楊銳，李金良，王斌，李思聰，李旭廷*

(1. 四川省畜牧科學(xué)研究院，四川，成都，610066；2. 動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都，610066)

甘草提取物對(duì)左氧氟沙星在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及組織分布的影響

楊銳1,2，李金良1,2，王斌1,2，李思聰1,2，李旭廷1,2*

(1. 四川省畜牧科學(xué)研究院，四川，成都，610066；2. 動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都，610066)

為了研究甘草提取物對(duì)左氧氟沙星在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及組織分布的影響，將SD大鼠隨機(jī)分成單用組和聯(lián)用組，單用組和聯(lián)用組分別予0.9%氯化鈉溶液和甘草提取物(0.5 g/kg，qd×7 d)，灌胃給予左氧沙氟星(20 mg/kg)后按時(shí)間點(diǎn)連續(xù)采樣, 采用HPLC法測(cè)定給藥后血漿以及組織中的左氧氟沙星濃度。結(jié)果表明，與單用組相比，聯(lián)用組的左氧氟沙星主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)tmax、t1/2、MRT0-36h、MRT0-∞均顯著增大(P<0.05)；左氧氟沙星在各組織中濃度水平，呈現(xiàn)出先降低后增加的特點(diǎn)，但分布特征沒有改變。甘草提取物能減慢左氧氟沙星在體內(nèi)的吸收和消除速度，促進(jìn)其向組織中轉(zhuǎn)運(yùn)和分布，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間。

甘草提取物；左氧氟沙星；藥動(dòng)學(xué)；組織分布；中西藥相互作用

甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch或同屬植物脹果甘草G.inflataBata.和光果甘草G.GlabraL.等的干燥根或根狀莖。甘草味甘，性平，通行十二經(jīng)，具有益氣補(bǔ)中、潤(rùn)肺止咳、調(diào)和藥性、引藥歸經(jīng)等多種功效，藥理作用廣泛，是臨床最常用的中藥之一。研究顯示，甘草對(duì)機(jī)體代謝酶系統(tǒng)的影響較為復(fù)雜，可影響CYP3A和P-gp的調(diào)控和表達(dá), 與其他藥物聯(lián)用后, 可能改變藥物代謝行為[1]?；诟什輰?duì)機(jī)體代謝酶系統(tǒng)影響的角度， 陳江飛等[2-4]研究了甘草提取物連對(duì)抗心律失常藥物胺碘酮、抗癲癇藥物卡馬西平、抗焦慮藥物阿普唑侖在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)均不影響其藥動(dòng)學(xué)特征，但關(guān)于甘草與抗生素藥物(抗菌藥)相互作用的報(bào)道幾乎沒有。

左氧氟沙星是第三代氟喹諾酮類藥物，抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)，臨床應(yīng)用廣泛[5]。曾建濤等[6]臨床觀察復(fù)方甘草制劑聯(lián)合左氧氟沙星治療社區(qū)性肺炎發(fā)現(xiàn)療效顯著。與此同時(shí)像黃連素、川芎嗪等中藥單體與西藥聯(lián)合應(yīng)用也十分常見，其有效性已經(jīng)為臨床、實(shí)驗(yàn)所證實(shí)，但這種配伍應(yīng)用尚屬經(jīng)驗(yàn)性聯(lián)合用藥。為探索抗感染性疾病的中西藥物合用的相互作用，本文研究甘草提取物對(duì)左氧氟沙星在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及組織分布的影響, 探討可能發(fā)生的藥動(dòng)學(xué)相互作用及其機(jī)制，促進(jìn)對(duì)甘草的全面認(rèn)識(shí)，為臨床用藥提供參考，也為推動(dòng)中西結(jié)合藥動(dòng)學(xué)發(fā)展提供實(shí)踐依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要儀器 UltiMate3000高效液相色譜儀,美國(guó)戴安公司；CQ250超聲洗滌器,上海超聲儀器廠；800B臺(tái)式離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠；WH-3微型旋渦混合儀,上海瀘西分析儀器廠；MiniSpin Plus 個(gè)人型高速離心機(jī),德國(guó) Eppendorf 公司；FSH-2A可調(diào)高速勻漿機(jī),常州朗越儀器制造有限公司。1.2 藥物與試劑 甘草提取物,四川省廣漢三星堆植物化工有限責(zé)任公司，含甘草酸(C42H62O16)為7.3%，批號(hào)140210。左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品,中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度為97.1%，編號(hào)130455-201106。左氧氟沙星原料藥,四川鼎尖動(dòng)物藥業(yè)有限責(zé)任公司，純度為86.1%，批號(hào)20140313。左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品及原料藥在105 ℃下烘干至恒重備用。

甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD雄性大鼠，體重(200±20)g,成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)SCXK(川)2013-24。試驗(yàn)開始前，于實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)數(shù)日以適應(yīng)本實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。整個(gè)試驗(yàn)期間，兩組大鼠的活動(dòng)、飲食情況均無(wú)明顯異常。

1.4 藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)方案及樣品采集 健康SD雄性大鼠共12只，隨機(jī)分成單獨(dú)用藥組與聯(lián)合用藥組兩個(gè)組，每組6只。聯(lián)用組每日給予0.1 g/mL甘草提取物(0.5 g/kg，ig，qd)[2]，單用組給予相應(yīng)體積的生理鹽水，共7 d。禁食12 h后于第8天，4 mg/mL左氧氟沙星藥液?jiǎn)蝿┝?0 mg/kg，ig，分別于給藥前(0 h)和給藥后0.17、0.33、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24 h斷尾取血約0.5 mL，肝素抗凝，4000 r/min離心5 min，分離血漿，置-20 ℃冰箱中保存待用。

1.5 組織分布試驗(yàn)方案及樣品采集 健康SD雄性大鼠共36只，隨機(jī)分成單獨(dú)用藥組與聯(lián)合用藥組兩個(gè)組，每組再分成3個(gè)小組，每組6只。給藥方式同1.4項(xiàng)下操作。給藥后，0.5、2、6 h斷頭處死后，取心、肝、脾、肺、腎、腦各組織樣品，用生理鹽水洗去表面浮血，并去脂肪，用濾試吸干殘余血液，稱重，置-20 ℃冰箱中保存待用。1.6 血漿樣品的處理 參考文獻(xiàn)方法[7]，取血漿0.2 mL于試管中，加入甲醇0.2 mL，渦旋混合60 s，13000 r/min離心5 min，超聲振蕩60 s，再以13000 r/min離心10 min后，取20 μL上清液直接上機(jī)進(jìn)樣。

1.7 組織樣品的處理 參考文獻(xiàn)方法[8]，取組織樣品(心、肝、脾、肺、腎、腦)，精密稱定，按組織：蒸餾水(1 g∶2 mL)加入蒸餾水進(jìn)行勻漿。充分勻漿后，取0.5 mL勻漿液于試管中，加入色譜級(jí)甲醇、5%三氯乙酸各0.25 mL，漩渦混合60 s，超聲波振蕩60 s，以13000 r/min離心15 min后，取20 μL上清液直接上機(jī)進(jìn)樣。1.8 色譜條件 色譜柱：Agilen HC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.01 mol/L KH2PO4-0.5 mol/L四丁基溴化銨(30∶30∶430∶10，V/V/V/V)，磷酸調(diào)pH至3.0；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)295 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。在上述色譜條件下，左氧氟沙星與溶劑峰、血漿及各組織中其他組分能完全分離開。該方法血漿和組織樣品的定量下限分別為0.025 μg/mL和0.01 μg/g。

血漿和組織樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍分別為0.025～10 μg/mL和0.01～5 μg/g之間，線性關(guān)系良好。在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，回收率為76.2%～84.3%，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.5%～6.4%和3.8%～6.8%。

