杜賀慶

?

HPLC法測(cè)定四季感冒膠囊中橙皮苷和連翹苷

杜賀慶

目的 利用HPLC法測(cè)定四季感冒膠囊中橙皮苷與連翹苷的含量。方法 運(yùn)用高效液相色譜法，操控Agilent XDB-C18分析儀器，在色譜柱規(guī)格、流速控制等按標(biāo)準(zhǔn)操作。結(jié)果HPLC法實(shí)驗(yàn)的成分分離度較好，其中橙皮苷的線性限制是0.101 3～0.910 5 μg（r=0.999 7），連翹苷的線性限制是0.109 8～0.910 7 μg（r=0.999 3）；橙皮苷加樣回收率為95.78%（RSD=1.39%），連翹苷回收率98.14%（RSD=1.18%）。結(jié)論 HPLC法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏，可以作為四季感冒膠囊成分控制的理想方法。

橙皮苷；HPLC法；連翹苷；四季感冒膠囊

四季感冒膠囊由9味中藥制成（連翹、炒香附、荊芥、陳皮、紫蘇葉等），主要治療由風(fēng)寒感冒導(dǎo)致的咽部脹痛灼熱、鼻塞等癥狀。四季感冒膠囊富含橙皮苷、連翹苷等成分是主要活性物質(zhì)，具有抗菌消炎等作用［1-3］。本研究應(yīng)用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography ，HPLC）檢測(cè)法，旨在測(cè)量四季感冒膠囊中橙皮苷、連翹苷兩種物質(zhì)成分含量。具體報(bào)道如下.

1　儀器與試藥

所需儀器：安捷倫1260液相色譜儀；瑞士進(jìn)口梅特勒電子天平XS105DU；日本島津紫外可見分光光度計(jì)UV-2550；江蘇昆山舒美超聲波清洗機(jī)KQ-500；默克密理博實(shí)驗(yàn)室超純水系統(tǒng)Millipore-Milli-Q［4］。

色譜參數(shù)：XDB-C18（Agilent）色譜柱為250×4.6 mm2，5 μm，柱溫度為30℃，檢測(cè)點(diǎn)為277nm波長(zhǎng)處。

流動(dòng)相：乙腈（A流相）、甲酸水溶液（濃度為1%，即B流相）、梯度洗脫使用乙腈（10%，20 min→35%，40 min→90%，45 min→10%，45 min），加樣標(biāo)準(zhǔn)為10 μL，流動(dòng)速度為1.0 ml/min。

對(duì)照試藥：橙皮苷（生產(chǎn)批號(hào)：140630-201427）；連翹苷（生產(chǎn)批號(hào)：140713-201416）；升麻素苷（生產(chǎn)批號(hào)：140724-201423）；迷迭香酸（生產(chǎn)批號(hào)：149218-201405）；5-O-甲基維斯阿米醇苷（生產(chǎn)批號(hào)：141224-201409），上述藥物均由食品藥品檢定研究院（中國(guó)）提供，配制溶劑為甲醇。

四季感冒膠囊（國(guó)藥準(zhǔn)字：Z20050579；哈藥集團(tuán)三精千鶴制藥股份有限公司；批準(zhǔn)日期：2014-06-08）。

2　方法與結(jié)果［5-6］

2.1溶液的制備

選定色譜柱后，（1）制取對(duì)照儲(chǔ)備液：測(cè)取適量對(duì)照用的橙皮苷與連翹苷，與木精結(jié)合制出連翹苷18 μg/ml、橙皮苷12 μg/ml的試劑；（2）供試樣品溶液：將四季感冒膠囊內(nèi)容物倒出，研細(xì)，取3 g倒入錐形瓶例，倒入木精25 ml，密封，回流加熱半個(gè)小時(shí)，搖勻冷藏過濾再烘干。以余留物、水、氯仿?lián)u振溶解，抽出50 ml（分2次）。蒸干備用。剩余添正丁醇、水飽和，抽取50 ml（分2次），蒸干備用。特制之外的余留物均加木精，稀釋到10 ml，搖晃均勻，過濾即得；（3）陰性樣品溶液：將連翹、陳皮按上一項(xiàng)步驟制為陰性樣品溶液。

2.2適用性試驗(yàn)

取上述三種試劑，依照準(zhǔn)備好的色譜條件進(jìn)行，觀察色譜變化。結(jié)果顯示，按照這種色譜條件，連翹苷、橙皮苷順式和反式異構(gòu)體基線分離，分離度超1.5，陰性樣品不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.3線性關(guān)系考察

