楊紹臻　杜國盛

解放軍第三〇九醫(yī)院器官移植研究所肝膽外科，北京　100091

調(diào)節(jié)性B細胞與腫瘤免疫△

楊紹臻杜國盛#

解放軍第三〇九醫(yī)院器官移植研究所肝膽外科，北京100091

調(diào)節(jié)性B細胞（Breg）是繼調(diào)節(jié)性T細胞后免疫領(lǐng)域研究的新熱點，Breg是通過白細胞介素（IL）-10、IL-35，轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β產(chǎn)生免疫抑制作用的一類細胞。Breg通過阻止致病性T細胞和其他促炎性淋巴細胞擴增，從而發(fā)揮抑制免疫病理損傷作用。研究已證實，Breg在炎癥、自身免疫性疾病以及癌癥進展、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后中發(fā)揮一定作用。本文就Breg與癌癥的關(guān)系及其研究進展作一綜述。

癌癥；B細胞；調(diào)節(jié)性B細胞；腫瘤免疫

B細胞作為產(chǎn)生免疫球蛋白漿細胞的祖細胞，可以將抗原呈遞給T細胞、iNKT細胞，并且產(chǎn)生Th1和Th2細胞因子以促進其他淋巴細胞的激活和分化。研究表明，在某些環(huán)境中，有一類特殊的具有調(diào)節(jié)功能的B細胞亞群對控制炎癥進展發(fā)揮一定作用，這一類B細胞被稱作調(diào)節(jié)性B細胞（regulatory B cell，Breg）［1-2］。Breg可通過產(chǎn)生白細胞介素（IL）-10和（或）IL-35，轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β等細胞因子，進而產(chǎn)生免疫抑制作用［3-4］。將產(chǎn)生IL-10的Breg稱為Br1細胞，產(chǎn)生TGF-1的Breg稱為Br3細胞［5-6］。

早在1970年Katz等［7］提出假說，認為B細胞可以通過產(chǎn)生抗體來阻止超敏反應(yīng)發(fā)生。隨后在20世紀80年代中期，有研究報道B細胞與抗原特異性抑制性T細胞產(chǎn)生有關(guān)。1996年，Wolf等［8］在B細胞缺陷小鼠（μMT）和野生型小鼠（WT）中分別誘導(dǎo)實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）以建立其小鼠模型時發(fā)現(xiàn)，前者會產(chǎn)生疾病進展傾向，而后者有部分自愈傾向。這項研究表明小鼠體內(nèi)可能存在對炎癥具有抑制性作用的B細胞亞群［8］。1997年，M izoguchi等［9］在炎性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）小鼠模型中證明Breg存在，并首次將這些具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細胞定義為“調(diào)節(jié)性B細胞”。

1　Breg的起源與分化

這種具有免疫抑制或調(diào)節(jié)能力的B細胞已經(jīng)被證實多年，但近幾年Breg的概念才被明確定義為免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的一個細胞系［10-11］。哺乳動物B細胞分為兩個亞群，分別為B1和B2細胞亞群。B1細胞主要由胎兒前體細胞產(chǎn)生，可分為B1-a（CD11b+CD5+）細胞和B1-b（CD11b+CD5-）細胞，主要集中于胸膜、腹膜及腸黏膜組織；B2細胞主要由骨髓源性前體細胞產(chǎn)生，主要集中于次級淋巴器官。B2細胞分化為過渡1型（T1，CD24hiCD21－B220+）和過渡2型（T2，CD24hiCD21+B220+）B細胞，其中過渡2型B細胞又分化為存在于脾臟和淋巴結(jié)中的成熟濾泡B細胞（FOB，CD24hiCD21+B220+）或者僅存在于脾臟中的邊緣區(qū)B細胞（MZB，CD1dhiCD21hi），邊緣區(qū)B細胞前體為邊緣區(qū)前B細胞（T2-MZP，CD1dhiCD23+）［12］。B1-a、成熟濾泡B細胞、邊緣區(qū)B細胞和邊緣區(qū)前B細胞可產(chǎn)生IL-10，均具有潛在調(diào)節(jié)功能。Breg可分為由多克隆刺激誘導(dǎo)IL-10生成的“固有型”和抗原特異性IL-10生成的“獲得型”。其中，“固有型”Breg來自MZB細胞和B1-a細胞，“獲得型”Breg來自FOB細胞。MZB和B1-a細胞在脂多糖（LPS）和CpG等Toll樣受體（TLR）激動劑作用下可分化為“固有型”Breg；FOB細胞BCR與自身抗原和CD40/CD40L相互作用分化為“獲得型”Breg。