2 結(jié)果

2.1 藥物動(dòng)力學(xué)結(jié)果 單獨(dú)用藥組和聯(lián)合用藥組在大鼠體內(nèi)的左氧氟沙星血藥濃度-時(shí)間曲線見圖1，主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果見表1。

圖1 單用組和聯(lián)用組在大鼠體內(nèi)的左氧氟沙星的血藥濃度-時(shí)間曲線

參數(shù)單用組聯(lián)用組ρmax/(mg·L-1)2.255±0.3501.745±0.529tmax/h0.583±0.1441.188±0.554*AUC0-24h/(mg·h·L-1)9.910±2.16612.845±2.405AUC0-∞/(mg·h·L-1)10.151±2.20714.650±2.424t1/2/h4.882±0.6868.204±1.764*MRT0-24h/h4.355±0.1167.389±1.129**MRT0-∞/h4.998±0.05510.983±2.570**Vz/F/(L·kg-1)14.470±4.54716.527±4.227

*表示差異顯著(P<0. 05)；**表示差異極顯著(P<0. 01)；“-”表示低于檢測(cè)下限；下同。

結(jié)果表明：與單用組相比，聯(lián)用組大鼠體內(nèi)左氧氟沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有如下變化：Cmax降低，AUC0-24h、AUC0-36h、Vz/F增大，但沒有顯著性差異(P>0.05)；tmax、t1/2、MRT0-36h、MRT0-∞組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 組織分布結(jié)果 根據(jù)血藥濃度-時(shí)間曲線，選取分別代表吸收相、分布相、消除相3個(gè)時(shí)間點(diǎn)0.5、2、6 h，測(cè)定單用組和聯(lián)用組在大鼠各組織的左氧氟沙星濃度，結(jié)果見表2。

表2 單用組和聯(lián)用組在大鼠體內(nèi)的左氧氟沙星組織分布

試驗(yàn)結(jié)果表明，單用組左氧氟沙星在大鼠各組織器官中濃度的排序?yàn)椋航o藥0.5 h后，腎>肝>脾>肺>心>腦；給藥2 h后，肝>腎>脾>肺>心；給藥6 h后，肝>腎>心>脾>肺。與單用組相比，聯(lián)合組左氧氟沙星在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組織器官中濃度水平呈現(xiàn)出先降低后增加的特點(diǎn)，但左氧氟沙星在組織中的分布特征并沒有改變。

3 討論與小結(jié)

3.1 藥動(dòng)學(xué)分析 影響藥物吸收過(guò)程的相互作用主要有胃腸道pH、螯合作用、吸附作用、胃腸運(yùn)動(dòng)、削弱腸吸收功能、改變腸道菌群、P-糖蛋白等方面[9]。本次試驗(yàn)，聯(lián)用后左氧氟沙星的tmax延后，Cmax降低，提示甘草提取物延緩了左氧氟沙星的吸收，可能是甘草提取物在胃酸的作用下釋放出少量金屬離子從而與左氧氟沙星形成了部分螯合物，影響了左氧氟沙星的吸收入血；但是AUC0-24h，AUC0-∞比單用組有所增加(P>0.05)，說(shuō)明甘草提取物對(duì)左氧氟沙星在大鼠體內(nèi)總的吸收程度并沒有顯著影響。聯(lián)用后，左氧氟沙星的Vz/F有所增加(P>0.05)，t1/2和MRT0-24 h值均顯著大于單用組(P<0.05)，提示說(shuō)明聯(lián)合后甘草提取物加速了左氧氟沙星向組織中的轉(zhuǎn)運(yùn)，減慢了左氧氟沙星的消除速度，使左氧氟沙星在體內(nèi)作用更加持久。

