黃燕玲，羅光偉，毛莉娜

(湖北省武漢市第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，武漢 430022)

痰熱清對(duì)COPD大鼠血漿LTC4水平的影響

黃燕玲，羅光偉，毛莉娜

(湖北省武漢市第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，武漢 430022)

目的:建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)大鼠模型，觀察痰熱清對(duì) COPD大鼠血漿LTC4水平的影響，探討痰熱清治療COPD的作用機(jī)制。方法:雄性Wistar大鼠30只按隨機(jī)數(shù)字表法分為COPD模型組、痰熱清治療組和正常對(duì)照組3組，各10只。除正常對(duì)照組，其余2組采用氣管注脂多糖加熏香煙方法制備COPD模型，采用熒光免疫試劑檢測(cè)法檢測(cè)所有組別大鼠血漿LTC4。結(jié)果:COPD模型組和痰熱清治療組大鼠血漿LTC4水平均顯著升高。與模型組比較，痰熱清治療組大鼠血漿LTC4水平均顯著升高顯著下降。結(jié)論:痰熱清注射液可能通過降低LTC4水平達(dá)到有效減輕COPD氣道炎癥，達(dá)到延緩COPD肺功能惡化和改善癥狀的效應(yīng)。

痰熱清;COPD;LTC4

1 動(dòng)物與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與受試藥物

SPF級(jí)健康Wistar大鼠30只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，購于武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(鄂)2003-0004)。按隨機(jī)數(shù)字表法分為COPD模型組、痰熱清治療組和正常對(duì)照組3組各10只，雌雄各半。痰熱清注射液組成:黃芩、山羊角、熊膽粉、連翹和金銀花等，上海凱寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字 Z20030054，10 ml/支，批號(hào)20131001)。

1.2 COPD模型原理及制備

1.2.1 COPD制備原理 脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)是細(xì)菌所具有的毒性物質(zhì)，大鼠氣管給予LPS，可出現(xiàn)咳嗽和口鼻分泌物增加的癥狀，加上吸入肺的煙霧進(jìn)一步刺激，可導(dǎo)致噴嚏頻發(fā)和呼吸喘促的典型COPD癥狀，該方法制備的COPD模型與臨床COPD患者的病理表征具有高度相似性。

1.2.2 COPD大鼠的制備 COPD模型組和痰熱清治療組大鼠氣管內(nèi)注入 LPS，加熏香煙法制備COPD模型。在d1和d14將大鼠全麻，于氣道注入溶于生理鹽水的 LPS200μL(1 mg/mL)，正常對(duì)照組大鼠注入生理鹽水。2 d～28 d(14 d除外)將COPD組大鼠置入自制被動(dòng)熏吸箱內(nèi)(50 cm×50 cm×50 cm)，注入香煙煙霧(牡丹牌香煙，上海卷煙廠生產(chǎn)，焦油、尼古丁和CO的含量分別為11.0 mg/支、0.9 mg/支和12 mg/支)，濃度5%，每次1 h，每日2次。正常組大鼠不進(jìn)行熏吸。

1.3 治療

COPD模型組和正常對(duì)照組尾靜脈iv.0.9%氯化鈉注射液，劑量2 mL/kg;痰熱清治療組尾靜脈iv.痰熱清注射液(上海凱寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z20030054，10 ml/支，批號(hào)20131001) 2 mL/kg，各組連續(xù)給藥14 d，15 d檢測(cè)大鼠呼吸功能、血漿LTC4和肺組織病理并進(jìn)行組間比較。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

共享是在一定的政策體制、激勵(lì)措施和安全保障的基礎(chǔ)上，在一定范圍內(nèi)的所有成員之間相互協(xié)作、共同使用彼此資源的一種機(jī)制。

1.4.1 大鼠呼吸功能測(cè)定 采用動(dòng)物肺功能測(cè)定系統(tǒng)檢測(cè)肺功能，即0.3 s用力呼氣容積占用力肺活量的比值(Forced expiratory volume in 0.3 second/Forced vital capacity，F(xiàn)EV0.3/FVC)、呼氣峰流速 (Peak expiratory flow，PEF)和肺順 應(yīng) 性(Dynamic lung complicance，Cydn)。采用10%水合氯醛(3 ml/kg)ip.麻醉大鼠，仰臥位固定于密閉體描箱內(nèi)操作臺(tái)，借助一端與插管連接呼吸，另一端與體描箱外的動(dòng)物呼吸機(jī)連接，大鼠動(dòng)物呼吸時(shí)，通過傳感器將動(dòng)物氣道內(nèi)壓力變化放大器并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，經(jīng)電腦處理后得到上述肺功能指標(biāo)。

