逯雙，楊培民，曹廣尚

1.山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東 濟南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東 濟南 250011

·綜述·

白花蛇舌草活性成分多糖與黃酮研究進展

逯雙1，楊培民2，曹廣尚2

1.山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東 濟南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東 濟南 250011

白花蛇舌草具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性。本文通過收集整理近年來國內(nèi)外相關(guān)文獻，發(fā)現(xiàn)其發(fā)揮藥效的主要活性成分多糖及黃酮具有不同程度的一致性，并對二者活性成分的藥理作用、提取純化工藝進行歸納總結(jié)。盡管迄今對白花蛇舌草黃酮和多糖藥效及提取研究已取得一定成果，但多以黃酮或多糖單一成分作為研究對象，對白花蛇舌草發(fā)揮藥效的機理探索尚不夠深入，對其成分的提取純化工藝指標較為單一。本文結(jié)合腸道菌群的吸收代謝、藥物結(jié)構(gòu)與發(fā)揮藥效的關(guān)系多角度推測其作用機制，展望以多指標提取工藝進行優(yōu)化，為進一步開發(fā)利用白花蛇舌草提供參考。

白花蛇舌草；多糖；黃酮；綜述

白花蛇舌草為茜草科植物白花蛇舌Oldenlandia diffusa（Willd.）Roxb.的干燥全草[1]。其味苦、甘，性寒，歸心、肝、脾經(jīng)，具有清熱解毒、利尿消腫、抗癌止痛功效。臨床上白花蛇舌草主要用于抗腫瘤、抗菌消炎，其多糖和黃酮類均為發(fā)揮藥效作用的活性成分[2]。筆者通過整理、歸納相關(guān)研究成果，發(fā)現(xiàn)其在藥效上具有不同程度的一致性，而相關(guān)報道只針對白花蛇舌草黃酮和多糖的單體成分，對二者間是否存在相互作用的研究不多。為此，筆者通過對白花蛇舌草黃酮和多糖成分藥理作用的歸納總結(jié)，探索其發(fā)揮藥效的聯(lián)系，推斷其相互作用機制，并綜述二者的提取純化工藝研究，展望黃酮與多糖成分提取工藝中有關(guān)問題，為白花蛇舌草的進一步研究提供參考。

1 藥理作用

1.1 抗腫瘤

白花蛇舌草作為古代民間治療癌癥的有效中草藥，一直沿用至今。研究表明，白花蛇舌草中的多種化學成分對各類癌癥均具有較好的抑制作用[3-5]。本文主要整理白花蛇舌草多糖及黃酮類成分的抗腫瘤活性。

大量的藥理和臨床研究表明，植物多糖類成分在抑制腫瘤生長作用的同時，對細胞并無毒副作用，且能克服化學抗腫瘤藥物在長期使用過程中易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用大的缺點，因此多糖的抗腫瘤研究成為近年來的熱點。孟氏[6]通過體外抗腫瘤實驗，發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草粗多糖對人肝癌SMMC-7721細胞與胃癌SGC-7901細胞均具有良好的抑制細胞增殖作用。楊氏等[7]研究表明，白花蛇舌草多糖可抑制體外培養(yǎng)的人宮頸癌Hela細胞和人肝癌Bel-7402細胞的生長。陳氏等[8]研究表明，白花蛇舌草總多糖對S180荷瘤小鼠具有較強的抗腫瘤作用。孟氏等[9]研究發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草多糖可明顯上調(diào)p53抑癌基因mRNA表達，降低bcl-xl促凋亡基因mRNA表達，從而抑制人肝癌Bel7402細胞的生長。

黃酮類成分是白花蛇舌草中含量較高的有效提取部位，其抗腫瘤作用機制與干擾腫瘤細胞能量代謝、誘導腫瘤細胞凋亡等有關(guān)。周氏等[10]研究表明，白花蛇舌草總黃酮對人肝癌細胞HepG-2有抑制增殖作用。楊氏等[11]研究表明，白花蛇舌草總黃酮（FOD）能有效抑制黑色素瘤A375和B16細胞增殖，誘導細胞凋亡。鄧氏等[12]研究表明，F(xiàn)OD對鼻咽癌細胞株CNE1具有抑制增殖作用，其作用機制可能與誘導細胞凋亡有關(guān)。

1.2 抗氧化

目前已知癌癥、衰老、心血管等疾病的發(fā)生發(fā)展與機體內(nèi)活性氧物質(zhì)密切相關(guān)。白花蛇舌草的多種藥理活性也可能與含有較強的抗氧化活性成分有關(guān)。

李氏[13]通過體外實驗研究表明，白花蛇舌草多糖有良好的清除氧自由基和羥自由基的能力而具有體外抗氧化活性。王氏等[14]研究發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草多糖通過提高超氧化物歧化酶活力和對負氧自由基的清除作用及抗脂質(zhì)過氧化作用來抵抗衰老。蔣氏等[15]通過1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率、總的抗氧化活性和還原能力測定等體外抗氧化實驗表明，白花蛇舌草多糖在體外有較強的抗氧化能力，對自由基有較好的清除作用。

