孫麗麗

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 黑龍江哈爾病 150000

試析對大黃中土大黃苷檢測方法的改進(jìn)

孫麗麗

哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠 黑龍江哈爾病 150000

目的：在大黃類中成藥中不含有與土大黃苷物質(zhì)。本文主要通過HPLC法來對四類含有大黃的中成藥進(jìn)行鑒別與測定，研究其中土大黃苷的含量，分析中成藥中大黃的質(zhì)量。方法：利用Lichrospher C18色譜柱，乙腈-甲醇-水作為流動相，檢測到波長是320nm，流速是 1.0mL·min-1，并且采用外標(biāo)法進(jìn)行定量性質(zhì)的測定。結(jié)果：當(dāng)土大黃苷保持在 2.62～261.6μg·mL-1的范圍中時(shí)，和峰面積之間會形成良好的線性關(guān)系；平均回收率是96.30%。結(jié)論：本次實(shí)驗(yàn)采用的方法簡單、準(zhǔn)確，通用功能較強(qiáng)，具備較高的靈敏度。在鑒別與測定大黃的中成藥中土大黃苷時(shí)，值得推廣應(yīng)用。

大黃；土大黃苷；檢測；方法

大黃屬于一種應(yīng)用范圍較廣的中藥，其功能包括瀉熱通腸、化瘀通經(jīng)、涼血解毒。不少普遍的中藥處方中都包含大黃。在相關(guān)的藥物書籍中，提出大黃主要有三種，分別是蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃以及藥用大黃的干燥根及根莖。另外，同類的植物中有一種土大黃，人們經(jīng)常分不清土大黃與正品大黃。二者在化學(xué)構(gòu)成與功效方面有不同之處，在價(jià)格方面也有很大的差異。本文主要分析了大黃中土大黃苷檢測方法的改進(jìn)，具體內(nèi)容如下。

一、儀器與試劑

1、METTLER AE-240電子天平，Waters 2690液相色譜儀系統(tǒng)，Millennium32色譜數(shù)據(jù)處理軟件。土大黃苷對照品[-9國藥品生物制品檢定所，批號：794—200103(供鑒別用)]；土大黃(成都康弘制藥有限公司，由無錫藥品檢驗(yàn)所中藥室鑒定)；炎可寧片(批號：20080307361，廠家1)；炎可寧片(批號：050801，廠家2)；一清顆粒(批號：20080401，廠家3)；一清顆粒(批號：070702，廠家4)；清火片(批號：060901，廠家5)；清火片(批號：20070307，廠家6)；麻仁潤腸丸(批號：061001，廠家7)；麻仁潤腸丸(批號：8013108，廠家 8)。乙腈、甲醇為色譜醇，水為二次純化水，其它試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

1、色譜條件

色譜柱為Lichrospher C18(4．6ram×250mm，5μm)，以乙腈一甲醇一水(7：30：63)為流動相，檢測波長為320nm，流速為1.0m L·min-1，進(jìn)樣量為10μL。

2、溶劑的準(zhǔn)備

⑴對照試液的準(zhǔn)備

采用精密的儀器量取 12mg的土大黃苷，加入到容量為200mL的量杯中，再添加濃度為50%的甲醇，進(jìn)行均勻的攪拌后，稀釋到固定刻度，作為對照試液。

⑵供試品試液的準(zhǔn)備

采用精密的儀器量取0.1g的土大黃，加入25mL的甲醇。進(jìn)行加熱與回流，一小時(shí)后進(jìn)行過濾，量取10mL的過濾液，加入25mL的水，作為供試品試液。

⑶炎可寧片

選取10粒炎可寧片，去除糖衣，研磨成細(xì)末。然后量取0.2g左右的炎可寧片藥物，加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進(jìn)行加熱與回流，一小時(shí)后進(jìn)行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

⑷一清顆粒

選取0.5g左右的一清顆粒，加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進(jìn)行加熱與回流，一小時(shí)后進(jìn)行過濾。量取10mL的過濾液，加入25mL的水，作為供試品試液。

⑸清火片

選取10片清火片，研磨成細(xì)末，然后量取0.2g加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進(jìn)行加熱與回流，一小時(shí)后進(jìn)行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

⑹麻仁潤腸丸

選取10丸麻仁潤腸丸，剪碎后，量取0.1g加入到錐形瓶內(nèi)。然后添加25mL的甲醇，進(jìn)行加熱與回流，一小時(shí)后進(jìn)行過濾，量取10mL的過濾液。然后加入25mL的水，作為供試品試液。

