王向紅　邢巧玲　李雅潔　羅敏莉　韓省華　楊翠麗　毛麗梅

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疑難血型鑒定與分析1例

王向紅邢巧玲李雅潔羅敏莉韓省華楊翠麗毛麗梅

目的對(duì)1例疑難血型臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)及分析，為輸血科血型鑒定，交叉配血提供實(shí)踐依據(jù)。方法分別用不同試劑公司的微柱凝膠單克隆抗體卡和ABO血清，血球試劑，采用經(jīng)典試管法，卡式法，唾液HAB血型物質(zhì)測(cè)定，吸收放散試驗(yàn)。結(jié)果此標(biāo)本血型是AxB血型。結(jié)論此標(biāo)本鑒定血型表型是AxB亞型。

ABO血型系統(tǒng)；ABO正反定型不符；血型亞型；AxB亞型

人類紅細(xì)胞血型是屬于同種異型抗原，目前已發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)35個(gè)，ABO血型基因位點(diǎn)在第9號(hào)染色體上，一般不改變，但某些因疾病的原因如白血病或?qū)嶓w瘤等有可能致使ABO血型系統(tǒng)抗原減弱，此種減弱一般是暫時(shí)性，隨著疾病的緩解逐漸恢復(fù)原來的血型。ABO血型的準(zhǔn)確鑒定十分重要，血型錯(cuò)誤可影響輸血工作，ABO血型鑒定錯(cuò)誤是引起溶血性輸血反應(yīng)的最主要原因，嚴(yán)重可危及患者生命。在血型鑒定中，ABO亞型常導(dǎo)致血型錯(cuò)判，交叉配血不合[1]。

1　資料與方法

1.1一般資料孕婦孕39周，肝功能、腎功能檢查均正常，梅毒、表面抗原、丙肝抗體、艾滋病均陰性，因貧血，血色素76 g/L來我院生產(chǎn)。在生產(chǎn)前備血，空腹抽取靜脈血2 ml,EDTA抗凝。

1.2試劑與儀器ABO、RhD血型微柱凝膠正反定型檢測(cè)卡(單克隆抗體)、ABO反定型紅細(xì)胞、血型鑒定質(zhì)控品，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，所有試劑均在有效期內(nèi)，試劑專用血型血清學(xué)離心機(jī)，免疫微柱孵育器。實(shí)驗(yàn)前所有正反定型檢測(cè)卡，試管法正反定型試劑均用質(zhì)控品做質(zhì)控，相差不到1+。

1.3方法

1.3.1血型鑒定

1.3.2微柱凝膠法單克隆抗體，經(jīng)典試管法進(jìn)行ABO正反定型：微柱凝膠卡法，采集患者的靜脈離心，血制備成0.8%懸液紅細(xì)胞和血清標(biāo)本。取微柱凝膠正反定型試劑卡，將受檢者紅細(xì)胞懸液按每管50 μl加入，將受檢者血清每管50 μl加入微管中，再將反定型試劑A1、B細(xì)胞分別加入微管中，即刻使用專用離心機(jī)離心，取出判定結(jié)果，同時(shí)做自身對(duì)照。分別置于室溫、4℃、37℃，用經(jīng)典試管法，按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)操作和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷[2]。

1.3.3唾液HAB血型物質(zhì)測(cè)定：按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)操作和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷[2]。

1.3.4吸收放散試驗(yàn)：按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)操作和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷[2]。

2　結(jié)果

2.1ABO正反定型使用長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司和江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司ABO正反定型凝膠卡，在室溫、4℃、37℃不同溫度下正定型抗A最高是1+；抗B：4+；抗A+B：4+，反定型在室溫、4℃、37℃不同的溫度下A1c：1+；Bc：0；Oc：0，自身對(duì)照：0。

2.2試管法鑒定使用上海血液生物醫(yī)藥公司、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所不同試劑公司的血型試劑，在室溫、4℃、37℃不同的溫度下，正定型抗-A最高1+，抗-B ：4+，抗-A+B ：4+，抗-A1最高：1+，抗-H： 4+, 反定型結(jié)果：A1抗原最高：2+，B抗原：0，O抗原:0，自身對(duì)照:0，使用上海血液生物醫(yī)藥公司和長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司的試劑反定型結(jié)果相同見，符合AxB亞型特點(diǎn)，確定標(biāo)本為AxB亞型，進(jìn)一步做基因?qū)W實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

