張彥平,吳繼博,賀軍濤,張　磊,徐　陽(yáng),張王剛

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710004)

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CellaVision DM96在漿膜腔積液有核細(xì)胞分類中的應(yīng)用

張彥平,吳繼博,賀軍濤,張磊,徐陽(yáng),張王剛△

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710004)

摘要:目的探討瑞典CellaVision DM96自動(dòng)化數(shù)字細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)(DM96)對(duì)漿膜腔積液有核細(xì)胞分類的能力。方法選取2015年3月西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院患者漿膜腔積液標(biāo)本36份，通過(guò)日本Sysmex自動(dòng)推片機(jī)SP-1000i和手工推片染色2種方法對(duì)36份漿膜腔積液標(biāo)本進(jìn)行瑞氏染色，染色后的涂片使用DM96自動(dòng)化數(shù)字細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)進(jìn)行有核細(xì)胞分類，計(jì)算DM96的分類結(jié)果與Sysmex XT-4000i結(jié)果的一致性和相關(guān)性。結(jié)果使用DM96檢測(cè)漿膜腔積液有核細(xì)胞的分類結(jié)果與XT-4000i體液模式的分類結(jié)果具有較好的一致性，且DM96細(xì)胞圖像拍攝清晰，自動(dòng)化程度高。結(jié)論表明DM96型數(shù)字細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)是可靠和有效的，對(duì)提高漿膜腔積液標(biāo)本的細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析有意義。

關(guān)鍵詞:漿膜腔積液；西門子XT-4000i；有核細(xì)胞分類

生理情況下正常成人胸腔積液小于20 mL，腹水小于50 mL，主要起潤(rùn)滑作用一般不易采集到。當(dāng)漿膜有炎癥、循環(huán)障礙、惡性腫瘤侵潤(rùn)等病變時(shí)，漿膜腔液體產(chǎn)生增多并集聚在漿膜腔內(nèi)，其性質(zhì)也發(fā)生變化，此時(shí)稱為漿膜腔積液。根據(jù)漿膜腔積液的產(chǎn)生原因及性質(zhì)的不同，將其分為漏出液與滲出液兩大類[1]。漿膜腔積液有核細(xì)胞分類是漿膜腔積液檢驗(yàn)中的一項(xiàng)重要指標(biāo)，對(duì)漏出液和滲出液的鑒別診斷及多種疾病的診斷，治療和預(yù)后判斷均具有重要的意義[2]。

1材料與方法

1.1材料收集2015年3月西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院患者漿膜腔積液標(biāo)本36份，其中胸腔積液31份，腹水4份，關(guān)節(jié)腔穿刺液1份，均置于含有乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)的抗凝管內(nèi)。

1.2儀器與試劑瑞典CellaVision 公司生產(chǎn)的DM96自動(dòng)化數(shù)字細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析儀；日本Sysmex 公司生產(chǎn)的XT-4000i血液體液一體分析儀，配套試劑：稀釋液EPK(批號(hào)：G5015)、溶血?jiǎng)?FBA(批號(hào)：R4050)、溶血?jiǎng)㏒LS (批號(hào)：A4025)；日本Sysmex 公司生產(chǎn)的SP-1000i自動(dòng)推片染色儀，配套試劑：甲醇(批號(hào)：2014102901)；珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的瑞氏-吉姆薩染液試劑盒，包括A液瑞氏-吉姆薩染液和B液磷酸鹽緩沖液(批號(hào)：414124)。

1.3方法

1.3.1XT-4000i有核細(xì)胞分類采用儀器“手工進(jìn)樣+體液”檢測(cè)模式，對(duì)漿膜腔積液標(biāo)本充分混勻后按照儀器操作手冊(cè)進(jìn)行測(cè)定，在標(biāo)本采集后的1 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3.2DM96有核細(xì)胞分類Sysmex XT-4000i檢測(cè)的漿膜腔積液的有核細(xì)胞總數(shù)大于1 000×106/L的20份血性標(biāo)本使用SP-1000i 自動(dòng)推片染色儀染色：選擇手動(dòng)進(jìn)樣，儀器自動(dòng)抓取標(biāo)本混勻吸樣，經(jīng)舌型薄膜推片，推片角度可根據(jù)標(biāo)本的黏稠度自動(dòng)調(diào)整，后經(jīng)甲醛固定，再經(jīng)微型風(fēng)扇吹干并在玻片的前端打印二維碼(打印二維碼的涂片能被DM96識(shí)別和讀取)，最后由瑞士-吉姆薩染液染色;有核細(xì)胞計(jì)數(shù)小于1 000×106/L的標(biāo)本因過(guò)于稀薄或有絮狀沉淀，SP-1000i不能夠完成推片和固定，故細(xì)胞總數(shù)小于1 000×106/L或有絮狀沉淀的16份標(biāo)本均需手工涂片染色：用SP-1000i推出帶有二維碼的空白玻片，將標(biāo)本1 000 r/min離心15 min，取沉淀物制成均勻薄片，細(xì)胞不易固定的，取沉淀的細(xì)胞懸液2滴和血清1滴混合制成涂片，于室溫內(nèi)自然干燥，用瑞氏-吉姆薩染液染色，涂片染色在1 h之內(nèi)完成。將所制涂片放入DM96，系統(tǒng)自動(dòng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行掃描、定位及200個(gè)有核細(xì)胞的分類，所得結(jié)果即DM96有核細(xì)胞分類的結(jié)果。