2　Breg亞群與表型

目前研究證實已有多種具有相同表型與效應(yīng)功能的Breg亞群。但這些Breg亞群的區(qū)別在于以不同Breg細胞系存在還是對免疫環(huán)境的改變不同，目前對此仍無定論。

2.1小鼠Breg亞群

在小鼠中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種能產(chǎn)生IL-10的Breg，它們包括T2-MZP細胞、MZ細胞、B10細胞、漿細胞、Tim-1+B細胞。

在脾臟中發(fā)現(xiàn)的CD19+、CD21+、CD23+、CD24+、IgM+、IgD+B細胞被稱作T2-MZP細胞，在體外實驗中被證實可抑制T細胞激活，并且在體內(nèi)可以通過過繼性轉(zhuǎn)移抑制關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病發(fā)生［2］。CD5+CD1dhiB細胞的過繼性轉(zhuǎn)移被稱為B10細胞，有研究表明B10細胞可以控制超敏反應(yīng)、腦脊髓炎（EAE）和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病發(fā)生［1］。T2-MZP細胞與B10細胞間存在重疊的表型：它們共同表達CD19、CD21、CD24和CD1d，并且都可以從小鼠脾臟B細胞中分離出來。

在其他自身免疫模型中也發(fā)現(xiàn)了部分Breg表型，經(jīng)結(jié)腸的TCRα-/-模型研究推測CD1d、IgM、CD21和CD23表達與Breg有關(guān)，但根據(jù)這種表型提取的B細胞并未在抑制性功能分析中得到直接驗證。在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥中，MZ細胞、漿細胞也被認為有抑制性功能［13］。其中MZ細胞表型為CD19+CD21hiCD23-［14-16］，漿細胞表型為CD138+MHC-11loB220+［17-18］，它們均被發(fā)現(xiàn)于脾細胞中。

近期有關(guān)移植方面的研究提供了小鼠中另一種Breg表型［19］。對小鼠胰島移植接受者，通過T細胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白1（Tim-1）相關(guān)抗體治療可導(dǎo)致Tim-1+B細胞擴增，這些Tim-1+B細胞表型為Tim-1+CD19+，發(fā)現(xiàn)于小鼠脾臟中［18-19］。

2.2人類Breg亞群

目前，對人類Breg亞群的研究尚處于初期階段。已被認知的Breg亞群有CD19+CD24hiCD38hi細胞、CD19+CD24hiCD27+細胞、CD24hiCD27+細胞、CD19+CD25hiCD71hi細胞。

有報道證實，從健康人體外周血提取的CD19+CD24hiCD38hi細胞可以在離體試驗中抑制T細胞活化，這主要是由CD40驅(qū)動，IL-10調(diào)節(jié)的抑制作用所致。此外，CD19+CD24hiCD38hi細胞與從多發(fā)性硬化癥患者中分離的CD27-B細胞有共同表型的CD1d和IgD［20］。

人類外周血中CD24hiCD27+細胞可隨LPS刺激產(chǎn)生高水平的IL-10，它與小鼠中B10細胞假設(shè)結(jié)果相似。此外該細胞可通過單核細胞抑制TNF-α產(chǎn)生發(fā)揮其抑制性作用［21-22］。