用適量對(duì)照品（連翹苷與橙皮苷）及木精，分別稀釋調(diào)勻，做出119μg/ml橙皮苷以及還有179μg/ml連翹苷，得出結(jié)果：橙皮苷的線性限制是0.101 3～0.910 5μg（r=0.999 7），連翹苷的線性限制是0.109 8～0.910 7μg（r=0.999 3）。

2.4精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確取5 μl對(duì)照溶液，進(jìn)行6次進(jìn)樣，計(jì)算兩種物質(zhì)的峰面積，各組峰值為1.6%～2.1%，精密度方面，本儀器較占優(yōu)勢(shì)。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確取6份對(duì)照儲(chǔ)備液，制備5 μl（按照供試樣品溶液的方法），結(jié)果橙皮苷均含量（88.400μg/g，RSD=0.88%，n=5）、連翹苷均含量（55.700 μg/g，RSD=0.98%，n=5）。

2.6加樣回收率試驗(yàn)

取四季感冒膠囊6粒，按照供試樣品溶液方式測(cè)量。結(jié)果橙皮苷加樣均回收率為95.78%（RSD=1.39%），連翹苷回收率98.14%（RSD=1.18% ）。

3　討論

研究超聲、回流提取對(duì)檢測(cè)干擾。檢測(cè)回流半個(gè)小時(shí)時(shí)，兩峰含量都比超聲半小時(shí)高，延長(zhǎng)十分鐘，結(jié)果無(wú)差別，故選取半個(gè)小時(shí)為加熱回流提取條件。波長(zhǎng)測(cè)定同理。了解了橙皮苷、連翹苷的藥物結(jié)構(gòu)后，用正丁醇提煉橙皮苷，采取氯仿液提煉連翹苷，之后蒸干溶解攪勻后，有較好的色譜峰峰形，符合分離度指標(biāo)［7-8］。HPLC法檢測(cè)，性能卓越、便捷，為研究四季感冒膠囊的成分含量提供了新方法，有積極的安全把控價(jià)值。

［1］許海棠，李家璇，陳其鋒，等.HPLC-MS/MS法測(cè)定四季感冒膠囊中的4種有效成分［J］.廣西民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，19（3）:91-94.

［2］范蕾，劉敏，吳查青，等.HPLC 法同時(shí)測(cè)定四季感冒膠囊中橙皮苷和連翹苷的含量［J］.中國(guó)藥師，2015，18（6）:1054-1056.

［3］肖會(huì)敏，何悅，陳飛，等.四季抗病毒合劑的超快速液相色譜法指紋圖譜研究及4個(gè)成分的含量測(cè)定［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2015，35（3）:230-233.

［4］姬雪禮，李文烈，鄭曉杰，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2014，23（7）:33-34.

［5］蔣俊春，孟建升.HPLC法同時(shí)測(cè)定及砂和胃膠囊中橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷的含量［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（6）: 1496-1498.

［6］唐勵(lì)靜，文翔昊，李沖，等.HPLC同時(shí)測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸、連翹苷、黃芩苷、漢黃芩素、芹菜素的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（21）:71-74.

［7］孫艷濤.HPLC雙波長(zhǎng)法同時(shí)測(cè)定消石利膽膠囊中芍藥苷、橙皮苷、黃芩苷和大黃酚的含量［J］.中國(guó)藥師，2016，19（4）:801-803.

［8］汪玉萍，郝自新.HPLC法同時(shí)測(cè)定羚羊感冒口服液中牛蒡苷和連翹苷的含量［J］.安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，29（4）:38-41.

The Application of HPLC Method for Measuring the Hesperidin and Phillyrin Content in Four-season Cold Capsule

DU Heqing Department of Pharmacy，General Hospital of Liaohe Oil Field，Panjin Liaoning 124010，China

Objective To measure the hesperidin and Phillyrin content in four season cold capsule by using pplication the HPLC method.Methods The modern column chromatography was used and the Agilent XDB-C18 analytical instrument was controlled under the standard operation in the column specifcations，mobile phase，fow control and other aspects.Results HPLC method for separation was good.The linear constraints of hesperidin was 0.101 3～0.910 5μg（r=0.9997） and the linear constraints of phillyrin was 0.109 8～0.910 7 μg（r=0.9993）； The average recovery rate of hesperidin was95.78% （RSD=1.39%），the average recovery rate of phillyrin was 98.14%（RSD=1.18%）.Conclusion The method for identifcation has the characters of excellent performance，fexible manipulation and convenient operation.It is an ideal method for content measurement in four-season cold capsule.

Hesperidin，HPLC，phillyrin，F(xiàn)our-season cold capsule

R

A

1674-9308（2016）21-0176-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.21.109

遼河油田總醫(yī)院藥學(xué)部，遼寧 盤錦 124010