張小倩，王 方，魏漢林，王春麗△，韓向東

(1.華東理工大學(xué)，上海 200237;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203)

當(dāng)藥對(duì)功能性消化不良型Wistar大鼠胃腸激素表達(dá)的影響*

張小倩1，王 方1，魏漢林1，王春麗1△，韓向東2△

(1.華東理工大學(xué)，上海 200237;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203)

目的:探討當(dāng)藥提取物對(duì)功能性消化不良(FD)型Wistar大鼠胃腸激素水平的影響。方法:慢性束縛應(yīng)激法、過度疲勞法、飲食失節(jié)法和飲用鹽酸水溶液4種方法復(fù)合應(yīng)用復(fù)制FD大鼠模型，將造模成功的FD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對(duì)照組、多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組、當(dāng)藥低劑量組5組各10只，分別灌胃給藥14 d，每日1次，并于14 d后用ELISA法檢測(cè)大鼠血漿胃動(dòng)素、胃泌素和血清生長抑素的含量變化。結(jié)果:陽性對(duì)照組、當(dāng)藥高、中、低劑量組血漿MOT比模型組分別提高73.6%、69.6%、62.8%和45.8%，陽性對(duì)照組、當(dāng)藥高、中、低劑量組血漿 GAS比模型組分別提高 56.8%、44.8%、43.3%和27.8%;陽性對(duì)照組、當(dāng)藥高、中、低劑量血清生長抑素比模型組分別降低30.7%、41.9%、36.4%和18.7%。結(jié)論:當(dāng)藥提取物能明顯提高大鼠血漿胃動(dòng)素及胃泌素水平，降低大鼠的血清生長抑素水平，改善FD癥狀。

當(dāng)藥提取物;FD型Wistar大鼠;胃動(dòng)素;胃泌素;生長抑素

功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是臨床最常見的一種功能性胃腸病，其反復(fù)性和多樣性嚴(yán)重影響了患者的工作和生活，研究發(fā)現(xiàn)功能性消化不良的致病因素與胃腸道功能障礙密切相關(guān)［1-2］。當(dāng)藥為龍膽科植物瘤毛獐牙菜(Swertia pseudochinensis Hara)的干燥全草，具有清濕熱、健胃的作用［3］，目前國內(nèi)對(duì)當(dāng)藥的藥理學(xué)研究主要集中在當(dāng)藥的保肝作用［4-6］和日本當(dāng)藥的降血糖作用［7-8］。周大成等［9］研究了當(dāng)藥提取物對(duì) CCl4所致大鼠肝損傷的保護(hù)作用，結(jié)果顯示當(dāng)藥提取物能明顯減輕大鼠的肝臟病變和壞死，增加膽汁流量，對(duì)肝臟具有保護(hù)作用。難波恒雄等［10］研究發(fā)現(xiàn)，日本當(dāng)藥作為胃腸道用藥時(shí)，藥材中的黃嘌呤成分對(duì)鏈脲菌素型大鼠糖尿病具有明顯的降血糖作用，其降血糖作用為一般降血糖藥的1.5倍，且植物提取制劑安全無毒性，能廣泛用于各種高血糖疾病的治療。然而國內(nèi)對(duì)當(dāng)藥胃腸道作用的研究較少報(bào)道，國外也鮮有報(bào)道，基于此筆者采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)考察當(dāng)藥提取物對(duì)功能性消化不良大鼠胃腸激素表達(dá)的影響，從而評(píng)價(jià)其對(duì)胃腸道系統(tǒng)的作用，對(duì)開發(fā)新的胃腸道用藥具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康的清潔級(jí)雄性 Wistar大鼠100只，體質(zhì)量180～200 g，由北京維通利華公司提供(動(dòng)物許可證號(hào)SCXK京2012-0001)。

1.1.2 藥物與試劑 當(dāng)藥浸膏由上海雷允上藥房提供，上海龍華醫(yī)院制備;潘立酮(Sigma，批號(hào)11111003);胃動(dòng)素鼠抗體(Abcam，批號(hào) ab2799);胃泌素兔抗體(博奧森個(gè)，批號(hào)BS-1189R);生長抑素兔抗體(Abcam，批號(hào)ab183855);水合氯醛(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20140304);胃泌素試劑盒(RapidBio(RB)公司，批號(hào)09U5080);生長抑素試劑盒(RapidBio(RB)公司，批號(hào)09U6090)。