3、專屬性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，土大黃苷峰形良好，保留時(shí)間分別為10．32min，樣品中雜質(zhì)不干擾樣品測定?？梢钥闯觯链簏S藥材和廠家l的炎可寧片(廠家3的清火片，廠家5的一清顆粒，廠家 7的麻仁潤腸丸)供試品溶液在土大黃苷對照品相應(yīng)保留時(shí)間處有峰出現(xiàn)，通過二極管陣列進(jìn)一步檢測，土大黃苷對照品和廠家1的炎可寧片(廠家3的清火片，廠家5的一清顆粒，廠家7的麻仁潤腸丸)供試品溶液主峰的紫外光譜圖一致。以上 4個(gè)供試品送江蘇省藥品檢驗(yàn)所進(jìn)行質(zhì)譜分析鑒定，確認(rèn)該峰為土大黃苷峰。廠家2的炎可寧片(廠家4的清火片，廠家6的一清顆粒，廠家8的麻仁潤腸丸)供試品溶液在10.32min附近沒有吸收峰。

三、討論

在此次實(shí)驗(yàn)過程中，選用的有甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲醇-水，甲醇為0.05mol·L-1磷酸二氫鉀系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在運(yùn)用甲醇-乙腈-水系統(tǒng)的過程中，土大黃苷的峰形較好，而且供試液的主峰可以和雜質(zhì)峰進(jìn)行基線分割。因此選取乙腈-甲醇-水系統(tǒng)作為最佳流動相。由于二苯乙烯類化合物能夠溶解在甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，同一批號的樣品應(yīng)該依次采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、濃度為80%的乙醇。結(jié)果顯示，當(dāng)提取溶液是甲醇時(shí)，對于土大黃苷提取的比較完整，而且其中含有的雜質(zhì)量比較小。因此，選取甲醇當(dāng)做提取試液。但是，甲醇作為溶液時(shí)，土大黃苷的峰形前延比較嚴(yán)重，因此在處理樣品時(shí)，應(yīng)該適當(dāng)?shù)挠盟♂?，以此調(diào)整峰形。

在提取時(shí)間方面，考察了加熱回流0.5、1、1.5、2h，結(jié)果表明加熱回流1h可將土大黃苷提取完全。分析炎可寧片、清火片、一清顆粒和麻仁潤腸丸4種中成藥的處方和功能主治，大黃用量均比較大，都具有清火瀉下的作用。而土大黃幾乎沒有清火瀉下的作用，且臨床副作用較大，病人在不知情的狀況下長期服用，容易貽誤病情，造成不良反應(yīng)，危害較大。在后續(xù)檢驗(yàn)過程中，在多種含大黃中成藥中均發(fā)現(xiàn)使用土大黃代替大黃入藥的情況，具有一定的普遍性。因此筆者建議應(yīng)盡快修訂大黃[檢查]項(xiàng)下土大黃苷檢測方法，并建立～種通用性好的HPLC補(bǔ)充檢驗(yàn)方法或在具體品種[檢查]項(xiàng)下規(guī)定土大黃檢查，監(jiān)控中成藥中的土大黃苷，為檢測含大黃中成藥中是否使用土大黃代替大黃投料提供檢驗(yàn)依據(jù)。

土大黃苷(rhaponticin, rhaponitin 或poniticin)分子，化學(xué)名為3-羥基-5-[(1E)-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)乙烯基]苯基-β-D-葡萄糖苷，為二苯乙烯的衍生物，屬于茋苷。藥典收載的大黃項(xiàng)下規(guī)定不可檢出土大黃苷。但近期研究表 明土大黃苷具有抗菌、改善微循環(huán)、降血脂、降血糖、抗腫瘤、抑制過敏反應(yīng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫防御系統(tǒng)、抗 血栓及抗氧化等作用。藥典規(guī)定藥用大黃中不得檢出土大黃苷，但隨 著提取分離以及分析技術(shù)的發(fā)展在眾多大黃屬植 物中分離或檢測出土大黃苷。研究表明：土大黃苷 及其代謝產(chǎn)物具有多種藥理活性，其中土大黃苷可能作為PPAR-γ的激動劑以降低血糖濃度達(dá)到治療糖尿病的作用且作用效果和噻唑烷二酮類藥物吡咯列酮相當(dāng)尤其引人注目，土大黃苷很可能成為從天然產(chǎn)物中開發(fā)高效、低不良反應(yīng)的糖尿病藥物。本文建立了HPLC法鑒別大黃中土大黃苷，同時(shí)采用本法對4種含大黃中成藥中土大黃苷進(jìn)行檢查，確證其中是否以土大黃代替大黃投料。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，該方法通用性好，簡便準(zhǔn)確，在4種含大黃中成藥的檢測中均無雜質(zhì)干擾，方法可行。該HPLC法檢測土大黃苷優(yōu)于藥典紙色譜法，更具有專屬性，準(zhǔn)確性，同時(shí)還能應(yīng)用于含大黃中成藥的監(jiān)控。

[1]徐穎，郭增軍，譚林．土大黃苷研究進(jìn)展[J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26(7)：549—550．

[2]陳志強(qiáng)，李貞景，傅志良，等．HPLC測定河套大黃中土大黃苷的含量[J]．分析試驗(yàn)室，2009，28(1)：101—102．

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1672-5018（2016）10-273-01