于立偉

作者單位：154101 黑龍江省鶴崗市人民醫(yī)院病理科

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肌肉組織染色方法的病理分析

于立偉

作者單位：154101 黑龍江省鶴崗市人民醫(yī)院病理科

【摘要】目的 探討肌肉組織染色的方法及臨床應(yīng)用。方法 對(duì)肌肉組織染色Mallory磷鎢酸蘇木素染色法、偶氮桃紅-鞣酸法和蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色法方法操作方法進(jìn)行分析。結(jié)果 橫紋肌纖維、纖維素、細(xì)胞核、核仁和神經(jīng)膠質(zhì)纖維等呈藍(lán)色，膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、軟骨基質(zhì)呈棕紅色，彈力纖維呈紫色。結(jié)論 需要證明與區(qū)分組織為何種來源的肌纖維時(shí)，需要針對(duì)不同情況，選用相應(yīng)的特殊染色進(jìn)行顯示和觀察。

【關(guān)鍵詞】肌肉組織染色；病理

肌肉組織根據(jù)其形態(tài)和功能特點(diǎn)，可將其分為平滑肌、骨骼肌和心肌。3者的胞質(zhì)中均含有沿細(xì)胞長軸平行排列的肌原纖維，骨骼肌和心肌尚有由肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白排列而成的明暗相間橫紋［1］。顯示肌纖維常用的染色方法很多，肌纖維萎縮，色素沉著，脂肪變性，粘液變性等病變分別有各自的染色方法顯示，現(xiàn)對(duì)病理科常用的觀察橫紋肌的幾種染色方法和網(wǎng)狀纖維、彈性纖維、膠原纖維、肌纖維四重染色法進(jìn)行分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料

對(duì)取新鮮肌肉組織直徑0.5～2 cm，不加任何固定液，生理鹽水浸過紗布包好送檢。

1.2 方法

1.2.1 Mallory磷鎢酸蘇木素染色法（PTAH） （1）試劑配制：自然氧化成熟液：蘇木素0.1 g，磷鎢酸2.0 g，蒸餾水100 ml，將蘇木素置于20 ml蒸餾水中加熱溶解，再將磷鎢酸溶于80 ml蒸餾水中。蘇木素冷卻后加入磷鎢酸溶液，混合后置放于有陽光處數(shù)星期至數(shù)月才成熟，（大約2～3月）。可保存2～3年?；瘜W(xué)促成熟液：蘇木素0.1 g，磷鎢酸2.0 g，蒸餾水100 ml，0.25%高錳酸鉀水溶液5 ml（必須是新鮮配制的）將蘇木素溶于20 ml蒸餾水中，磷鎢酸溶于80 ml蒸餾水中，溶解后將兩液混合，并加入高錳酸鉀，12～24 h后即可使用［2］?？杀４?～2周。（2）操作方法：組織固定10%福爾馬林液，常規(guī)脫水包埋。切片脫蠟至蒸餾水。放入5%硫酸鐵銨水溶液30 min。蒸餾水洗。入PTAH溶液室溫12～24 h，60度溫箱1 h。95%酒精分化（鏡下控制著色情況）［3］。無水酒精快速脫水。二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.2.2 偶氮桃紅-鞣酸法 （1）試劑配制：偶氮桃紅液：偶氮桃紅2 g，甲醇90 ml，冰醋酸10 ml，混合溶解后，靜置一夜，用時(shí)吸取上清液。5%鞣酸水溶液：鞣酸5 g，蒸餾水加至100 ml。1%磷鉬酸水溶液：磷鉬目酸1 g，蒸餾水加至100 ml。甲醇冰醋酸液：甲醇90 ml，冰醋酸10 ml。（2）操作方法：新鮮組織固定于Camoy液6 h以上，直接轉(zhuǎn)入95%酒精脫水，常規(guī)脫水包埋。切片脫蠟至蒸餾水［4］。Mayer蘇木素沖洗5～10 min。自來水沖洗10～15 min后洗蒸餾水。5%鞣酸水溶液作用15 min。蒸餾水沖洗。1%磷鉬酸水溶液處理15 min。蒸餾水洗。偶氮桃紅液染5 min。用甲醇冰醋酸液分化，鏡下控制，至肌纖維呈鮮紅色為止。直接用無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.2.3 蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色法 （1）試劑配制：明礬蘇木素液：蘇木精0.5 g，硫酸鋁銨6 g，黃色氧化汞0.25 g，甘油30 ml，冰醋酸4 ml，蒸餾水70 ml。先將蘇木素和硫酸鋁銨分別溶解于蒸餾水中，然后將兩液混合煮沸，徐徐加入氧化汞，繼續(xù)煮10 min，迅速冷卻，冷卻后過濾［5］。過濾后再加入冰醋酸和甘油。0.1%堿性復(fù)紅液：堿性復(fù)紅0.1 g，丙酮100 ml。（2）操作方法：組織固定10%福爾馬林液，常規(guī)脫水包埋。切片脫蠟至蒸餾水。用明礬蘇木素液染色20 s～1 min。自來水洗5 min，蒸餾水洗。用堿性復(fù)紅液染色5～10 min。蒸餾水洗10 s。丙酮液洗一下。用苦味酸丙酮液迅速分化5～15 s，至無紅色染液從切片上流下為止。丙酮液迅速脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固［6］。

