定

Fund program: Grants from the Second batch of Medicine Key Project of Zhejiang Province

丙型肝炎(簡稱丙肝)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)引起的傳染病，全球的HCV感染率約為3%[1]，雖然我國人群中HCV感染率相對較低，但鑒于我國人口基數(shù)大，人群中HCV感染人數(shù)接近2980萬[2]。丙型肝炎在早期臨床表現(xiàn)上與乙型肝炎相比，癥狀較輕，但是其較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化，導(dǎo)致肝癌，病死率較高[3]。由于丙肝預(yù)后不良且目前沒有特效的治療藥物，丙肝傳播已經(jīng)成為公共衛(wèi)生問題，早期診斷是防止HCV傳播的有效手段[3]。由于丙肝主要通過血液傳播[2]，因此建立HCV感染的早期診斷方法對無償獻(xiàn)血者、手術(shù)前或輸血前患者進(jìn)行HCV感染篩查以便阻斷血液傳播顯得尤為重要。文獻(xiàn)報道，HCV感染約2周血清即可檢測到HCV RNA，而HCV核心抗原(HCV-cAg)僅比HCV RNA晚1～2 d，鑒于HCV RNA檢測受實驗室硬件和人員配備等限制，HCV-cAg檢測有理由成為HCV感染早期檢測的侯選指標(biāo)[4-7]。本研究收集了83例抗-HCV陽性、500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清標(biāo)本，同時用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測HCV-cAg和RT-PCR檢測HCV RNA，用于評價HCV-cAg ELISA在丙肝早期診斷中的價值。

1資料與方法

1.1樣本來源83份抗-HCV陽性血清來自寧波市中心血站無償獻(xiàn)血者，年齡18～55周歲，平均年齡29.11±10.37歲。500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清來自寧波市第二醫(yī)院輸血科，年齡18～85周歲，平均年齡32.33±15.43歲。

1.2檢測試劑HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR試劑盒分別購自山東萊博公司和中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院達(dá)安基因診斷中心。

1.2檢測方法速率法檢測ALT，酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測抗-HCV和HCV-cAg，RT-PCR檢測HCV RNA，使用儀器為美國ABI公司的7500型熒光定量PCR儀，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作，病毒載量<103拷貝/ml判定HCV RNA定量結(jié)果為陰性，103～105拷貝/ml為少量病毒復(fù)制，106～107拷貝/ml為中量病毒復(fù)制，>1.0×108拷貝/ml判定為大量病毒復(fù)制。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。HCV RNA檢測陽性判定為HCV確證陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用統(tǒng)計軟件spss13.0對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR結(jié)果83例抗-HCV陽性血清標(biāo)本中，分別有33和36例HCV-cAg和HCV RNA陽性，陽性率分別為39.8%和43.4%。500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清有3例HCV-cAg和HCV RNA均陽性。

2.2HCV-cAg和HCV RNA檢測結(jié)果的符合率抗-HCV陽性血標(biāo)本中HCV-cAg和HCV RNA均為陽性的32例，同為陰性的46例，抗-HCV陽性血標(biāo)本中HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR符合率為94.0%；另有1例HCV-cAg陽性而HCV RNA陰性，4例HCV RNA陽性而HCV-cAg陰性。500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清HCV-cAg和HCV RNA檢測結(jié)果完全一致，HCV-cAg和HCV RNA 符合率為100%。HCV RNA檢測陽性判定為HCV確證陽性，HCV-cAg ELISA方法的靈敏度為89.7%(35/39)，特異性為99.8%(543/544)。

2.3HCV RNA拷貝數(shù)與HCV-cAg陽性檢出率的相關(guān)性39例HCV RNA陽性血液中有35例HCV-cAg陽性，HCV-cAg ELISA陽性檢出率為89.7%。觀察不同HCV RNA拷貝數(shù)血清樣本HCV-cAg ELISA陽性檢出率，發(fā)現(xiàn)35例HCV-cAg和HCV RNA均陽性樣本，HCV RNA拷貝數(shù)較高≥1.0×105拷貝/ml，而4例HCV RNA陽性但HCV-cAg陰性樣本HCV RNA拷貝數(shù)較低，其中3例為103數(shù)量級。