1.1.3 主要儀器 低溫冷凍離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司，型號(hào) TG-16M);渦旋振蕩器(上海醫(yī)大儀器廠，型號(hào)XW-80A);正置顯微鏡(OLYMPUS公司，型號(hào)CX41);酶標(biāo)儀(芬蘭雷勃科技有限公司，型號(hào)MK3)。

1.2 方法

1.2.1 造模與分組 采用慢性束縛應(yīng)激法、過度疲勞法、飲食失節(jié)法和飲用鹽酸水溶液4種方法復(fù)合應(yīng)用復(fù)制 FD大鼠模型［11］。預(yù)游泳測(cè)試的篩選:造模前將全部100只雄性 Wistar大鼠(200±20 g)進(jìn)行預(yù)游泳測(cè)試，剔除游泳時(shí)間少于10 min但大于20 min的大鼠;造模:隨機(jī)選取11只預(yù)游泳測(cè)試篩選合格的 Wistar大鼠作為空白對(duì)照組給予正常的飲食飲水之外，另選取55只Wistar大鼠于每天上午8∶00置于束縛盒中限制3 h，下午2∶00放于盛有水深30 cm、水溫(20℃ ±℃)的塑料大桶中游泳10 min。用隔日喂食法，每天的飲水為0.1 mol/L的鹽酸水溶液，連續(xù)喂養(yǎng)3周，大鼠會(huì)出現(xiàn)活動(dòng)減少、倦臥少動(dòng)、飲食及飲水量減少等情況，除空白對(duì)照組外隨機(jī)選取的造模雄性Wistar大鼠5只，經(jīng)麻醉處死后取胃觀察胃黏膜，胃黏膜表面無黏膜損害或潰瘍表現(xiàn)說明造模成功。

FD大鼠造模成功以后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對(duì)照組、多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組、當(dāng)藥低劑量組5組各10只，每組分裝于同一大鼠籠中。

1.2.2 動(dòng)物給藥 給藥劑量按人和鼠換算公式:dB=dARB/RA(WA/WB)1/3［12］換算，計(jì)算出當(dāng)藥高、中、低劑量組分別給予相當(dāng)于含生藥1.875 kg/L、1.25 kg/L、0.625 kg/L。取當(dāng)藥干膏用蒸餾水配制成濃度為21.48×10－3g/mL的高劑量受試藥，再用蒸餾水梯度等比稀釋高濃度藥液，制得10.74×10－3g/mL中劑量受試藥 50 mL，5.37× 10－3g/mL的低劑量受試藥 50 mL，多潘立酮組為0.3 g/L的水溶液。造模結(jié)束后開始按其質(zhì)量灌胃給藥，同時(shí)造模仍然繼續(xù)。各組大鼠每天早上7∶00灌胃給藥，每次2 mL。模型組和空白對(duì)照組均給予生理鹽水2 mL灌胃，每日1次共14 d。并記錄每組大鼠每天的飲食量、飲水量和每只大鼠的體質(zhì)量。

1.2.3 指標(biāo)的檢測(cè)方法 分別采用ELISA檢測(cè)大鼠血漿和血清中的胃動(dòng)素、胃泌素和生長抑素的含量變化，以評(píng)價(jià)當(dāng)藥對(duì) FD型大鼠胃腸道系統(tǒng)的影響，從而評(píng)價(jià)其治療功能性消化不良癥狀的可能性及其相關(guān)機(jī)理。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多樣本均數(shù)兩兩比較，采用單因素方差分析LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)P＜0.05或P＜0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多樣本平均數(shù)間比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)兩兩比較采用SNK法。

2 結(jié)果

2.1 當(dāng)藥提取物對(duì)大鼠血漿胃動(dòng)素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血漿胃動(dòng)素(MOT)含量顯著性降低(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組和當(dāng)藥低劑量組的血漿胃動(dòng)素含量均顯著性升高(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當(dāng)藥高劑量組和當(dāng)藥中劑量組血漿胃動(dòng)素含量均無明顯變化(P＞0.05)，當(dāng)藥低劑量組血漿胃動(dòng)素含量顯著性降低(P＜0.01);與當(dāng)藥高劑量組比較，當(dāng)藥中劑量組血漿胃動(dòng)素含量無明顯變化(P＞0.05)，當(dāng)藥低劑量組血漿胃動(dòng)素含量顯著性降低(P＜0.01)。