2 結(jié)果

2.1 Mallory磷鎢酸蘇木素染色法（PTAH）

橫紋肌呈深藍(lán)色，神經(jīng)膠質(zhì)纖維呈深藍(lán)色，纖維素呈深藍(lán)色，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色，膠原纖維呈玫瑰紅色，骨組織呈玫瑰紅色。化學(xué)促成熟液，因加入氧化劑后，時(shí)間過長就慢慢失效，故最好現(xiàn)用現(xiàn)配。但首選自然氧化成熟液。本法已對(duì)原方法進(jìn)行了改良，用60℃溫箱染1 h，可加快染色速度，效果很好，最適合病理科診斷急需［7］。

2.2 偶氮桃紅-鞣酸法

膠原纖維及橫紋呈鮮紅色，結(jié)締組織呈黃色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。

2.3 蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色法

缺血缺氧心肌、彈性纖維，膠原纖維，紅細(xì)胞呈鮮紅色至深紅色。正常心肌呈黃色或黃棕色，細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。

3 討論

一般HE染色對(duì)正常心肌和骨骼的縱紋尤其是橫紋，本來顯示的就不十分清楚，當(dāng)肌纖維的線粒體發(fā)生水腫所致混濁腫脹時(shí)，其肌原纖維特別是橫紋表現(xiàn)模糊不清，則更不易觀察到。應(yīng)用PTAH等染色可幫助鑒別是否檢測(cè)肌源性腫瘤［8］。為了顯示和觀察正常與異常的肌纖維顆粒變性、肌原纖維變性所發(fā)生的肌漿凝集、斷裂和所出現(xiàn)的顆粒、團(tuán)塊、收縮帶等病理變化，常常需要應(yīng)用顯示肌纖維的特殊染色進(jìn)行觀察。橫紋肌纖維的脂肪變性，在石蠟切片HE染色時(shí)脂滴呈空泡狀，肌纖維紋理不清，與濁腫、水泡變性等有時(shí)不易鑒別。肌纖維的粘液變性、糖原儲(chǔ)積癥等，可應(yīng)用顯示與區(qū)別粘液及糖原的異染性染色法、PAs等粘液與糖原特殊染色法鑒別。肌纖維壞死及壞死后修復(fù)過程的病變，可分別應(yīng)用結(jié)締組織多色染色法和膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈性纖維的特殊染色法，進(jìn)行顯示和觀察。

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Pathological Analysis of Muscle Tissue Staining Method

YU Liwei Department of Pathology，People's Hospital of Hegang City，Hegang 154101，China

【Abstract】

Objective To explore the method of muscle tissue staining and its clinical application. Methods On the muscle tissue staining mallory phosphotungstic acid hematoxylin staining method，azo pink-tannic acid method and hematoxylin pigment alkaline complex red bitter ignorant acid staining method method of operation were analyzed. Results Striated muscle fibers，cellulose，nuclei，nucleoli and glial fiber was blue and collagen fiber and reticular fiber，the cartilage matrix was brownish red，elastic fibers was purple. Conclusion The need to prove why and distinguish the sources of muscle fiber，the need for different conditions，using special staining corresponding display and observation.

【Key words】Muscle tissue staining，Pathology

【中圖分類號(hào)】R361

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）03-0170-02

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2016.03.125