鄭鴻娟，黃春陽(yáng)，齊梁煜，張 航，李兆疊，黃月維，鐘兆銀，黃鎖義,3*

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000；3.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

1.2.2 清除DPPH 自由基能力的測(cè)定[7]

1.2.3 還原力的測(cè)定[8]

?

磨盤草提取物的抗氧化活性研究

鄭鴻娟1，黃春陽(yáng)1，齊梁煜1，張 航1，李兆疊1，黃月維1，鐘兆銀2，黃鎖義2,3*

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000；3.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

目的：探究磨盤草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活性。方法：檢測(cè)磨盤草乙醇提取物和甲醇提取物清除DPPH 自由基能力和還原Fe3 +能力，評(píng)價(jià)并對(duì)比不同提取方法所得物質(zhì)的抗氧化活性。結(jié)果：磨盤草乙醇提取物和甲醇提取物對(duì)DPPH自由基均具有較強(qiáng)的清除作用和較顯著的還原Fe3+能力，且隨著提取液質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。結(jié)論：磨盤草乙醇提取物和甲醇提取物均具有較強(qiáng)的抗氧化活性且與濃度呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系。在一定質(zhì)量濃度下乙醇提取物清除DPPH·能力比甲醇提取物強(qiáng)，甲醇提取物的還原Fe3+能力比乙醇提取物強(qiáng)。

磨盤草；提取物；抗氧化活性

磨盤草為錦葵科苘麻屬植物磨盤草[Abutilonindicum(L.) Sweet]，異名為金花草、唐擋草、耳響草、帽籠子、磨籠子、磨盆草、印度苘麻、牛響草、白麻、米蘭草、研仔盾草等。全草或根入藥，甘淡平, 疏風(fēng)清熱、化痰止咳、消腫解毒， 用于感冒、發(fā)熱、咳嗽、中耳炎、腮腺炎、耳聾、咽痛炎、尿路感染、瘡癰腫痛、跌打損傷。生于砂地、曠野或路旁,分布于廣西、廣東、貴州、云南、福建、臺(tái)灣等地[1]。經(jīng)研究全草含有萜類、甾類、酚類、黃酮苷、氨基酸、有機(jī)酸和糖等[2-3]。磨盤草適應(yīng)性廣，生長(zhǎng)條件要求不高，藥用價(jià)值高，有一定的開發(fā)利用前景。經(jīng)文獻(xiàn)調(diào)研，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于磨盤草的研究主要集中于其成分的分析[3-5]，對(duì)其提取物體外抗氧化活性的相關(guān)研究很少見，限制了磨盤草的深度開發(fā)和利用。為此，本文采用DPPH 自由基和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型，以其還原力和清除自由基能力為指標(biāo)，評(píng)價(jià)并對(duì)比磨盤草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活性，以期進(jìn)一步優(yōu)化與擴(kuò)展磨盤草的研究和綜合利用價(jià)值，為完善磨盤草的臨床應(yīng)用和開發(fā)新型功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

隨著抗氧化劑的蓬勃發(fā)展，對(duì)抗氧化劑的要求也越來(lái)越高，天然產(chǎn)物作為重要的抗氧化劑，可以低毒、高效的清除體內(nèi)過(guò)量的自由基，以預(yù)防衰老并治療自由基引發(fā)的相關(guān)疾病，對(duì)維持人民群眾的健康生活起到重要保障作用[6]，從天然植物中尋找體內(nèi)自由基消除劑將是現(xiàn)代醫(yī)藥和保健行業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。因此，本研究對(duì)磨盤草采取不同的提取方法并探索其提取物的對(duì)自由基的清除，通過(guò)比較抗氧化活性的強(qiáng)弱得出較佳的提取方法，這不僅開拓磨盤草在現(xiàn)代醫(yī)藥、保健行業(yè)的應(yīng)用還可擴(kuò)大天然抗氧化劑來(lái)源的范圍，為獲取天然植物抗氧化劑的相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

高速萬(wàn)能粉碎機(jī)( FW100) (天津泰斯特儀器有限公司) ，F(xiàn)A1204B電子天平(上海天美天平儀器有限公司) ，電熱式恒溫水浴鍋(箱) (江蘇金壇宏凱儀器廠) ，回流裝置，循環(huán)水真空抽氣泵(上海嘉鵬科技有限公司) ，RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，752N紫外可見分光光度計(jì)(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。

1.1.2 試藥

磨盤草(購(gòu)自百色市右江區(qū)，由右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光副教授鑒定)；無(wú)水乙醇，甲醇，1，1-二苯基-2-三硝基苦肼( DPPH，南京建成生物工程研究所) ，十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、三氯乙酸( TCA) 、三氯化鐵、鐵氰化鉀等均為分析純，試驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取物的制備