3　Breg生物學(xué)功能

Breg主要通過產(chǎn)生IL-10、IL-35、轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β，抑制促炎性淋巴細胞分化，以發(fā)揮其抑制性作用。有研究發(fā)現(xiàn)［23-24］，在缺乏B細胞的μMT小鼠中，Breg也相應(yīng)減少，Carter等［25-26］對此深入研究后分析原因為IL-10大量缺乏。Breg還可通過抑制樹突細胞分泌促炎性因子來間接抑制Th1、Th17的分化［27-28］。Breg除產(chǎn)生IL-10外，還可產(chǎn)生TGF-β和IL-35，在TGF-β作用下，LPS活化的B細胞可引起CD4+效應(yīng)T細胞凋亡［29］以及CD8+效應(yīng)T細胞失能［30］，有關(guān)研究分析其原因與Breg可產(chǎn)生IL-35密切相關(guān)。在沙門菌模型中，B細胞缺乏IL-35會導(dǎo)致Th1細胞反應(yīng)增強以及脾臟中巨噬細胞數(shù)量增多［18］。另一項實驗表明，IL-35激活的B細胞可以產(chǎn)生IL-35，并且可以通過過繼轉(zhuǎn)移抑制實驗性葡萄膜炎的發(fā)生［31］。Breg對維持人體內(nèi)iNKT細胞平衡亦發(fā)揮關(guān)鍵性作用［32］。

4　Breg在腫瘤中的作用機制

Breg作為B細胞的獨立亞群主要在自身免疫性和炎癥疾病中發(fā)揮作用［33］。鑒于B細胞的腫瘤促進和Breg免疫調(diào)節(jié)作用，Breg在腫瘤中的作用為目前研究重點。對此前期研究闡述了T細胞的腫瘤抑制作用，這種作用由IL-10調(diào)控，提示Breg與腫瘤緊密相關(guān)［34］。

有研究發(fā)現(xiàn)IL-10可以抑制Th1和Th2表達［35］。另外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)Breg以被激活的漿細胞形式存在時，仍可分泌抗體。免疫球蛋白也可以通過調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)來促進腫瘤發(fā)生［36-37］。

在小鼠乳腺癌4T1模型中，CD19+B220+CD25+B2淋巴細胞作為Breg亞群之一，對乳腺癌細胞肺部轉(zhuǎn)移發(fā)揮促進作用［38］。由于CD25于所有激活的T細胞、B細胞中高表達，尤其在調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）中高表達，因此將其定義為新型Breg亞群——tBreg。tBreg的比例在外周血和外周淋巴器官中表現(xiàn)增多。4T1乳腺癌細胞可以抑制未激活和預(yù)激活的T細胞增生。有研究證實，tBreg在人體內(nèi)也有相似作用［39］。tBreg可高表達TGF-β、CD40、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ分子促進Foxp3+Treg產(chǎn)生，CD4+T細胞向Treg轉(zhuǎn)變依賴于T細胞、B細胞和TGF-β的分泌，在注射4T1細胞的BALBc小鼠腫瘤細胞肺轉(zhuǎn)移過程中，Treg可抑制NK細胞的抗腫瘤作用［40］。綜上所述，tBreg可通過分泌TGF-β促進CD4+T細胞向Treg轉(zhuǎn)變，反之抑制T細胞增生將會增加腫瘤轉(zhuǎn)移率［39，41］。與此同時，腫瘤細胞也會促進B細胞轉(zhuǎn)化為Breg，因此當腫瘤細胞持續(xù)存在時，就會促進tBreg產(chǎn)生，并抑制抗腫瘤反應(yīng)［42-43］。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞可通過表達并且利用5-脂氧合酶代謝通路以促進tBreg生成［44］。5-脂氧合酶激活蛋白抑制劑的存在將會減少tBreg相關(guān)表型表達，如CD25、CD81、BAFFR和B7-H1以及STAT3磷酸化作用［44］。

用抗CD20去除B細胞可用來治療非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病，但一些患者對抗CD20治療抵抗并很快復(fù)發(fā)。近期研究顯示，Breg及其產(chǎn)物IL-10的存在可抑制其療效［45］。通過小鼠和人體實驗發(fā)現(xiàn)，tBreg低表達CD20，用抗CD20、去除B細胞后，tBreg所占細胞總數(shù)的比例亦相對增加［46］。在淋巴瘤的研究中，接受抗CD20治療并且隨后進行Breg過繼轉(zhuǎn)移的小鼠，會導(dǎo)致腫瘤負荷增加［45，47］。

