阿苯達(dá)唑?qū)θ拙€蟲幼蟲作用的實驗研究

2016-01-29 00:25楊寶林

中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育 2015年19期

楊寶林

楊寶林

【摘要】目的觀察不同劑量阿苯達(dá)唑?qū)Σ煌腥緯r間的犬弓首線蟲幼蟲移行的抑制作用。方法用犬弓首線蟲感染期蟲卵感染昆明小鼠，按照藥物不同劑量和蟲卵感染時間分組，動態(tài)觀察阿苯達(dá)唑抑制犬弓首線蟲幼蟲移行的療效。結(jié)果采用相同劑量，不同給藥時間的感染小鼠，通過減蟲率統(tǒng)計結(jié)果分析，各用藥組與對照組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。感染小鼠與正常小鼠的相比谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、乳酸脫氫酶增高，膽堿酯酶降低，血清淀粉酶無差異，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論阿苯達(dá)唑治療犬弓首線幼蟲移行癥有較好的療效。藥物療效與劑量、治療時間有密切關(guān)系，血清酶的變化與組織損傷也有密切關(guān)聯(lián)。

【關(guān)鍵詞】犬弓首線蟲幼蟲；阿苯達(dá)唑；血清酶

作者單位：266071山東省青島衛(wèi)生學(xué)校

Experimental Study on the Action of Albendazole to the Toxocaracanis Larvae

YANG Baolin Shandong Province Qingdao Health School, Qingdao 266071, China

[Abstract]Objective To observe the inhibitory action of Albendazole with different dosages on the larva migration during the different infection periods. Methods According to different doses and infectious time the curative effect of was monitored according to the change of both the reduce rate of larvae and the enzymes in the serum. Results In term of the infectious mice whose dosages were the same while the dose time were different, the result of reduce rate of larvae shows that the difference between each dosed group and controlled group is significant. Compared the serum enzymes of infectious mice with those of normal mice, both GGT and LDH were increase while CHE shows a distinguished reduction. On the other hand, there was no difference on the concentrations of AMY between them. Conclusion By the means of reduce rate of larvae and serum enzyme, it can be proved that the relationship among curative effect, dosage and treatment time is very tight, and the histological damage also affects the change of serum enzymes seriously.

[Key words]Toxocara canis larvae, Albendazole, Serum enzyme

犬弓首線蟲（Toxocara Canis Stiles）是犬的常見腸道寄生蟲，人是它的非正常宿主，其幼蟲在非正常宿主的肝、肺、腦、眼等器官組織內(nèi)可以長期生存，但不能繼續(xù)發(fā)育[1]。人誤食犬弓首線

蟲感染期蟲卵后，部分患者會出現(xiàn)一些消化道癥狀和呼吸道癥狀，部分患者出現(xiàn)驚厥、行為障礙等神經(jīng)精神癥狀。阿苯達(dá)唑（Albendazole，ABZ）對多種腸道寄生蠕蟲及某些組織內(nèi)寄生幼蟲有良好的殺滅作用。上世紀(jì)80年代，該藥開始在臨床上使用。之后，被廣泛用于治療和預(yù)防鉤蟲病、蛔蟲病、鞭蟲病、旋毛蟲病、絳蟲病、囊蟲病等寄生蟲病[2]。國內(nèi)外學(xué)者對阿苯達(dá)唑在寄生蟲方面的研究進(jìn)行了大量的工作，但是對其在犬弓首線蟲幼蟲移行方面的研究并不多。鑒于感染初期是幼蟲移行變化最大的時間，本實驗選擇了感染初期的2個時間段，分別選用3種劑量研究阿苯達(dá)唑?qū)θ拙€蟲幼蟲移行癥的療效，同時對用藥后血清酶的變化進(jìn)行了檢測，以驗證阿苯達(dá)唑?qū)θ拙€蟲幼蟲移行的抑制效果。

1　材料和方法

1.1 實驗動物及其感染

采用體重（30±2）g封閉群昆明2級清潔級小鼠（貴陽醫(yī)學(xué)院動物中心提供）雌雄各半，灌胃1 000個蟲卵/只，共感染48只，另設(shè)對照組小鼠8只。蟲卵由本實驗室按既往方法取得。

1.2 藥物和治療分組

阿苯達(dá)唑，武漢遠(yuǎn)城科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。本實驗依照5日療法進(jìn)行用藥，將感染小鼠分成兩組（按感染后第7、12天開始用藥分為7天用藥組，12天用藥組），同時每組再按阿苯噠唑（mg/kg·d）不同劑量分為50 mg組、100 mg組、200 mg組分成3組灌胃給藥，連續(xù)給藥5天，另設(shè)1組感染后未用藥鼠作為感染對照組，再設(shè)1組健康鼠作為正常對照組，每組8只鼠。