稱取磨盤草干燥粉末100 g置于圓底燒瓶，以料液比1∶10量取95%乙醇1 000 mL加入浸泡1h后水浴加熱回流提取2h，冷卻抽濾，回收濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至20～40 mL后水浴制成浸膏備用。稱定質(zhì)量，用95%乙醇稀釋成不同濃度的磨盤草乙醇提取液，根據(jù)以上方法制備不同濃度的磨盤草甲醇提取液。

1.2.2 清除DPPH 自由基能力的測(cè)定[7]

取5支10 mL 具塞比色管，各加入新配置的6×10-4mol/L DPPH溶液0.5 mL，分別加入質(zhì)量濃度0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mg/mL的樣品液1. 0 mL，加無(wú)水乙醇定容至5 mL，暗光反應(yīng)30 min，以無(wú)水乙醇調(diào)零，在517 nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)(n= 3) ，根據(jù)計(jì)算公式計(jì)算其清除率：

清除率=[( A1- A2) /A1]×100%

其中A1為空白吸光度(t= 0 min)，A2為反應(yīng)30 min 后的吸光度。

1.2.3 還原力的測(cè)定[8]

采普魯士蘭法[8]測(cè)定。取5支大試管，分別移取1 mL不同濃度的磨盤草多糖樣品溶液，加2.5 mL pH=6.6磷酸鹽緩沖溶液和2.5 mL 1%鐵氰化鉀溶液，混合后，于50 ℃恒溫水浴鍋內(nèi)放置20 min后，繼續(xù)加入2.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸溶液，若有沉淀物則需離心(4.0×103r/min，10 min)，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和2.5 mL 0.1%三氯化鐵溶液，混勻，靜置10 min，于波長(zhǎng)為700 nm處測(cè)定吸光度A。

2 結(jié)果與分析

2.1 清除DPPH 自由基能力

DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，與氧化劑發(fā)生反應(yīng)，提供H 被還原，顏色發(fā)生變化，由深紫色變?yōu)榈S色，可用紫外分光光度法測(cè)定，吸光度值越小其清除率越大。以高濃度逐漸稀釋的方式檢測(cè)不同樣品溶液對(duì)自由基的清除率，以自由基清除率為50%時(shí)樣品的濃度( IC50) 來(lái)衡量樣品對(duì)自由基的清除能力。IC50越小，表明樣品清除自由基的能力越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1，隨著提取液濃度的增加，對(duì)DPPH·的清除率呈上升趨勢(shì)，存在一定的量效關(guān)系，表明磨盤草提取物具有較顯著的抗氧化活性。經(jīng)比較可知當(dāng)DPPH·清除率接近50% 時(shí)乙醇樣品液的濃度( IC50)為0.6 mg/mL，甲醇樣品液的濃度為0.7 mg/mL，表明磨盤草乙醇提取物清除DPPH·的能力比甲醇提取物強(qiáng)。

圖1 磨盤草提取液對(duì)DPPH 自由基的清除能力

2.2 還原Fe3 +能力

還原力的測(cè)定是檢驗(yàn)樣品是否是良好的電子供體的方法，還原力強(qiáng)的樣品應(yīng)該是良好的電子供體者，它供應(yīng)的電子能使Fe3 +還原為Fe2 +。還原力的測(cè)定是用來(lái)評(píng)價(jià)抗氧化劑活性的常用方法，吸光度越高則說(shuō)明該物質(zhì)的抗氧化能力越強(qiáng)。采用普魯士蘭法測(cè)定不同提取方法所得樣品液還原Fe3 +能力，結(jié)果如圖2。隨著磨盤草提取物濃度的增加，其吸光度值呈逐漸遞增趨勢(shì)，還原Fe3 +能力逐漸增強(qiáng)，在相同質(zhì)量濃度下甲醇提取物所測(cè)的吸光度值均大于乙醇提取物所測(cè)得數(shù)據(jù)。磨盤草95%乙醇提取物、甲醇提取物還原Fe3+能力的回歸方程分別為A=0.204 5C+0.086 9(R2=0.996 8)，A=0.191 5C+0.159 5 (R2=0.989 9)，因此可說(shuō)明磨盤草不同提取液均具有較強(qiáng)還原Fe3 +的能力，且甲醇提取物的能力優(yōu)于乙醇提取物。

圖2 磨盤草提取液還原Fe3+能力

3 討 論

通過(guò)對(duì)DPPH自由基的清除和還原Fe3+能力的探究，比較以95%乙醇與甲醇為溶劑所得磨盤草提取物體外抗氧化活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種不同的提取物均具有較好的抗氧化活性，其能力與提取物濃度呈正相關(guān)。乙醇提取物清除DPPH自由基的能力優(yōu)于甲醇提取物，甲醇提取物還原Fe3+能力比乙醇提取物顯著。