在7，12-二甲基苯蒽/對苯二酸誘導(dǎo)鱗狀上皮細胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，于B細胞去除的小鼠中（Rag2-/-），腫瘤細胞增長減緩［48］，而予B細胞回輸后恢復(fù)。然而，在缺乏TNF-α的Rag2-/-小鼠中經(jīng)B細胞回輸后，腫瘤細胞增長仍維持不變。上述結(jié)果表明，Breg可促進腫瘤細胞數(shù)量增多且分泌的TNF-α可能會導(dǎo)致其在癌癥病灶中的產(chǎn)生和聚集。

5　展望

Breg的發(fā)現(xiàn)為B細胞的認知開辟了新的道路，Breg在自身免疫性疾病、炎性反應(yīng)和腫瘤中均發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中亦具有加速腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，然而其作用機制復(fù)雜，對此仍有待進一步研究，以便對腫瘤的臨床治療提供新方法，為腫瘤的臨床預(yù)防和治療開辟一個全新的領(lǐng)域。

［1］Dilillo DJ，Matsushita T，Tedder TF.B10 cells and regulatory B cells balance immune responses during in flammation，autoimmunity，and cancer［J］.Ann N Y Acad Sci，2010，1183:38-57.

［2］MauriC，BosmaA.Immune regulatory function of B cells［J］. Annu Rev Immunol，2012，30:221-241.

［3］Lee KM，Stott RT，Zhao G，et al.TGF-β-producing regulatory B cells induce regulatory T cells and promote transplantation tolerance［J］.Eur J Immunol，2014，44（6）:1728-1736.

［4］Manjarrez-Ordu?o N1，Quách TD，Sanz I.B cells and immunological tolerance［J］.J Invest Dermatol，2009，129（2）: 278-288.

［5］Yanaba K，Bouaziz JD，Matsushita T，et al.The development and function of regulatory B cells expressing IL-10（B10 cells）requires antigen receptor diversity and TLR signals［J］. JImmunol，2009，182（12）:7459-7472.

［6］Lee JH，Noh J，Noh G，et al.A llergen-specific transform ing grow th factor-β-producing CD19 CD5 regulatory B-cell（Br3）response in human late eczematous allergic reactions to cow'sm ilk［J］.InterferonCytokineRes，2011，31（5）:441-449.

［7］Katz SI，Parker D，Turk JL.B-cell suppression of delayed hypersensitivity reactions［J］.Nature，1974，251（5475）:550-551.

［8］Wolf SD，Dittel BN，Hardardottir F，et al.Experimental autoimmune encephalomyelitis induction in genetically B celldeficient m ice［J］.J Exp Med，1996，184（6）:2271-2278.

［9］M izoguchi A，M izoguchi E，Sm ith RN，et al.Suppressive role of B cells in chronic colitis of T cell receptor alpha mutant m ice［J］.J Exp Med，1997，186（10）:1749-1756.

［10］Mauri C，Ehrenstein MR.The‘short'history of regulatory B cells［J］.Trends Immunol，2008，29（1）:34-40.

［11］Sattler S，Lepm VDV，Hussaarts L，et al.Regulatory B-cell induction by helm inths:implications forallergic disease［J］. J Allergy Clin Immunol，2011，128（4）:733-739.

［12］Lund FE.Cytokine-producing B lymphocytes-key regulators of immunity［J］.Curr Opin Immunol，2008，20（3）:332-338.

［13］M izoguchi A，Bhan AK.A case for regulatory B cells［J］.J Immunol，2006，176（2）:705-710.

［14］Gray M，M iles K，Salter D，et al.Apoptotic cells protect mice from autoimmune in flammation by the induction of regulatory B cells［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2007，104（35）:14080-14085.

［15］Bankoti R，Gupta K，Levchenko A，et al.Marginal zone B cells regulate antigen-specific T cell responses during infection［J］.J Immunol，2012，188（8）:3961-3971.