1.3 療效考核

感染后第20天斷頸處死并解剖小鼠，采用下述兩種方法考核療效：（1）腦壓片計數(shù)幼蟲。將鼠大腦組織取出，在每只鼠大腦左葉、大腦右葉和大腦與小腦連接部位，剪取腦組織各30 mg，置于兩片載玻片之間壓薄，鏡檢計數(shù)幼蟲，取大腦3個部位的平均數(shù)作為腦壓片計數(shù)。（2）稀鹽酸法分離計數(shù)幼蟲。參照楊超等[3]用于分離小鼠組織中鉤蟲幼蟲的方法，即在燒杯內(nèi)放一紗網(wǎng)，將腦、肝臟、腎臟、肺、肌肉等組織分別剪碎，置于每個燒杯的紗網(wǎng)上，加入0.5%稀鹽酸溶液浸沒分離物，將燒杯置37℃溫箱內(nèi)，待幼蟲自行移入杯底。24 h后，棄去紗網(wǎng)和上層液體。將余液置入10 ml離心管中離心，棄去上清液，余下1 ml沉淀液，混勻后，吸取50 μl置于載玻片上，計數(shù)幼蟲，每個樣本計數(shù)5次，取平均值，乘以20即為樣本中的幼蟲數(shù)。減蟲率計算：將對照組感染鼠回收幼蟲平均數(shù)視為100%，計算不同劑量用藥組幼蟲減蟲率（對照組感染鼠回收幼蟲數(shù)-用藥組幼蟲回收數(shù)/對照組感染鼠回收幼蟲數(shù)）。犬弓首線蟲幼蟲在感染宿主前7天主要在宿主內(nèi)臟移行，引起肝、肺等組織器官的病變，因此本實驗在感染后第20天時，取第7天開始用藥的3組小鼠，采用眼眶取血法采集全血標(biāo)本24份進(jìn)行血清酶的檢測。另取感染未用藥組全血標(biāo)本8份，未感染未用藥組全血標(biāo)本8份。將血清立即送往生化科，用自動生化分析儀進(jìn)行以下幾個指標(biāo)的檢測：淀粉酶（Amylase，AMY）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（Glutamyl Transpeptidase，GGT）、膽堿酯酶（Cholinesterase，CHE）、乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase，LDH）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用軟件SPSS17.0處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗,計量資料采用t檢驗，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　實驗結(jié)果

2.1 阿苯達(dá)唑?qū)?天用藥組感染鼠的療效比較

20天處死小鼠時，對比不同劑量阿苯達(dá)唑?qū)τ?天用藥組的療效結(jié)果。見表1。腦組織壓片比較：ABZ 50 mg組、100 mg組、200 mg組與感染對照組相比壓片幼蟲數(shù)都減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。減少蟲率比較：ABZ 50 mg組、100 mg組、200 mg組與感染對照組相比，幼蟲數(shù)都減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。50 mg組與100 mg組、200 mg組相比，50 mg組幼蟲數(shù)減少程度較小，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 阿苯達(dá)唑?qū)?2天用藥組感染鼠的療效比較

20天處死小鼠時，不同劑量阿苯達(dá)唑?qū)τ?2天用藥組的療效結(jié)果。見表2。腦組織壓片計數(shù)比較：ABZ 50 mg組、100 mg組、200 mg組與感染對照組間比較，各組壓片計數(shù)均減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。減少蟲率比較：ABZ 50 mg組、100 mg組、200 mg組與感染對照組相比，幼蟲計數(shù)均減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。50 mg組、100 mg組、200 mg組各組間比較，P ＞0.05，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 用藥組和對照組小鼠血清酶的比較

20天處死小鼠時，第七天用藥組小鼠和兩組對照組小鼠血清酶的檢測結(jié)果。見表3。感染未用藥組小鼠GGT、CHE、LDH這3種血清酶的檢測值與正常小鼠相比都較高，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。而AMY的血清酶檢測值與正常小鼠相比，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 各劑量組CHE血清酶的比較

50 mg組、100 mg組、200 mg組之間相比，前者檢測值均低于后者，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。50 mg組、100 mg組、200 mg組與感染對照組相比，前者檢測值低于后者，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5 各劑量組LDH血清酶的比較

各劑量組與感染對照組間比較，各劑量組檢測值均低于感染對照組，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.6 各劑量組GGT血清酶的比較

50 mg組與100 mg組相比，前者檢測值高于后者，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。100 mg組與200 mg組比較，前者檢測值高于后者，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。50 mg組、100 mg組、200 mg組分別與感染對照組相比，用藥組均比感染對照組檢測值低，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3　討論