1.4.2 酶免疫法檢測(cè)血漿LTC4 大鼠處死前經(jīng)頸總動(dòng)脈采血3 ml，立即注入預(yù)冷的含EDTA-Na2(1 mg/ml)試管中抗凝，4℃2000 rpm離心10 min，分離血漿，－70℃保存?zhèn)溆?。采?LTC4酶免疫檢測(cè)試劑盒(美國Cayman Chemical公司)測(cè)定大鼠血漿中LTC4水平，具體操作按說明書進(jìn)行。

1.4.3 肺組織標(biāo)本病理 夾閉左主支氣管，將硅膠管固定于右主支氣，檢測(cè)之前將血漿標(biāo)本用SepPack C18(美國Cayman Chemical公司)分離柱抽提，洗出液用N2吹干置入試管內(nèi)，右肺內(nèi)注射10%甲醛至右肺膨脹邊緣變銳，結(jié)扎右主支氣管，置于10%甲醛中固定、脫水、包埋、HE染色并行病理檢查。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水平，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各個(gè)組別大鼠治療前后的體質(zhì)量比較

實(shí)驗(yàn)期間，COPD模型組和痰熱清治療組大鼠的精神反應(yīng)、活動(dòng)和毛發(fā)較對(duì)照組差，并觀察有無大鼠死亡。

表1顯示，所有大鼠入組前體質(zhì)量無顯著差異，制備COPD模型并給予治療后，COPD模型組和痰熱清治療組大鼠體質(zhì)量增重緩慢，較正常對(duì)照組明顯降低(P＜0.05)，與COPD模型組比較，痰熱清治療組大鼠較重(t=2.3，P＜0.05)。

表1 各組大鼠治療前后的體質(zhì)量比較

2.2 各組大鼠治療后肺功能比較

表2顯示，制備為COPD后，COPD模型組和痰熱清治療組大鼠肺功能均有不同程度降低(P＜0.05)，與 COPD模型組比較，痰熱清治療組大鼠PEF明顯改善(P＜0.05)，F(xiàn)EV0.3/FVC和Cydn也有改善，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 各組大鼠血漿LTC4水平比較

表3顯示，與正常對(duì)照組比較，COPD模型組和痰熱清治療組大鼠血漿 LTC4水平顯著增高(P＜ 0.05)，與COPD模型組比較，痰熱清治療組大鼠血漿LTC4水平顯著降低(P＜0.05)。

2.4 各組大鼠組織形態(tài)學(xué)病理的變化

表2 各組大鼠治療后肺功能比較

表3 各組大鼠血漿LTC4水平比較

圖1顯示，正常對(duì)照組大鼠支氣管黏膜纖毛柱狀上皮排列整齊，黏膜與固有層細(xì)胞數(shù)較少，伴少量杯狀細(xì)胞，各級(jí)細(xì)支氣管壁的黏膜上皮完整，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡正常;COPD模型組大鼠氣管與支氣管黏膜大量上皮纖毛有不同程度脫落和倒伏，杯狀細(xì)胞明顯增多，各級(jí)細(xì)支氣管管壁周圍存在大量炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡壁明顯變薄和斷裂，肺泡腔明顯擴(kuò)大。與COPD模型組比較，痰熱清治療組氣道上皮細(xì)胞脫落和倒伏、炎癥細(xì)胞浸潤與杯狀細(xì)胞增多等現(xiàn)象均有不同程度的緩和。

圖1 肺支氣管病理學(xué)變化(深色箭頭為上皮，淺色箭頭為固有層 ×400)