3.2 組織分布分析 藥物分布過(guò)程中相互作用可表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)血漿蛋白結(jié)合部位，改變游離型藥物比例，或改變藥物在某些組織的分布量。藥物向組織的轉(zhuǎn)運(yùn)主要決定于血液中游離型藥物濃度以及該藥物與組織的親和力[9]。本試驗(yàn)中甘草提取物與左氧氟沙星聯(lián)合用藥后，左氧氟沙星在組織中濃度水平發(fā)生了一定變化。從給藥到給藥后2 h內(nèi)，聯(lián)合組的左氧氟沙星在各組織中濃度明顯低于單用組，說(shuō)明甘草提取物抑制了左氧氟沙星入血的過(guò)程，直接影響了其在組織中分布速度。但是給藥2 h開始至6 h，所測(cè)得左氧氟沙星濃度是高于單用組，證實(shí)了甘草提取物促進(jìn)了左氧氟沙星向組織的轉(zhuǎn)運(yùn)，這可能由于甘草酸與血漿蛋白結(jié)合率高達(dá)95.4%±2.0%，最大結(jié)合分子數(shù)為9.64，血漿中甘草酸絕大部分呈結(jié)合狀態(tài)存在[10]，引起甘草與左氧氟沙星在血漿蛋白結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生了競(jìng)爭(zhēng)性作用，增加了游離型左氧氟沙星比例，使之更易通過(guò)生物膜，促進(jìn)左氧氟沙星向組織的轉(zhuǎn)運(yùn)和分布；另一方面甘草提取物主要成分甘草酸對(duì)大鼠有抗利尿作用[11]，增加了腎小管的重吸收，也可能導(dǎo)致左氧氟沙星排泄的減慢。就其具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

本試驗(yàn)立足于抗感染疾病的中西藥物相互作用的角度，發(fā)現(xiàn)甘草提取物和左氧氟沙星二者聯(lián)用應(yīng)用，可以促進(jìn)左氧氟沙星向組織中轉(zhuǎn)運(yùn)和分布，延長(zhǎng)其在體內(nèi)的作用時(shí)間，從藥動(dòng)學(xué)角度分析有其積極的意義，值得從更多藥效學(xué)方面進(jìn)行驗(yàn)證，全面指導(dǎo)臨床合理用藥。

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(編輯：陳希)

Effect of Licorice Extract on Pharmacokinetics and Tissue Distribution of Levofloxacin in Rats

YANG Rui1,2，LI Jin-liang1,2，WANG Bin1,2，LI Si-cong1,2，LI Xu-ting1,2*

(1.SichuanAcademyofAnimalSciences,Chengdu610066,China; 2.SichuanKeyLaboratoryofAnimalGeneticsandBreeding,Chengdu610066,China)

To study the effect of licorice extract on the pharmacokinetics and tissue distribution of levofloxacin in rats. The SD rats were randomly divided into the single group and the combined group, that were administrated respectively with normal saline and extract of licorice. After pretreated with extract of licorice (0.5 g/kg,qd) for 7 d, levofloxacin was given to the rats by intragastric administration at the dose of 20 mg/kg. The concentrations of levofloxacin in plasma and tissue after administration were determined by HPLC. Pharmacokinetic data were calculated by DAS 2.0. Comparision with the single administration group, the main pharmacokinetic parameters(t1/2, tmax, MRT0-36h, MRT0-∞)were significantly increased (P<0.01), the concentration level of levofloxacin in tissuet showed a feature of first decreasing followed by increasing, but the characteristic of tissue distribution was not changed. The metabolic characteristics of levofloxacin were influenced by licorice extract in rats significantly, including decreasing the speed of absorption, retarding the speed of elimination, accelerating the distribution from blood to tissue and lengthening the time of drug action.

licorice extract; levofloxacin; pharmacokinetics; tissue distribution; herb-western drug interactions

四川省基本科研項(xiàng)目(SASA2013A08)

楊銳，碩士，從事新獸藥的開發(fā)與應(yīng)用工作。

李旭廷。E-mail: 676049640@qq.com

2016-01-22

A

1002-1280 (2016) 03-0035-04

S853.7