梁魁景，高小寬，侯曉杰

（衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000）

梨貯藏期黑斑病菌的分離與培養(yǎng)條件研究

梁魁景，高小寬，侯曉杰

（衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000）

供試各菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),平均日生長速率、產(chǎn)孢量、菌落顏色及菌落厚度差異顯著。培養(yǎng)6 h時，該菌株的萌發(fā)率能達(dá)到最高峰；適宜菌絲生長的最適溫度為28℃，最適pH值為8。

梨；黑斑病菌；分離；培養(yǎng)

1 材料與方法

1.1 供試材料 梨果實采自河北省衡水市桃城區(qū)舊城村。培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

1.2 病原菌的分離 采集梨黑斑病果實，按常規(guī)方法進(jìn)行組織分離、單孢純化、培養(yǎng)、保存。根據(jù)柯赫氏法則將分離獲得的菌株接種到梨果實上，觀察能否產(chǎn)生典型的黑斑病病斑。

1.3 病原菌生長特性的觀察 將分離獲得的病原菌分別移植于PDA培養(yǎng)基上，28℃保濕培養(yǎng)2周后，用打孔器(直徑6 mm)在菌落邊緣打孔，再將菌絲塊放置于新鮮的培養(yǎng)基上。28℃恒溫培養(yǎng)箱光照條件下培養(yǎng)。每天同一時間測量菌落直徑并觀察、記載菌落顏色及厚度。培養(yǎng)2周后測量產(chǎn)孢量。每處理重復(fù)3次。

1.4 不同時期孢子萌發(fā)率的觀察 供試病原菌培養(yǎng)2周后，洗出菌株的孢子液，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分別于 2、4、6、8、10、12 h后觀察并記錄各菌株的孢子發(fā)芽率。

1.5 pH值對孢子萌發(fā)率影響的觀察 取250 mL的錐形瓶，裝入200 mL蒸餾水，用1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的H2SO4調(diào)pH值分別至 4、5、6、7、8、9、10、11高壓滅菌20 min。然后分別將不同菌株的孢子懸浮液2 mL加入不同pH值的錐形瓶中，搖勻后分別置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，6 h后觀察分生孢子發(fā)芽率。每處理重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的鑒定 把分離獲得的病原菌接種到健康梨果實上。通過對產(chǎn)生的病斑進(jìn)行再次分離，挑取單孢純化，獲得病原菌菌株。在顯微鏡下分別觀察供試病原菌的形態(tài)特征。結(jié)果表明：供試病原菌菌株的分生孢子梗單生或數(shù)根束生，褐色或暗褐色。分生孢子棒狀或倒棒狀，褐色或黑褐色，有縱隔1～2個、橫隔2～4個，橫隔處有縊縮現(xiàn)象。根據(jù)供試病原菌的形態(tài)特征和培養(yǎng)性狀，鑒定該病原菌為半知菌亞門絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌。

2.2 菌株的生物學(xué)特性 觀察結(jié)果表明：供試菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，其日平均生長速率、菌落顏色、產(chǎn)孢量及菌落厚度均有顯著差異。菌株菌落顏色較淺，呈灰色，菌落薄，氣生菌絲密。

2.3 培養(yǎng)時間對孢子發(fā)芽率的影響 結(jié)果表明：在不同培養(yǎng)時間菌株孢子的萌發(fā)率有顯著不同。培養(yǎng)6 h時，該菌株的發(fā)芽率能達(dá)到最高峰，其中萌發(fā)率最高達(dá)84.5%；8 h和10 h計數(shù)時，孢子萌發(fā)率基本不變。

2.4 pH值對孢子發(fā)芽率的影響 觀察結(jié)果表明：病原菌菌株在pH為8時的孢子萌發(fā)率最高（為85%），當(dāng)pH大于9以后孢子萌發(fā)率顯著下降；pH大于10后病原菌孢子萌發(fā)均受抑制，pH為11時病原菌孢子完全不萌發(fā)。

3 結(jié)論與討論

本試驗通過對梨黑斑病病原菌的生物學(xué)特性觀察，可知供試3個菌株孢子在顯微鏡下形態(tài)差異不明顯；病原菌的日平均生長速率、菌落顏色、孢子萌芽率及產(chǎn)孢量均不相同，表明梨黑斑病病原菌存在多樣性。

在本試驗中觀察到，菌株孢子的發(fā)芽率在不同培養(yǎng)時間內(nèi)顯著不同。在不同pH的情況中，pH大于10病原菌孢子萌發(fā)均受抑制，pH為11時病原菌孢子完全不萌發(fā)。菌株在pH為8左右時的孢子萌發(fā)率最高。這些試驗結(jié)果可用于對梨黑斑病病害防治，如應(yīng)用硫酸銨、氯化銨等作為增效劑來提高化學(xué)藥劑和生物農(nóng)藥對梨黑斑病的防治效果。

[1] 張?zhí)煊睿袊婢荆旱谑礞湼矜邔賉M]．北京：科學(xué)出版社，2003：32～42．

[2] JanisiewiczWJ，KorstenL．Biologicalcontrol of postharvest diseases of fruits．Annual Reviews of Phytopathology，2002，40：411～441．

[3] 胡紅菊，王友平，甘宗義，等．梨種質(zhì)資源對黑斑病的抗行評價[J]．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，37(4)：394～396．

[4] 何漢祚，桂卿，喬志宏，等．梨黑斑病的發(fā)生規(guī)律與防治技術(shù)[J]．山西果樹，1995(4)：28～29．

S436.612.1+4

A

1006-9402(2016)03-0004-01

2016-03-26

河北省科技計劃項目（項目編號：15226505）

梁魁景，男，碩士，講師，現(xiàn)主要從事園林植物病原微生物方面的研究工作。E-mail：zwbh201011@163．com。