2.2 當(dāng)藥提取物對(duì)大鼠血漿胃泌素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血漿胃泌素(GAS)含量顯著性降低(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組和當(dāng)藥低劑量組的血漿胃泌素含量均顯著性升高(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當(dāng)藥高劑量組血漿胃泌素含量無明顯變化(P＞0.05)，當(dāng)藥中劑量組和當(dāng)藥低劑量組血漿胃泌素含量均顯著性降低(P＜0.01);與當(dāng)藥高劑量組比較，當(dāng)藥中劑量組血漿胃泌素含量無明顯變化(P＞0.05)，當(dāng)藥低劑量組血漿胃泌素含量顯著性降低(P＜0.05)。

2.3 當(dāng)藥提取物對(duì)大鼠血清生長抑素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血清生長抑素(SS)含量顯著性升高(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組和當(dāng)藥低劑量組的血清生長抑素含量均顯著性降低(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥低劑量組血清生長抑素含量均顯著性降低(P＜0.01)，當(dāng)藥中劑量組血清生長抑素含量無明顯變化(P＞0.05);與當(dāng)藥高劑量組比較，當(dāng)藥中劑量組的血清生長抑素含量無明顯變化(P＞0.05)，當(dāng)藥低劑量組血清生長抑素含量顯著性降低(P＜0.01)。

表1 當(dāng)藥提取物對(duì)FD Wistar大鼠血漿胃動(dòng)素、胃泌素和血清生長抑素含量的影響(±s)

表1 當(dāng)藥提取物對(duì)FD Wistar大鼠血漿胃動(dòng)素、胃泌素和血清生長抑素含量的影響(±s)

注:與正常組比較:1)P＜0.01;與模型組比較:2)P＜0.01;與多潘立酮組比較:3)P＜0.01;與當(dāng)藥高劑量組比較:4)P＜0.01、5)P＜0.05

組g/L正 常 組 10 —?jiǎng)e 鼠數(shù) 劑量g/kg 胃動(dòng)素(MOT)pg/L 胃泌素(GAS)ng/L 生長抑素(SS)μ 719.89±68.89 72.99±5.77 5.65±0.75模 型 組 10 — 304.81±38.501，3，4) 37.69±3.821，3，4) 14.42±0.931，3，4)多 潘 立 酮 組 10 0.3 529.29±51.711，2) 59.10±7.011，2) 10.00±1.081，2，4)當(dāng)藥高劑 量組 10 21.48×10－3 516.88±34.631，2) 54.57±4.561，2) 8.38±0.881，2，3)當(dāng)藥中劑 量組 10 10.74×10－3 496.34±37.161，2) 54.01±9.861，2，3) 9.17±0.911，2)當(dāng)藥 低 劑 量 組 10 10.74×10－3 444.35±47.481，2，4) 48.17±7.831，2，3，5) 11.70±1.321，2，3，4)

3 討論

FD是一種反復(fù)、慢性的上腹部癥狀綜合癥，其致病因素和發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，但大多數(shù)學(xué)者通過多方面的研究，提出了有關(guān)FD的發(fā)病機(jī)制，這些機(jī)制主要包括［13-18］胃排空延遲、胃腸激素異常、飲食損傷、幽門螺桿菌感染、內(nèi)臟敏感性增高、患者心理素質(zhì)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂等;雖然對(duì)FD的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了一系列的研究，但目前治療FD癥狀的特效藥較少，而西藥的副作用大，且對(duì)混合型FD癥狀的治療藥物個(gè)體差異性大。當(dāng)藥具有健胃的功效，能在一定程度上改善胃腸道系統(tǒng)，從而能改善FD患者的胃腸道不良癥狀，因此對(duì)當(dāng)藥健胃功效的藥理研究具有重要的意義。

胃動(dòng)素是參與調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)且具有興奮性的腦腸肽，對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和胃電活動(dòng)均具有明顯的促進(jìn)作用，且作用時(shí)間持久。胃動(dòng)素能夠引起平滑肌的收縮，進(jìn)而調(diào)節(jié)胃腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)。

胃泌素的主要藥理作用為刺激腸嗜鉻樣細(xì)胞(ECL細(xì)胞是胃體黏膜內(nèi)的主要內(nèi)分泌細(xì)胞，與胃內(nèi)的酸度和血漿胃泌素的濃度有密切的關(guān)系)分泌組胺，進(jìn)而間接刺激壁細(xì)胞分泌鹽酸進(jìn)而改善胃黏膜的營養(yǎng)和血供，促進(jìn)胃黏膜和壁細(xì)胞的增殖從而促進(jìn)胃腸肌的收縮，增加 LES的張力，并能增強(qiáng)幽門括約肌的收縮，延緩胃排空從而促進(jìn)胃腸的運(yùn)動(dòng)。