黃酮類化合物是一類天然還原性化合物，在復雜的反應體系中因自身被氧化而具有抗氧化作用，且作用較強。許氏等[16]研究表明，白花蛇舌草清除DPPH自由基能力可能與其黃酮類化合物的含量有關(guān)。石氏等[17]研究表明，黃酮類物質(zhì)可能是白花蛇舌草發(fā)揮抗氧化活性的物質(zhì)基礎，且其清除DPPH能力與總黃酮的量及組成有關(guān)。

1.3 增強免疫功能

馬氏等[18]研究發(fā)現(xiàn)，從白花蛇舌草分離出的均一多糖具有免疫增強活性。王氏等[19]通過實驗表明，白花蛇舌草總黃酮有增強機體特異性免疫功能和非特異性免疫功能的作用。

1.4 其他

王氏等[20]研究發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草總黃酮具有抗炎及抗菌作用。羅氏等[21]研究表明，白花蛇舌草總黃酮有防治小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用，其機制可能與減少自由基生成、抑制脂質(zhì)過氧化反應和增強抗氧化能力作用有關(guān)。

2 提取純化工藝

2.1 多糖

白花蛇舌草多糖為極性大分子化合物，易溶于水，不溶于乙醇，一般采用水提醇沉的方法。

朱氏[22]采用超聲提取，最佳提取工藝為：萃取溫度70 ℃、白花蛇舌草粒度120目、料液比1∶5、萃取時間60 min，其多糖的得率為3.36％。蔣氏等[23]利用響應面分析法優(yōu)化白花蛇舌草多糖的提取工藝為：提取溫度為84.71 ℃，液固比為31.26∶1，提取時間為2.07 h，提取2次，且白花蛇舌草多糖提取量為6.721 mg/g。楊氏等[24]采用正交試驗設計法優(yōu)化多糖的乙醇沉淀法，結(jié)果最佳提取工藝為：白花蛇舌草藥材預先加12倍量水浸泡2 h，加熱至70 ℃，提取3次，每次1.5 h。沈氏等[25]采用正交設計試驗優(yōu)選提取條件得到最佳提取工藝條件為：95％乙醇脫脂，1次冷提，3次熱提，每次2 h，濃縮后用80％醇沉過夜，再進行過濾洗滌。

寶氏等[26]采用柱前衍生化高效液相色譜法鑒別和測定不同產(chǎn)地白花蛇舌草，發(fā)現(xiàn)多糖是由甘露糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖組成的雜多糖。錢氏等[27]將粗提多糖溶液采用DEAE-52（OH-）纖維素和SephadexG-200凝膠柱層析，分離純化后的多糖純品通過測定，表明其單糖的組成為：鼠李糖-葡萄糖-半乳糖-木糖-阿拉伯糖＝7∶34∶43∶5∶11。

2.2 黃酮類

黃酮類化合物包含黃酮苷和黃酮苷元，為最大程度提取2類有效成分，一般采用有機溶劑提取法。

吳氏等[28]將白花蛇舌草磨成粉末，過4號篩，加80％乙醇，水浴加熱回流3 h，測得總黃酮含量約為15％。張氏等[29]采用微波輔助提取，正交試驗優(yōu)化工藝條件后其最佳提取工藝為：乙醇濃度為80％，提取時間為40 min，料液比為1∶40，提取溫度為80 ℃，其提取率達2.86％。謝氏等[30]采用正交試驗優(yōu)化超聲波法提取總黃酮類物質(zhì)提取工藝，最佳提取工藝為：70％乙醇，料液比1∶20，超聲提取30 min，提取3次，提取率為2.38％。姚氏等[31]通過中心組合試驗設計和響應面分析，優(yōu)化確定其提取工藝條件為：液固比為26.93，提取溫度80 ℃，提取時間為110.21 min，乙醇濃度為77.77％，白花蛇舌草總黃酮提取率最高為0.94％。

楊氏等[32]以白花蛇舌草總黃酮含量及回收率為考察指標，結(jié)果最佳工藝條件為：按0.4 g/mL上樣量配制濃度為0.2 g/mL的上樣溶液，pH值5.0，AB-8型大孔吸附樹脂柱，靜置1 h，以3 BV/h的流速，采用去離子水洗脫8 BV，然后以流速為2 BV/h，用5 BV的70％乙醇洗脫，所得精制品中總黃酮含量為38.9％，轉(zhuǎn)移率可高達80％。

