梁　浩劉和風黃書濤黃憲懷李魯濤

（1.棗莊市果樹科學研究所，山東棗莊277117；2.棗莊市農業(yè)技術推廣中心，山東棗莊277800；3.山東省航空護林站，山東濟南250014；4.棗莊市市中區(qū)林木保護站，山東棗莊277102；5.棗莊市森林資源監(jiān)測管理站，山東棗莊277800；6.山東省農業(yè)廣播電視學校，山東濟南250013）

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‘伏脆蜜’棗苗木脫毒快繁技術研究

梁浩1,2劉和風3*黃書濤4黃憲懷5李魯濤6

（1.棗莊市果樹科學研究所，山東棗莊277117；2.棗莊市農業(yè)技術推廣中心，山東棗莊277800；3.山東省航空護林站，山東濟南250014；4.棗莊市市中區(qū)林木保護站，山東棗莊277102；5.棗莊市森林資源監(jiān)測管理站，山東棗莊277800；6.山東省農業(yè)廣播電視學校，山東濟南250013）

摘要：栽植脫毒苗木是防止棗瘋病發(fā)生和蔓延的主要方法。本實驗對‘伏脆蜜’棗脫毒快繁的啟動培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的不同類型生長調節(jié)劑配比進行了篩選。結果表明，啟動培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基分別以MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L、MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L及1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L效果最好。同時筆者整合了已有的研究成果，制定了‘伏脆蜜’棗脫毒快繁技術流程。

關鍵詞：‘伏脆蜜’棗；棗瘋??；脫毒快繁

棗瘋?。↗ujube witches'broom）系由植原體（Phytoplasma）引起的危害棗樹的毀滅性病害，在國內外所有棗樹栽培區(qū)幾乎均有分布，主要通過嫁接和蟲媒傳播，防治比較困難，一旦發(fā)病極易造成病情迅速蔓延，成為制約棗樹發(fā)展的主要障礙。

‘伏脆蜜’棗是棗莊市果樹科學研究所2002年從‘棗莊脆棗’中選出的早熟鮮食品種，2006年12月通過山東省林木品種審定。該品種單果平均質量16.2g，脆熟期含可溶性固形物29％，口感酥脆多汁，品質極佳，果實生育期85～92d。該品種早果、豐產、穩(wěn)產、適應性強，是國內極具推廣前景的早熟優(yōu)質棗品種之一。但由于該品種對棗瘋病抗性一般，在棗瘋病疫區(qū)栽培容易遭受其侵染危害。為有效降低棗瘋病對‘伏脆蜜’棗的危害，培育脫毒苗木就成為控制該病發(fā)生和蔓延的主要方法。

近期，筆者對‘伏脆蜜’棗脫毒快繁的啟動培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的不同類型生長調節(jié)劑配比進行了篩選試驗，以期對棗瘋病的防治提供理論依據(jù)，促進棗樹產業(yè)的發(fā)展。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

供試品種為‘伏脆蜜’棗，取自于棗莊市果樹科學研究所采穗圃；MS和1/2MS培養(yǎng)基，北京華越洋生物有限公司生產；NAA、6-BA、IBA，美國Caisson Labs生產，分析純；酒精，蘇州市綠森化工有限公司生產，分析純；氯化汞，沈陽化學試劑廠生產，分析純；吐溫-20，濟寧百川化工有限公司生產，化學純。

1.2方法

春季剪取棗頭枝，截成20cm左右的小段，用自來水洗凈。將枝條置于45～50℃的恒溫水浴鍋內熱處理60min。然后以20根為一捆在30℃左右的恒溫鍋內水培，每天換水1次，一般10d左右芽體開始萌發(fā)。