生長抑素主要對(duì)胃腸道運(yùn)動(dòng)、消化道激素和胃蛋白酶的分泌具有一定的抑制作用，能夠抑制胃泌素和胃動(dòng)素的釋放，即會(huì)阻礙胃腸的運(yùn)動(dòng)。

本文通過 ELISA法測(cè)定各組 Wistar大鼠的血漿胃動(dòng)素(MOT)、胃泌素(GAS)和血清生長抑素(SS)的含量。結(jié)果顯示，與模型組比較，多潘立酮組、當(dāng)藥高劑量組、當(dāng)藥中劑量組和當(dāng)藥低劑量組的血漿胃動(dòng)素、胃泌素含量均顯著性升高，說明多潘立酮組、當(dāng)藥組具有增強(qiáng)FD Wistar大鼠血漿胃動(dòng)素、胃泌素含量的作用，而提高含量效果為多潘立酮組＞當(dāng)藥高劑量組＞當(dāng)藥中劑量組 ＞當(dāng)藥低劑量組。結(jié)果表明，多潘立酮和當(dāng)藥均具有調(diào)節(jié)胃腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的作用，且潘立酮組、當(dāng)藥組也具有降低血清生長抑素(SS)含量的作用，其降低作用效果為潘立酮組 ＞當(dāng)藥高劑量組＞當(dāng)藥中劑量組＞當(dāng)藥低劑量組，進(jìn)一步說明多潘立酮和當(dāng)藥具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用。

綜上所述，當(dāng)藥能明顯改變動(dòng)物的胃腸激素水平，不僅能提高胃動(dòng)素和胃泌素水平，還能降低血清生長抑素水平，從而充分說明當(dāng)藥具有健胃的功效，對(duì)功能性消化不良癥狀的改善起到促進(jìn)作用，其機(jī)制可能是改善大鼠胃腸激素水平［19］，從而改善患者對(duì)食物的消化功能，進(jìn)而改善與消化功能密切相關(guān)的胃排空延遲［20］，以達(dá)到對(duì)功能性消化不良癥狀的改善。而對(duì)其他FD患者是否能起到較好的療效，還有待于臨床的進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Effect of Dang Medicine on the Expression of Gastrointestinal Hormones in Functional Dyspepsia of Wistar Rats

ZHANG Xiao-qian1，WANG Fang1，WEI Han-lin1，WANG Chun-li1△，HAN Xiang-dong2△
(1.East China University of Science and Technology，Shanghai 200237; 2.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203)

Objective:To investigate the effect of swertiae herba extract on gastrointestinal hormone levels of wistar rats with Functional Dyspepsia FD.Methods:The method of chronic restraint stress，fatigue law，law and drinking diet disloyal aqueous hydrochloric acid was used to establish the model of FD rats，and then the model of FD rats were randomly divided into five groups，namely model control group，domperidone group，high-dose swertiae herba group，swertiae herba dose group and low-dose swertiae herba group，these groups were orally 14 consecutive days of administration，and detect the content changes of motilin，gastrin and somatostatin by ELISA after 14 days.Results:The domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low dose group than in plasma MOT model group increased by 73.6%，69.6%，62.8%and 45.8%，the domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low-dose plasma GAS than the model group were increased by 56.8%;44.8%，43.3%and 27.8%;the domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low-dose serum somatostatin than the model group decreased by 30.7%，41.9%，36.4% and 18.7%.Conclusion:Swertiae herba extract can significantly improve the levels of motilin and gastrin in plasma and gastric antrum，reduced the somatostatin levels of rats，improved FD symptoms.

Swertiae herba extract;FD type Wistar rats;Motilin;Gastrin;Somatostatin

R285.5

:B

:1006-3250(2016)07-0912-03

2015-11-19

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81273657)-活絡(luò)效靈丹對(duì)心肌缺血再灌注的研究

張小倩(1989-)，女，在讀碩士，從事中藥藥理學(xué)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。

△通訊作者:王春麗，碩士研究生導(dǎo)師，從事中藥藥理學(xué)的研究，E-mail:wangchunli@ecust.edu.cn;韓向東，碩士研究生導(dǎo)師，從事中藥藥理學(xué)的研究，E-mail:hanxd555@163.com。