3討論

ELISA檢測抗-HCV仍是我國目前判斷HCV感染的常規(guī)篩選方法，廣泛用于無償獻(xiàn)血者、醫(yī)院受血者HCV感染篩查及HCV感染實驗室診斷，然而HCV感染到血清抗-HCV陽性要經(jīng)歷一個約40～70天的“窗口期”，這一時期ELISA抗-HCV試劑無法檢出HCV感染[4-6]。由于“窗口期”存在而導(dǎo)致輸血性HCV感染的糾紛國內(nèi)外都有報道[8, 9]。為減少“窗口期”存在導(dǎo)致的HCV感染發(fā)生，歐美國家紛紛推出靈敏度更高的HCV RT-PCR和HCV-cAg ELISA檢測HCV感染[4-6, 8-10]。HCV RNA是病毒復(fù)制的直接標(biāo)志，HCV感染后HCV RNA陽性比抗-HCV陽性出現(xiàn)早50d左右，因此RT-PCR檢測HCV RNA可作為HCV感染的確認(rèn)方法，但該方法需要特殊儀器、且人員配備的要求高還受很多因素影響[5, 6]。血清HCV-cAg陽轉(zhuǎn)僅比HCV RNA遲1～2 d，用ELISA檢測在儀器、人員配制要求比HCV RT-PCR易于滿足，有文獻(xiàn)報道HCV-cAg ELISA用于血清抗-HCV陽轉(zhuǎn)前的早期HCV感染的診斷以及HCV感染者治療前后病毒血癥情況的分析[4-7]。我們用HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR檢測500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清，結(jié)果3例HCV RNA陽性，后期跟蹤發(fā)現(xiàn)這3例患者3周后血清抗-HCV均陽性，提示HCV RT-PCR能先于血清抗-HCV檢測到HCV感染，這3例樣本HCV-cAg ELISA同樣呈現(xiàn)陽性，提示與文獻(xiàn)報道[4-6]類似HCV-cAg陽性時間與HCV RNA接近，HCV-cAg ELISA能有效縮短“窗口期”可替代HCV RT-PCR用于HCV感染的早期診斷。另外，我們用HCV-cAg ELISA和HCVRT-PCR同時檢測83例抗-HCV陽性血清，結(jié)果HCV-cAg ELISA和HCVRT-PCR檢測結(jié)果符合率為94%，提示HCV-cAg ELISA具有很好的靈敏度，可能替代HCV RT-PCR用于HCV感染的早期診斷，且該方法無需特殊儀器、操作簡單，利于基層單位推廣。我們在用HCV-cAg ELISA檢測抗-HCV 陽性血清時發(fā)現(xiàn)，有46例占56.1%患者HCV-cAg和HCV RNA同為陰性，抗-HCV為非保護(hù)性抗體，抗-HCV陽性說明患者曾經(jīng)感染HCV，因此，如果用抗-HCV陽性來篩查無償獻(xiàn)血者血液存在假陽性而造成血源浪費的可能。對46例檢抗-HCV 陽性但HCV-cAg和HCV RNA均為陰性患者進(jìn)行跟蹤檢測，這些患者3周后血清抗-HCV有1例陽性，其余仍為陰性，提示HCV-cAg ELISA不僅適合HCV感染早期診斷，如果聯(lián)合抗-HCV檢測無償獻(xiàn)血者血液可降低假陽性率并避免血源的不必要浪費。

4參考文獻(xiàn)

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通信作者：杜蓬，Email：pdu1145@163.com

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.01.017

基金項目：浙江省醫(yī)學(xué)重點學(xué)科建設(shè)計劃項目

(收稿日期：2015-09-25)

Value of diagnosis on hepatitis C by ELISA-HCV core antigen detection

ChenWeiyue,YuYong,DuPeng

NingboBloodCenterofZhejiangProvince,Ningbo315000,China(ChenWY);DepartmentofBloodTransfusion,NingboNo.2Hospital,Ningbo315000,China(YuY);ZhejiangMedicalCollege,Hangzhou310053,China(DuP)Correspondingauthor:DuPeng,Email:pdu1145@163.com

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the clinically applied valve of HCV core antigen enzyme-linked immunosorbent assay (HCV-cAg ELISA) for early diagnosis of hepatitis C. MethodsBoth HCV RNA and HCV-cAg ELISA were used to detect 83 cases of anti-HCV positive serum samples and 500 cases of anti-HCV negative but ALT abnormal serum samples. ResultsIn the 83 cases of anti-HCV positive serum samples, 33 cases were detectable for HCV-cAg while 36 cases were detectable for HCV RNA, in which 32 cases were double positive for both HCV-cAg and HCV-RNA. In the 500 cases of anti-HCV negative but ALT abnormal serum sample, only 3 cases were detectable for both HCV-cAg and HCV RNA. The coincidence rates of the two methods for detecting the anti-HCV positive serum samples and anti-HCV negative but ALT abnormal serum samples were 94.0% and 100%, respectively. ConclusionThe sensitivity and specificity of HCV-cAg ELISA is similar to that of HCV RT-PCR. The HCV-cAg ELISA has many advantages such as window-phase,decurtation, convenience and lower cost, which enable the assay a good clinically applied prospects for early diagnosis of hepatitis B.

【Key words】Hepatitis C virus; Core antigen; Enzyme-linked immunosorbent assay