［16］M iles K，Heaney J，Sibinska Z，et al.A tolerogenic role for Toll-like receptor 9 is revealed by B-cell interaction w ith DNA complexes expressed on apoptotic cells［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2012，109（3）:887-892.

［17］Neves P，Lampropoulou V，Calderon-Gomez E，et al.Signaling via the MyD88 adaptor protein in B cells suppresses protective immunity during Salmonella typhimurium infection［J］.Immunity，2010，33（5）:777-790.

［18］Shen P，Roch T，Lampropoulou V，et al.IL-35-producing B cells are critical regulators of immunity during autoimmune and infectious diseases［J］.Nature，2014，507（7492）: 366-370.

［19］Ding Q，Yeung M，Cam irand G，et al.Regulatory B cells are identified by expression of TIM-1 and can be induced through TIM-1 ligation to promote tolerance in m ice［J］.J Clin Invest，2011，121（9）:3645-3656.

［20］Blair PA，Norena LY，F(xiàn)lores-Borja F，et al.CD19（+）CD24（hi）CD38（hi）B cells exhibit regulatory capacity in healthy individuals but are functionally impaired in systemic lupus erythematosus patients［J］.Immunity，2010，32（1）:129-140.

［21］Horikawa M，Weimer ET，DiLillo DJ，et al.Regulatory B cell（B10 Cell）expansion during Listeria infection governs innate and cellular immune responses in mice［J］.J Immunol，2013，190（3）:1158-1168.

［22］Iwata Y，Matsushita T，Horikawa M，et al.Characterization ofa rare IL-10-competentB-cellsubsetinhumansthatparallelsmouseregulatory B10cells［J］.Blood，2011，117（2）:530-541.

［23］Sun JB，F(xiàn)lach CF，Czerkinsky C，et al.B lymphocytes promote expansion of regulatory T cells in oral tolerance: powerful induction by antigen coupled to cholera toxin B subunit［J］.J Immunol，2008，181（12）:8278-8287.

［24］Tadmor T，Zhang Y，Cho HM，et al.The absence of B lymphocytes reduces the number and function of T-regulatory cells and enhances the anti-tumor response in a murine tumor model［J］.Cancer Immunol Immunother，2011，60（5）: 609-619.

［25］Carter NA，Vasconcellos R，Rosser EC，et al.M ice lacking endogenous IL-10-producing regulatory B cellsdevelop exacerbated disease and present w ith an increased frequency of Th1/Th17 but a decrease in regulatory T cells［J］.J Immunol，2011，186（10）:5569-5579.

［26］CarterNA，RosserEC，MauriC.Interleukin-10produced by B cellsiscrucial for thesuppression of Th17/Th1 responses，induction of T regulatory type 1 cells and reduction of collagen-inducedarthritis［J］.ArthritisResTher，2012，14（1）:32.

［27］Matsumoto M，Baba A，Yokota T，et al.Interleukin-10-producing plasmablasts exert regulatory function in autoimmune inflammation［J］.Immunity，2014，41（6）:1040-1051.

［28］Sun CM，Deriaud E，Leclerc C，et al.Upon TLR9 signaling，CD5+B cells control the IL-12-dependent Th1-prim ing ca-pacity ofneonatalDCs［J］.Immunity，2005，22（4）:467-477.

［29］Tian J，Zekzer D，Hanssen L，et al.Lipopolysaccharide-activated B cells down-regulate Th1 immunity and prevent autoimmune diabetes in nonobese diabetic m ice［J］.Immunol，2001，167（2）:1081-1089.

［30］Parekh VV，Prasad DV，Banerjee PP，et al.B cells activated by lipopolysaccharide，butnotbyanti-Igandanti-CD40antibody，induceanergy in CD8+T cells:roleof TGF-beta1［J］. JImmunol，2003，170（12）:5897-5911.

［31］Wang RX，Yu CR，Dambuza IM，etal.Interleukin-35 induces regulatory B cells that suppress autoimmune disease［J］. Nat Med，2014，20（6）:633-641.