目前研究發(fā)現(xiàn)中草藥具有抗氧化功能，有效成分有：黃酮類、多酚類、皂苷類、鞣質(zhì)類、維生素類、褪黑素等，其中黃酮類化合物具有抗癌、抗菌、抗病毒、抗過(guò)敏等多種生理活性及藥理作用。對(duì)人類腫瘤、衰老、心血管疾病的預(yù)防和治療有著重要意義；皂苷大多有明顯的抗氧化作用。已知氧化損傷與許多病理生理現(xiàn)象如衰老、動(dòng)脈粥樣硬化、缺血再灌注損傷等有關(guān)。皂苷類的抗氧化作用則可能是其延緩衰老，抗動(dòng)脈粥樣硬化?？谷毖俟嘧p傷等藥理作用的共同作用機(jī)制；鞣質(zhì)的抗氧化性還表現(xiàn)在抑制肝臟線粒體、微粒體的脂質(zhì)過(guò)氧化作用；抑制由腎上腺索引起的脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)分解作用；降低多種誘變劑的誘變性并有抗病毒活性；降低血液中尿素氨濃度；有抗腫瘤、抗癌變作用等[9]。磨盤草具有較強(qiáng)抗氧化活性與其含酚類、黃酮苷和糖等有效成分密切相關(guān)。對(duì)磨盤草抗氧化活性的探究以期優(yōu)化磨盤草的綜合利用價(jià)值，加快與完善磨盤草的臨床應(yīng)用，為進(jìn)一步研究與開發(fā)磨盤草的新型功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

植物作為人體外源性抗氧化物質(zhì)的最重要來(lái)源，其提取物的抗氧化研究開發(fā)日益受到人們的重視并取得了許多成果。不同天然植物提取成分的性質(zhì)及抗氧化機(jī)制不盡相同， 目前研究報(bào)道的抗氧化機(jī)理主要包括直接清除或抑制自由基，提供質(zhì)子、電子，作用于與自由基有關(guān)的酶，抑制氧化酶的活性[10]。自由基生物學(xué)和自由基醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展表明，自由基與癌癥、衰老、各種心血管疾病、帕金森綜合癥等各種急性和慢性疾病密切相關(guān)[11]。磨盤草不僅具有較強(qiáng)的清除自由基能力,提供電子還原Fe3+能力，還具有易種植、生產(chǎn)與采集等優(yōu)點(diǎn)，若能充分發(fā)揮磨盤草在醫(yī)療與保健等領(lǐng)域的作用，將可擴(kuò)展植物天然抗氧化劑在食品、飼料、醫(yī)療保健中的應(yīng)用，充分體現(xiàn)我國(guó)地大物博的優(yōu)勢(shì)。因此天然中草藥中篩選和開發(fā)抗氧化作用確切、安全無(wú)毒的新品種或分離提取其有效抗氧化成分，已是當(dāng)務(wù)之急。

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Study on Antioxidant Effect of the Extracts from Abutilon indicum (L.) Sweet

Zheng Hongjuan1, Huang Chunyang1, Qi Liangyu1, Zhang Hang1, Li Zhaodie1,
Huang Yuewei1, Zhong Zhaoyin2, Huang Suoyi2，3*

(1. College of Clinical Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000，China; 2. College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000，China;3.Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin, Baise 533000，China)

Objective：Study on antioxidant effect of the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet. Method：Clearance ability of the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet on DPPH· and the reduction of Fe3+ability were measured with the spectrophotometry．To evaluate and compare the antioxidant activity of the extracts from different methods. Results: Experiments showed that the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet had great effect on clearance of DPPH· and Reduction Fe3+，and its effect increases with increasing concentration．Conclusion: Ethanol extract and methanol extract ofAbutilonindicum(L.) Sweet have strong antioxidant activity ,and the concentration showed good dose effect relationship. In a certain mass concentration，ethanol extract is stronger than methanol extract about clearance ability on DPPH·. Methanol extract is better than ethanol extract on the reduction of Fe3 +ability.

Abutilonindicum(L.) Sweet; extracts ; antioxidant activity

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.06.009

2016-03-28

2015年自治區(qū)級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目(201510599042)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局“十二五”中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)建設(shè)項(xiàng)目(國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā){[2012]32號(hào))；廣西重點(diǎn)學(xué)科藥物化學(xué)建設(shè)項(xiàng)目(桂教科研[2013]16號(hào))；廣西高?？萍紕?chuàng)新能力提升工程建設(shè)項(xiàng)目(桂教科研〔2015〕5號(hào))；廣西高校右江流域特色民族藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(kfkt2016035)。

鄭鴻娟(1993—)，女，壯族，右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)生。E-mail:zhenghongjuangx@163.com

*通訊作者： 黃鎖義(1964—)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事醫(yī)用化學(xué)的教學(xué)和科研工作,研究方向：食品衛(wèi)生、天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)。E-mail: huangsuoyi@163.com

Q946

A

1006-9690(2016)06-0035-04