2.3吸收放散試驗(yàn)受檢者放散使用立即離心和二次離心結(jié)果2+。

3　討論

臨床輸血首先要避免亞型漏檢或?qū)喰驼`判，ABO血型系統(tǒng)的抗原除經(jīng)典的A、B、O以外，還包括多種亞型血型，比如有A2、Ax、CisAB、Ael、Bm等，ABO亞型共同的血清學(xué)特點(diǎn)是A和B亞型紅細(xì)胞與A型和B型紅細(xì)胞主要區(qū)別表現(xiàn)在紅細(xì)胞膜上抗原決定簇?cái)?shù)量上，有時(shí)肉眼幾乎看不到凝集，不規(guī)則抗體可以出現(xiàn)同時(shí)存在不規(guī)則抗-A1，抗B1， 判斷ABO亞型主要觀察與H抗體的凝集會(huì)增強(qiáng)[3]，可增加抗-AB、抗-H、抗-A1試劑做正定型提供更多的分析數(shù)據(jù)[4]，亞型吸收能力低于正常紅細(xì)胞，但放散能力強(qiáng)于正常紅細(xì)胞，唾液中的型物質(zhì)以能否檢測(cè)到A或B物質(zhì)等來確定，亞型是造成ABO血型正反定型不符的主要原因之一[5]。臨床實(shí)驗(yàn)室易將A型，B型亞型誤認(rèn)為O型，AB亞型誤認(rèn)為A型或B型，給輸血科的血型鑒定帶來一定困難[6]。若出現(xiàn)正反定型結(jié)果不符，正定型小于4+，正反定型相差2+ 以上時(shí)，要進(jìn)行血型鑒定分析，正確判定ABO血型。

A1型紅細(xì)胞上有A和A1兩種抗原，A2細(xì)胞上僅有A抗原。臨床實(shí)驗(yàn)室易將AxB誤定為B型，為確保安全輸血安全，應(yīng)使用ABO正反定型方法進(jìn)行鑒定。AxB型血清中的抗-A1抗體較弱，有時(shí)是冷凝集。AxB亞型要與亞型B(A)型相區(qū)別，AxB型中A1細(xì)胞凝集較弱，有時(shí)需要4℃加強(qiáng)。B(A)型的H抗原增強(qiáng)明顯成3+以上，反定型與A1細(xì)胞凝集強(qiáng)于3+以上，部分和A2細(xì)胞凝集。另外也要與CisAB做一區(qū)別，兩者的遺傳方式相似，與抗A血清反應(yīng)較強(qiáng)，與自然發(fā)生的人血清抗B弱凝集或不凝集，血清中有弱的抗-B。

臨床上常用的單克隆ABO血型試劑不能全部識(shí)別略有變化的ABO血型，造成不同試劑公司的單克隆試劑ABO血型抗原系統(tǒng)表位A或B抗原檢測(cè)結(jié)果上的差異和漏檢，尤其對(duì)亞型，所以發(fā)現(xiàn)正反定型不符時(shí)要使用不同試劑公司的試劑做重復(fù)試驗(yàn)，并且對(duì)不同的試劑公司的試劑做質(zhì)控對(duì)照。除新生兒標(biāo)本外，必須加用抗抗-AB血清，抗-H血清，抗-A1對(duì)鑒定和區(qū)分亞型有一定的意義，正反血型定型不一致的標(biāo)本還可以做吸收放散試驗(yàn)來證實(shí)標(biāo)本是否含有弱的抗-A和弱的抗-B，做吸收放散試驗(yàn)時(shí)最好利用人源性抗-A(B)或3份以上的單克隆抗體試劑的混合后進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行唾液中血型物質(zhì)的測(cè)定，用以輔助判斷血型。

發(fā)現(xiàn)ABO正反血型鑒定不相符時(shí)，首先排除操作上的錯(cuò)誤，其次是受檢者是否是年齡<1或>60，患者的丙種球蛋白是否減低[7]，患者血清與O型普篩紅細(xì)胞的反應(yīng)與試劑紅細(xì)胞是否一樣，患者是否是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌，支原體肺炎，自身免疫性溶血，肝硬化等[8]，混合視野反應(yīng)是否是輸血后標(biāo)本等來自于標(biāo)本本身原因后進(jìn)行血型試驗(yàn)，方法應(yīng)選擇經(jīng)典的試管法，在4℃、37℃和室溫下進(jìn)行試驗(yàn)，一般在4℃和室溫條件下活性較強(qiáng)，37℃時(shí)活性較弱,唾液HAB血型物質(zhì)測(cè)定，吸收放散試驗(yàn)等方法綜合評(píng)價(jià)[9]，同時(shí)有條件可用分子生物基因?qū)W實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