藥物療效與劑量、治療時間有密切關(guān)系，就減蟲率分析，相同的用藥時間比較，各藥物組均有一定的療效，但大劑量組100

表1　7天用藥組中阿苯達(dá)唑?qū)Ω腥臼蟮寞熜?/p>

表2　12天用藥組中阿苯達(dá)唑?qū)Ω腥臼蟮寞熜ЫY(jié)果

mg和200 mg療效更加滿意，與腦壓片的結(jié)果相符。就治療時間分析，在減蟲率方面，感染后第7天用藥組優(yōu)于第12天用藥組?？赡苡?個方面原因：幼蟲移行和阿苯達(dá)唑自身藥物特點。感染初期，幼蟲主要分布在肝、肺等器官，7天以后，向腦內(nèi)移行數(shù)量增多。而阿苯達(dá)唑難溶于水和大多數(shù)有機溶劑，在胃腸道的吸收較差。因此，ABZ可在腸道保持較高的濃度，可有效地去除腸道內(nèi)的寄生蟲。同時，阿苯達(dá)唑半衰期為8.5 h，阿苯達(dá)唑進(jìn)入體內(nèi)后，主要分布在肝、腎等組織，由于血腦屏障的影響，ABZ在腦組織中分布較差。因此，在感染早期，幼蟲主要分布在肝、肺等器官，此時用藥可大量殺死犬弓首線蟲幼蟲。7天之后，大劑量用藥，也可取得較滿意的結(jié)果。王光西等報道[4]，犬弓首線蟲幼蟲感染小鼠后第3天，肝切片上幼蟲周圍有炎性細(xì)胞浸潤，包括嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。肝血竇擴(kuò)張充血，蟲體周圍部分肝細(xì)胞有變性壞死，肝細(xì)胞核固縮，胞漿著色淺。伴隨組織器官的病理損害，生化指標(biāo)也會發(fā)生變化，血清酶的變化就可以反應(yīng)這些病理變化。膽堿酯酶（CHE）是由肝臟合成的水解酶，由于該酶合成后立即釋放至血液中，血液中CHE的濃度能夠反映其合成的速率。當(dāng)肝臟受損時肝細(xì)胞的合成功能下降，血清CHE活力降低，其下降程度與病情的嚴(yán)重程度相平行。因此，血清膽堿酯酶活力能很好地反映肝臟的合成功能，亦能準(zhǔn)確地反映肝臟的病理損害。本實驗中，感染小鼠與正常小鼠血清中的CHE檢測相比，前者CHE值低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。可能是由于幼蟲移行至肝臟后，引起肝臟的急性炎癥反應(yīng)，造成部分肝細(xì)胞變性壞死，肝細(xì)胞核固縮，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞的合成功能下降，與對照組相比，各用藥組都可有效的減少犬弓首線蟲幼蟲移行對肝臟造成的損害。說明阿苯達(dá)唑?qū)Ω闻K內(nèi)幼蟲有較好的抑制效果。血清中的谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶GGT主要來自肝臟，具有較強的特異性。當(dāng)肝臟受損傷后，就會造成GGT升高。本實驗中，感染小鼠血清中的GGT值比正常小鼠的血清GGT值高，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。與CHE的血清檢測值相似，均反映出ABZ對早期移行至肝臟的犬弓首線蟲幼蟲有較好的抑制作用。乳酸脫氫酶以心臟、腎臟和骨骼肌內(nèi)含量最豐富，其次以肝臟、脾臟、胰腺和肺組織較多。當(dāng)這些組織的細(xì)胞受到損傷時，均可引起LDH的逸出，引起血清LDH活力增加。本實驗中，感染小鼠血清中的LDH值比正常小鼠的檢測值高，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。說明3種劑量均可有效地抑制幼蟲在體內(nèi)的移行，大劑量組效果好于低劑量組。淀粉酶主要由唾液腺和胰腺分泌。當(dāng)腮腺或胰腺出現(xiàn)急性炎癥時，血中淀粉酶明顯增高，本實驗中，感染小鼠血清淀粉酶（AMY）與正常小鼠血清檢測值無顯著差異，可能是因為感染早期，犬弓首線蟲幼蟲移行主要分布在肝、肺、腎等部位，而胰腺和腮腺未受到損害。從血清酶的檢測結(jié)果看，血清酶的變化與組織損傷有著密切的關(guān)系，同時我們也可以看到，血清酶的改變可以間接地反映ABZ對犬弓首線蟲幼蟲移行癥的療效，從而證實了大劑量ABZ對犬弓首線蟲幼蟲移行癥具有較好的療效。

綜上所述，通過減蟲率和血清酶兩個指標(biāo)，證實了阿苯達(dá)唑?qū)θ拙€蟲幼蟲移行癥具有良好的療效，同時證實了感染早期用藥的重要性。阿苯達(dá)唑用于治療犬弓首線幼蟲移行癥有較好的應(yīng)用潛力。