［32］Bosma A，Abdel-GadirA，Isenberg DA，etal.Lipid-antigen presentation by CD1d（+）B cells is essential for the maintenance of invariant natural killer T cells［J］.Immunity，2012，36（3）:477-490.

［33］Berthelot JM，Jam in C，Am rouche K，et al.Regulatory B cells play a key role in immune system balance［J］.Joint Bone Spine，2013，80（1）:18-22.

［34］Inoue S，Leitner WW，Golding B，et al.Inhibitory effects of B cells on antitumor immunity［J］.Cancer Res，2006，66（15）:7741-7747.

［35］Zhang Y，Eliav Y，Shin SU，et al.B lymphocyte inhibition of anti-tumor response depends on expansion of Treg but is independent of B-cell IL-10 secretion［J］.Cancer Immunology Immunotherapy，2013，62（1）:87-99.

［36］de Visser KE，Korets LV，Coussens LM.Denovo carcinogenesis promoted by chronic inflammation is B lymphocyte dependent［J］.Cancer Cell，2005，7（5）:411-423.

［37］Townsend MJ，Monroe JG，Chan AC.B-cell targeted therapies in human autoimmune diseases:an updated perspective［J］.Immunol Rev，2010，237（1）:264-283.

［38］Olkhanud PB，Damdinsuren B，Bodogai M，et al.Tumorevoked regulatory B cells promote breast cancer metastasis by converting resting CD4+T cells to T-regulatory cells［J］.Cancer Res，2011，71（10）:3505-3515.

［39］Olkhanud PB，Rochman Y，Bodogai M，et al.Thymic stromal lymphopoietin is a key mediator of breast cancer progression［J］.J Immunol，2011，186（10）:5656-5662.

［40］Lelekakis M，Moseley JM，Martin TJ，et al.A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone［J］.Clin Exp Metastasis，1999，17（2）:163-170.

［41］Olkhanud PB，Damdinsuren B，Bodogai M，et al.Tumorevoked regulatory B cells promote breast cancer metastasis by converting resting CD4+T cells to T-regulatory cells［J］. Cancer Res，2011，71（10）:3505-3515.

［42］Olkhanud PB，Baatar D，Bodogai M，et al.Breast cancer lung metastasis requires expression of chemokine receptor CCR4 and regulatory T cells［J］.Cancer Res，2009，69（14）: 5996-6004.

［43］Song GZ，Wang J，Wang P，et al.Horw itz.IL-2 is essential forTGF-βto convertnaiveCD4+CD25-cellsto CD25+Foxp3+regulatory T cells and for expansion of these cells［J］.J Immunol，2007，178（4）:2018-2027.

［44］Wejksza K，Lee-Chang C，Bodogai M，et al.Cancer-produced metabolites of 5-lipoxygenase induce tumor-evoked regulatory B cells via peroxisome proliferator-activated receptor α［J］.J Immunol，2013，190（6）:2575-2584.

［45］Horikawa M，M inard-Colin V，Matsushita T，et al.Regulatory B cell production of IL-10 inhibits lymphoma depletion during CD20 immunotherapy in m ice［J］.J Clin Invest，2011，121（11）:4268-4280.

［46］Bodogai M，Lee-Chang C，Wejksza K，et al.Anti-CD20 antibody promotes cancer escape via enrichment of tumorevoked regulatory B cells expressing low levels of CD20 and CD137L［J］.Cancer Res，2013，73（7）:2127-2138.

［47］M inard-Colin V，Xiu Y，Poe JC，et al.Lymphoma depletion during CD20 immunotherapy inm ice ismediated bymacrophage FcgammaRI，F(xiàn)cgammaRIII and FcgammaRIV［J］. Blood，2008，112（4）:1205-1213.

［48］Schioppa T，Moore R，Thompson RG，et al.B regulatory cellsand the tumor-promotingactionsof TNF-αduringsquamous carcinogenesis［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2011，108（26）:10662-10667.

R730.3

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.02

2015-08-08）

北京市科技計劃“首都臨床特色應(yīng)用研究”課題（Z111107058811008）

（corresponding author），郵箱：duguosheng@medmail.com.cn