本實(shí)驗(yàn)使用不同試劑公司的試劑和不同方法的結(jié)果是：用微柱凝膠單克隆抗體卡式法，正定型：與抗-A血清反應(yīng)最高1+，與抗-B血清反應(yīng)均顯示正常預(yù)測(cè)的4+，與抗-A+B血清反應(yīng)均為4+，反定型樣本血清與A1細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度最高為2+；與B細(xì)胞反應(yīng)均為不凝集，正反定型不符。

本實(shí)驗(yàn)在不同溫度下檢測(cè)，按照試管法操作程序鑒定和判斷標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果：鏡下觀察正定與抗-A反應(yīng)出現(xiàn)微弱凝集最高1+，抗-B側(cè)出現(xiàn)4+，與抗-A+B血清反應(yīng)均是4+，與抗-H血清反應(yīng)4+，反定型標(biāo)本血清與A1細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度最高為2+；與B細(xì)胞反應(yīng)不凝集，同時(shí)用人原A1紅細(xì)胞和B紅細(xì)胞試劑做反定型檢測(cè)，正反定型比較出現(xiàn)異常，反定型與正定型血型不符。

經(jīng)微柱凝膠單克隆抗體卡式法、經(jīng)典試管法、唾液HAB血型物質(zhì)測(cè)定是分泌型，含有B物質(zhì)，H物質(zhì)，無A物質(zhì)，吸收放散試驗(yàn)2+，強(qiáng)于正常人，唾液HAB血型物質(zhì)測(cè)定、吸收放散試驗(yàn)具有AxB血清學(xué)特點(diǎn)所以鑒定為極其稀有的AxB血型，經(jīng)上級(jí)血型實(shí)驗(yàn)室用分子生物基因?qū)W實(shí)驗(yàn)也得到證實(shí)，提示為AxB亞型。

AxB亞型中有抗-A1抗體產(chǎn)生的可能，在接受血液輸注應(yīng)選O洗滌紅細(xì)胞和AB型血漿[10]。AxB亞型一般不能作為獻(xiàn)血員，易造成輸血反應(yīng)，對(duì)于女性獻(xiàn)血有必要開展血清意外抗體篩查，以避免臨床輸血配血時(shí)次側(cè)配血不合[11]。輸血科在血型鑒定時(shí)應(yīng)常規(guī)使用正反定型鑒定，正反定型不符，結(jié)合臨床疾病和檢驗(yàn)結(jié)果綜合分析，采用多種方法進(jìn)行鑒定，綜合分析確定血型，避免亞型漏檢，提高安全輸血意識(shí)。

1莊文化，莊彩梅.CisAB與AxB血型個(gè)案檢測(cè)分析.臨床輸血與檢驗(yàn)雜志，2014,10:432.

2衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006.

3王北元，揚(yáng)帆，焦立新.AxB型引起血型正反不符1例.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志,2010,12:15.

4劉郁.邢臺(tái)地區(qū)無償獻(xiàn)血者ABO血型分布及正反定型不符調(diào)查分析.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,29:12-14.

5張惠蓮，楊婷，于洋.ABO血型正反定型不一致原因分析.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32:9.

6張欽輝主編.臨床輸血學(xué).第1版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2000.82.

7李延偉，田慶華.因低丙種球蛋白血癥造成ABO血型正反定型不符1例.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014，11：98-99.

8馬硯敏，趙鳳蓮.33例ABO正反定型不符的原因分析及解決方法.中國(guó)醫(yī)藥指南,2013,11:582-583.

9李育，謝一鳴.受血者ABO血型正反定型不符循證分析.浙江醫(yī)學(xué),2012,34:1191-1193.

10王振芳.AxB血型的檢測(cè)及臨床意義.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,23：1040-1042.

11劉福昌,許泰玲,姜珍一,等.獻(xiàn)血者ABO血型正反定型不符18例分析.中國(guó)輸血雜志,2014,27:393-395.

2015-10-21)

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.15.050

050051河北省石家莊市婦幼保健院

R 457.11

A

1002-7386(2016)15-2399-02