2結(jié)果

DM96有核細(xì)胞分類結(jié)果與XT-4000i有核細(xì)胞分類結(jié)果的相關(guān)性。單個(gè)核細(xì)胞相關(guān)性方程為Y=0.899 5X+0.050 5；一致性系數(shù)R2=0.842 6，見圖1。

圖1　　2種方法的單個(gè)核細(xì)胞的相關(guān)性分析

多核細(xì)胞：相關(guān)性方程為Y=0.399 5X+5.003 1;一致性系數(shù)為R2=0.842 6，見圖2。通過(guò)2種方法所得結(jié)果的相關(guān)性分析，單個(gè)核細(xì)胞的一致性R2=0.842 6，多核細(xì)胞的一致性R2=0.842 6，認(rèn)為2種方法進(jìn)行漿膜腔積液檢測(cè)的一致性尚可。

圖2　　2種方法的多核細(xì)胞的相關(guān)性分析

3討論

Sysmex XT-4000i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀采用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞術(shù)，激光照射細(xì)胞，由前向散射光強(qiáng)度反映細(xì)胞體積信息、側(cè)向散射光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)部信息、側(cè)向熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞所含核酸量，利用這些信息對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類[3]。然而此儀器的體液模式只提供了單核、多核和高熒光強(qiáng)度的細(xì)胞，高熒光強(qiáng)度的細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞，間皮細(xì)胞和惡性細(xì)胞，這些細(xì)胞并不能直觀的體現(xiàn)出來(lái)。在進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，只顯示整數(shù)，因而紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值較粗略，僅可作為參考[4]。

SDM96 由數(shù)字掃描成像裝置和裝有CellaVision 細(xì)胞形態(tài)分析軟件的計(jì)算機(jī)組成，是一種全自動(dòng)細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)，首先在10倍物鏡下掃描血涂片找到白細(xì)胞單細(xì)胞層并定位對(duì)焦，再以城垛方式跟蹤掃描、記錄每個(gè)白細(xì)胞的位置，然后于100倍油鏡下拍照并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行切分、提取特征，最后通過(guò)人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)(ANN)分類各種白細(xì)胞[5]。

DM96型系統(tǒng)可自動(dòng)識(shí)別和分類中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、破碎細(xì)胞和所有的雜質(zhì)；其他的細(xì)胞被放置在該類別的“其他”，包括漿細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、間皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞[6]，相比XT-4000i血液分析儀這些細(xì)胞能夠從計(jì)算機(jī)中更為直觀的表現(xiàn)，例如通過(guò)DM96對(duì)20份血性標(biāo)本的細(xì)胞分類中，檢出間皮細(xì)胞的有2例，惡性細(xì)胞的有1例，并在穿刺液中檢見大量細(xì)菌，所檢見的細(xì)胞類型和臨床診斷基本相符，所以通過(guò)DM96有核細(xì)胞分類和檢出的某個(gè)具體的病理細(xì)胞，可以及時(shí)向臨床報(bào)告，為臨床的下一步檢查和早期診斷治療提供依據(jù)，這是XT-4000i無(wú)法做到的。

但其缺點(diǎn)在于積液細(xì)胞數(shù)目和蛋白的含量使得DM96在檢測(cè)漿膜腔積液標(biāo)本時(shí)有一定的局限性：積液細(xì)胞數(shù)目過(guò)少，蛋白含量過(guò)高易形成凝塊，會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)無(wú)法識(shí)別和分類細(xì)胞，這也是大多數(shù)儀器不能完成漿膜腔積液計(jì)數(shù)分類自動(dòng)化的原因[7-15]。所以，DM96自動(dòng)化數(shù)字細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)對(duì)非血性漿膜腔積液標(biāo)本有核細(xì)胞計(jì)數(shù)有一定的局限性，更適用于對(duì)血性(病理性)漿膜腔積液標(biāo)本的分析，對(duì)血性標(biāo)本的分析也更優(yōu)于XT-4000i血液分析儀。

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·論著·

Application of CellaVision DM96 in nucleated cells classification of serous cavity effusion

ZhangYanping,WuJibo,HeJuntao,ZhangLei,XuYang,ZhangWanggang△

(SchoolofMedicine,Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the capacity of the Sweden CellaVision DM96 automatic digital cell morphology analysis system (DM96) in nucleated cell classification of serous cavity effusion.Methods36 specimens of serous cavity effusion were selected from the inpatients of Second Affiliated Hospital of Xi ′an Jiaotong University in March 2015 and performed the Wright staining by the two kinds of method,the Japanese Sysmex SP-1000Ⅰ automatic smearing machine and manual smearing,after staining,the smear was performed the nucleated cells classification by DM96.The consistency and relevance of the classification results by DM 96 with those by the Sysmex XT-4000i were calculated.ResultsThe classification results by DM96 had better consistency with the results by XT-4000i,moreover the cell images taking by DM96 were clear with high automatic degree.ConclusionThe DM96 automated digital nucleated cell morphology analysis system is reliable and effective,and has a significance for improving the cellular morphological analysis of serous cavity effusion specimen.

Key words:serous cavity effusion;Sysmex XT-4000i;nucleated cell sorting

收稿日期：(2015-08-19)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.028A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3574-02