1.3測定指標與方法

2　結果與分析

2.1不同類型生長調節(jié)劑濃度配比對啟動培養(yǎng)的影響

水培芽萌動后切取剛萌發(fā)的嫩芽，進行消毒滅菌，即用70％的酒精消毒10s，再用0.1％的氯化汞添加2～3滴吐溫-20浸泡消毒5～10min，用無菌水沖洗3次。然后在解剖鏡下剖離0.5mm長（約帶1～2個葉原基）的莖尖分生組織，接種到添加NAA和6-BA（濃度分別為0.05mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L及0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L共9個組合，以不加入任何生長調節(jié)劑為對照）的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)（見表1）。

由表1可見，‘伏脆蜜’棗在MS培養(yǎng)基上都能分化出愈傷組織，當不添加任何生長調節(jié)劑時，啟動率最低，且形成的愈傷組織易褐化，不能在下一步繼代培養(yǎng)中使用，這說明植物生長調節(jié)劑在‘伏脆蜜’棗的啟動培養(yǎng)中起著重要的作用。兩種生長劑配合使用，以處理5效果最好，其次為處理4。因此，‘伏脆蜜’棗啟動培養(yǎng)基以MS添加NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L效果最好。

表1　不同濃度生長調節(jié)劑對啟動培養(yǎng)的影響

2.2不同類型生長調節(jié)劑濃度配比對繼代培養(yǎng)的影響

將脫去植原體的愈傷組織接種到添加NAA和6-BA（濃度分別為0.1mg/L、0.2mg/L及1.0mg/L、2.0mg/L共4個組合）的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度25～27℃，光照強度1000lx，光照周期24h。

表2　不同濃度生長調節(jié)劑對繼代培養(yǎng)的影響

增殖系數(shù)的大小直接關系到快繁效率的高低。由表2可以看出，‘伏脆蜜’棗在不同的繼代培養(yǎng)基中，生長和發(fā)育狀況是不同的。其中以處理2效果最好，在繼代培養(yǎng)10～15d后，在接種的愈傷組織上分化出芽點，25d后，長出黃綠色新梢，增殖系數(shù)達2.4％，35d左右即可形成3～4cm健壯的小植株；其次為處理4，生長情況大體相同，只是增殖系數(shù)稍低于處理2；處理3明顯差于以上兩處理，生長緩慢，長勢一般；處理1表現(xiàn)最差，生長緩慢，逐漸死亡。綜合來看，以處理2的MS+NAA 0.1mg/L +6-BA2.0mg/L培養(yǎng)基效果最好。

2.3不同類型生長調節(jié)劑濃度配比對生根培養(yǎng)的影響

選用繼代培養(yǎng)基中長勢良好，芽苗健壯的莖段進行切割，轉移到生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加IBA和6-BA，IBA濃度分別為0.5mg/L、1.0mg/L和1.5mg/L，6-BA濃度分別為0.005mg/L、0.010mg/L和0.020mg/L，共有9個組合。

表3　不同濃度生長調節(jié)劑對生根培養(yǎng)的影響

表3顯示，生根率以處理5最高，達85.3％；其次為處理4，為81.7％；而生根數(shù)則以處理4最多，為3.6條；其次為處理5，為3.3條，但兩組數(shù)據(jù)均相差不大。從實踐來看，處理4發(fā)根早，移栽后生長旺，因此以處理4的1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA0.01mg/L為生根培養(yǎng)基為較佳選擇。

3　‘伏脆蜜’棗苗木脫毒快繁技術流程

‘伏脆蜜’棗苗木脫毒的快繁技術大致包括棗頭水培→啟動培養(yǎng)→繼代培養(yǎng)→生根培養(yǎng)→馴化→移栽等幾個流程。

3.1棗頭水培

春季剪取棗頭，清洗后進行熱處理鈍化植原體，然后進行水培。

3.2啟動培養(yǎng)

水培芽萌動后切取剛萌發(fā)的嫩芽，消毒滅菌后剖離0.5mm長的莖尖分生組織（若是材料取自已脫毒植株而用于快速繁殖苗木的，可取3～5mm長的莖尖以提高接種成活率），接種到添加NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。待有一定生長量后反復切割接種培養(yǎng)，即可獲得脫去植原體的愈傷組織。

3.3繼代培養(yǎng)