3 展望

3.1 多糖協(xié)同黃酮發(fā)揮作用

上述研究表明，白花蛇舌草多糖及黃酮均可在抗腫瘤、抗氧化活性及增強免疫功能方面發(fā)揮藥效，筆者推測二者合用具有一定程度的協(xié)同作用。如白花蛇舌草黃酮對腫瘤細胞具有較強的直接抑殺功能，為傳統(tǒng)中醫(yī)理論中的“祛邪”作用；而多糖類成分可提高機體系統(tǒng)免疫能力[33-34]，即中醫(yī)理論上的”扶正”作用。二者相輔相成，從而抑制或消滅腫瘤細胞，從根本上解決病癥，起到“扶正固本”之效[35]，表明多糖可協(xié)同黃酮發(fā)揮藥效。目前相關(guān)研究大多僅單獨針對多糖或黃酮研究藥理活性，但中醫(yī)臨床強調(diào)整體觀念，注重標本兼治。因此，今后應深入研究二者發(fā)揮藥效是否具有協(xié)同作用，加強對白花蛇舌草作用機制的認識，為更全面臨床用藥提供指導，使其達到最佳藥效。

3.2 多糖協(xié)同黃酮作用機制

白花蛇舌草多糖類成分可提高人體免疫能力，在抗腫瘤、抗氧化等作用上也發(fā)揮一定的藥效，但其作用機制一直處于模糊狀態(tài)。人體的腸道菌群可抑制致病菌的生長，提高機體的免疫能力。含多糖成分的補益類中藥對益生微生物的扶植效果明顯優(yōu)于致病微生物[36]。而低聚半乳糖和菊糖等益生元物質(zhì)，可被腸道菌群利用而增加益生菌數(shù)量和活力，從而利于人體健康。表明白花蛇舌草多糖可作為益生元物質(zhì)，在人體酶解為寡糖后被腸道有益菌發(fā)酵以增強人體的抵抗力。因此，筆者推斷多糖可協(xié)同黃酮發(fā)揮藥效，這可能為研究多糖類物質(zhì)發(fā)揮藥效提供新的思路。

多糖的結(jié)構(gòu)與其生物活性具有緊密關(guān)系，多糖的一級結(jié)構(gòu)及高級結(jié)構(gòu)的改變都能改變多糖的生物活性[37]。因此，研究多糖的結(jié)構(gòu)具有重要意義。但目前限于技術(shù)，無法對多糖的結(jié)構(gòu)進行解析，未來可考慮通過分析多糖一級結(jié)構(gòu)及相應生物活性，分析和考察多糖結(jié)構(gòu)與不同生物活性的關(guān)系，以找到多糖一級結(jié)構(gòu)與某種生物活性密切相關(guān)的關(guān)鍵區(qū)間，進而快速揭示多糖作用的機制，也為多糖的協(xié)同作用提供更有利的支持。

3.3 多糖與黃酮提取工藝

目前白花蛇舌草多糖提取率較低，多采用正交設計、響應面分析等方法進行優(yōu)化，而黃酮提取工藝較為成熟，提取率較高。目前主要以多糖和黃酮作為單體研究，在提取工藝上也只注重單一成分的提取率，而發(fā)揮其他作用的物質(zhì)則被忽略，這從某種意義上是對其他藥效成分的浪費。筆者建議，今后相關(guān)研究可采用二者成分提取率的雙指標進行提取工藝的考察，以更好利用藥物資源。同時，在提取工藝的篩選優(yōu)化方面，除考察提取流程的最優(yōu)工藝，也應加入藥效學指標[38]進行優(yōu)化，以達到既提高提取效率又保證質(zhì)量的效果。

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Research Progress in Active Constituents of Polysaccharides and Flavones from Herba

Hedyotis Diffusae

LU Shuang1, YANG Pei-min2, CAO Guang-shang2(1. College of Pharmacy, Shandong

University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250011, China)

Herba Hedyotis Diffusae has many kinds of pharmacological activities such as anti-tumor, antioxidant, immune regulation and so on. This article collected and reported the related literature at home and abroad in recent years, found that pharmacological active ingredients of Herba Hedyotis Diffusae show consistency of polysaccharides and flavonoids to varying degrees, and summarized the pharmacological effects and extraction and purification process. The author believed that, the study about Herba Hedyotis Diffusae has made relatively great achievements, but the research mainly focused on polysaccharides or flavonoids, and efficacy of Herba Hedyotis Diffusae was not in enough in-depth exploration. The indicator of extraction and purification process is relatively single. This study estimated the mechanism of Herba Hedyotis Diffusae from the aspects of absorption and metabolism of intestinal flora and relationship between medicine structure and exert efficacy, hoping to optimize the extracting processes by multiple indexes, and provided references for further exploitation and utilization of Herba Hedyotis Diffusae.

Herba Hedyotis Diffusae; polysaccharides; flavones; review

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.037

R285

A

1005-5304(2016)03-0122-04

國家自然科學基金（81274052）；山東省自然科學基金(ZR2011HL043)

楊培民，E-mail：jnypm7777@163.com

（2015-03-20）

（2015-06-25；編輯：梅智勝）