3 討論

痰熱清注射液是由黃芩(Scutellariabaicalensis)、山羊 角 (Naemorhedusgorolhardwieke)、熊 膽 粉(GeorgiPulvis fellisursi)、連翹(Forsythia suspense)和金銀花(Lonicera japonica Thunb)等中藥材組成，基于中醫(yī)常用藥“雙黃連”和“清開靈”2種清熱解毒藥方改進(jìn)而成［7］。痰熱清注射液中黃芩為君藥，味苦性寒，歸肺、胃和大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、宣肺化痰和瀉火解毒之功;熊膽粉與山羊角同為臣藥，山羊角作為羚羊角的代用品，味咸、性寒，入心、肝經(jīng)，具有平肝息風(fēng)、清熱鎮(zhèn)驚和解毒明目之功;熊膽粉味苦、性寒，入心、肺和大腸經(jīng)，可清熱解毒、解驚化痰，與山羊角可加強(qiáng)全方的化痰解痙功效;連翹與金銀花合并為佐藥，連翹味苦微寒，與金銀花合并可助全方的清熱解毒和化痰宣肺功效，連翹建有佐藥功能，引諸藥入肺經(jīng)。全方具有清熱解毒和化痰鎮(zhèn)靜的作用［8-9］，可明顯緩解 COPD大鼠的臨床癥狀，改善COPD大鼠增重緩慢過程，改善 COPD大鼠的肺功能，進(jìn)一步證實(shí)痰熱清注射液在呼吸系統(tǒng)疾病防治上的臨床療效，在慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD)的治療上更具優(yōu)勢(shì)，緩解咳嗽咯痰喘息，提高患者的生活質(zhì)量［10］。

COPD以氣道、肺實(shí)質(zhì)與肺血管發(fā)生慢性炎癥為主要特征，發(fā)生發(fā)展與炎癥和氧化應(yīng)激密切相關(guān)［11］1260。氣道炎癥反復(fù)可造成患者氣道重構(gòu)和進(jìn)行性氣道阻塞。COPD發(fā)生時(shí)，肺不同部位的肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞與 T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多，被激活的炎癥細(xì)胞可釋放如白三烯(Leukotriene，LT)、白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)等多種介質(zhì)，這些介質(zhì)通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)和破壞肺的解剖結(jié)構(gòu)達(dá)到參與COPD發(fā)展進(jìn)程。其中白三烯是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，具有明顯的增強(qiáng)炎癥反應(yīng)、增加液體滲出、收縮支氣管平滑肌和促進(jìn)氣道平滑肌增殖的作用，白三烯包括5種介素，分別為白三烯A4、B4、C4、D4和E4，LTC4是研究較為多的介素，其中LTC4具有增加毛細(xì)靜脈的通透率、引起血管收縮和誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的作用［12］。肥大細(xì)胞、多型核白細(xì)胞與巨噬細(xì)胞均可合成 LTC4［13-14］。

痰熱清注射液緩解 COPD臨床癥狀，降低COPD大鼠血中LTC4水平均與痰熱清的物質(zhì)基礎(chǔ)有關(guān)。注射液中君藥黃芩本身具有抗菌、抗病毒、抗氧化及抗炎等多種藥理作用，可緩解COPD臨床癥狀［15］，如黃芩煎劑可抑制肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌，降低毛細(xì)血管通透性和抑制前列腺素生物合成，對(duì)免疫和心腦血管等系統(tǒng)有保護(hù)作用，尤其適用于對(duì)于老年COPD伴心腦并發(fā)癥患者［16］。黃芩含有黃芩苷和黃芩素等黃酮類化合物，黃芩苷可改善COPD的癥狀，與黃芩苷不僅可以直接抑制細(xì)胞內(nèi) LTC4的生物合成［17-18］，而且還與黃芩苷抑制5-脂氧酶有關(guān)，5-脂氧酶可調(diào)節(jié)鈣庫釋放，5-脂氧酶活性降低可阻止 Ca2+引起支氣管痙攣;黃芩素通過抗過敏降低支氣管腺體分泌及干擾LT代謝進(jìn)而改善 COPD癥狀，還可抑制磷酸二酯酶，升高肺cAMP水平拮抗Ca2+。熊膽含有熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸和膽酸，均具有鎮(zhèn)驚、抑菌、鎮(zhèn)咳、平喘和抗過敏效果，也可抑制金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌和流感嗜血桿菌等。山羊角的浸出液具有鎮(zhèn)痛、抗驚厥和解熱功效，同時(shí)還可增強(qiáng)動(dòng)物的耐缺氧能力和心臟收縮力。金銀花中的雙黃酮也可抑制LTC4產(chǎn)生，金銀花中的綠原酸及異綠原酸具有廣譜的抗菌作用;連翹中的連翹酚和揮發(fā)油具有抗炎和解熱作用［19-22］。

綜上所述，痰熱清注射液可能通過降低 LTC4水平達(dá)到有效減輕 COPD氣道炎癥，達(dá)到延緩COPD肺功能惡化和改善癥狀的效應(yīng)。

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:1006-3250(2016)03-0336-03

2015-06-19

黃燕玲(1972-)，女，湖北武漢人，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)本科，從事呼吸內(nèi)科的臨床與研究。