由啟動培養(yǎng)得到的芽數(shù)量較少，將啟動培養(yǎng)獲得的愈傷組織接種到MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L培養(yǎng)基中進一步擴繁增殖。

3.4生根培養(yǎng)

當繼代培養(yǎng)的苗高長至4～7cm時，可將叢生芽剪成1cm左右?guī)?～2個腋芽的莖段接種到1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA0.01mg/L生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

3.5馴化及移栽

在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)30d左右，苗高達6～9cm，有3條以上根時進行移栽。移栽前，可在溫室內煉苗，即將試管苗置于溫室內，保持溫度28～30℃，同時在大棚內采用彌霧裝置或進行間歇噴霧，保持相對濕度80％以上，適當遮陰，保持光照強度最高不超過5000lx，煉苗2～3d后打開瓶蓋再煉苗3～4d，當試管苗葉色變綠時，用鑷子取出，用溫水洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到裝有培養(yǎng)基質的容器中培育，培養(yǎng)基為珍珠巖和營養(yǎng)土3:1的混合物。栽好后立即澆透水，增加噴霧次數(shù)，使相對濕度保持在95％ ～100％之間，并逐漸增加光照強度。

4　結論

啟動培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中不同生長調節(jié)劑的適宜配比是脫毒快繁技術的關鍵。本研究通過實驗篩選出了‘伏脆蜜’棗三種培養(yǎng)基的適宜配比如下：MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L、MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L及1/2MS+IBA0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L。這為快速生產‘伏脆蜜’棗脫毒優(yōu)質苗木、擴大種植面積及提高其果實產量和品質奠定了理論基礎。

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Study on the Rapid Propagation of'Fucuimi'Jujube Seedlings

LIANG Hao1,2LIU He-feng3*HUANG Shu-tao4HUANG Xian-huai5LI Lu-tao6
(1.Zaozhuang Fruit Science Research Institute,Zaozhuang 277117,China;2.Zaozhuang Agriculture Technology Extension Centre,Zaozhuang 277800,China;3.Shandong Aviation Ranger Station,Jinan 250014,China; 4.Shizhong District Ranger Station in Zaozhuang,Zaozhuang 277102,China;5.Zaozhuang Forest Resources Monitoring and Management Station,Zaozhuang 277800,China;6.Shandong Agriculture Broadcasting and Television School,Jinan 250013,China)

Abstract:Planting virus-free seedlings is the main method to prevent the occurrence and spread of jujube witches'broom. The different ratio of growth regulators in rapid propagation media of'Fucuimi'were screened in these experiments.The results showed that the effect of MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L,MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L and 1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L were the best in initiation medium,subculture medium and rooting medium respectively.At the same time,the author integrated the existing research results and formulated the technological process of rapid propagation of'Fucuimi'jujube.

Key words:'Fucuimi'jujube;jujube witches'broom;rapid propagation

*通訊作者：劉和風（1968—），男，高級工程師，主要從事林木種苗管理工作

作者簡介：梁浩（1972—），男，高級農藝師，現(xiàn)從事果樹技術研究與推廣工作

基金項目：國家級星火計劃（特早熟優(yōu)質棗新品種—棗莊脆棗優(yōu)系1號產業(yè)化，項目編號：2003EA740076；伏脆蜜棗標準化生產關鍵技術集成與示范，2014GA740026）；山東省農業(yè)科技成果轉化資金項目（大棗新品種伏脆蜜中試與示范，魯科農字[2010]79號）；山東省科技發(fā)展計劃（大棗新品種伏脆蜜標準化生產技術研究與示范，2011GNC21301），山東省西部經濟隆起帶基層科技人才支持計劃（棗莊地方棗良種產業(yè)提升關鍵技術集成與示范，XB2014FW030），棗莊市科學技術發(fā)展計劃（棗莊市棗良種工程技術研究中心，201212）

收稿日期：2015-10-08

中圖分類號：S665.1

文獻標志碼：A

文章編號：1008-1038(2016)02-0059-03