張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛(wèi)星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州 061001)

急性白血病患者骨髓CD47表達(dá)變化及意義

張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛(wèi)星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州 061001)

目的 觀察CD47在急性白血病(AL)患者骨髓中的表達(dá)變化，并探討其對(duì)患者療效和預(yù)后的判斷價(jià)值。方法 選擇AL患者97例(觀察組)，同期擬行骨髓檢查的健康體檢者32例(對(duì)照組)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組入組時(shí)骨髓CD47陽性表達(dá)率，記錄觀察組治療2個(gè)療程的完全緩解(CR)率，以及出院1年療效已達(dá)到CR患者的復(fù)發(fā)情況，分析CD47表達(dá)與患者療效、復(fù)發(fā)情況的關(guān)系。結(jié)果 觀察組與對(duì)照組治療前CD47陽性表達(dá)率分別為71.13%(69/97)、3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。治療2個(gè)療程，觀察組CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05。出院1年，觀察組CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者復(fù)發(fā)率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05。結(jié)論 AL患者骨髓CD47表達(dá)升高，其表達(dá)情況檢測(cè)有助于對(duì)患者療效及預(yù)后的判斷。

急性白血病；CD47；療效；復(fù)發(fā)

急性白血病(AL)是一類造血組織的惡性腫瘤，發(fā)病原因是由于造血干細(xì)胞及祖細(xì)胞發(fā)生惡性病變，失去正常的增殖、分化及成熟能力，從而無限持續(xù)增長(zhǎng)，逐步取代骨髓直至全身組織及器官[1]。隨著生活環(huán)境的惡化和生活方式的變化，AL的發(fā)病率逐年上升[2]。臨床上將AL分為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)及急性髓系白血病(AML)兩類[3]。AL發(fā)病原因尚未明確，研究證實(shí)白血病干細(xì)胞(LSC)可能與白血病的發(fā)生、發(fā)展及復(fù)發(fā)有關(guān)[4]。CD47是一種免疫球蛋白，廣泛表達(dá)于不同組織的LSC細(xì)胞膜表面，具有黏附、吞噬、參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生理功能[3,5]。本研究觀察AL患者骨髓中CD47表達(dá)變化，并探討其對(duì)患者療效和預(yù)后判斷的作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2015年5月我院血液科收治的AL患者97例(觀察組)，男57例、女40例，年齡14～65(41.49±5.21)歲；FAB分型[3]：M0型12例，M1型11例，M2型10例，M2a型11例，M2b型12例，M3型11例，M4型12例，M5型11例，M6型7例；ALL 38例，AML 59例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)骨髓和外周血細(xì)胞形態(tài)、免疫表型、染色體核型和白血病特異相關(guān)融合基因檢測(cè)均確診為AL；②均為初次治療者，近1個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行任何相關(guān)化療；③臨床資料保存完整；④患者及其家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他疾病者；②病理資料不完整者；③屬于疾病晚期者。選取同期行骨髓檢查的健康體檢者32例(對(duì)照組)，男18例、女14例，年齡16～66(42.01±4.14)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 治療方法 觀察組除給予輸血、抗感染及對(duì)癥治療外，AML患者采用IDA (去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷)、DA(柔紅霉素+阿糖胞苷)或 MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)為主的方案進(jìn)行誘導(dǎo)緩解化療，ALL患者采用VDCP(長(zhǎng)春地辛+柔紅霉素+環(huán)磷酰胺+強(qiáng)的松)和VDLP(長(zhǎng)春地辛+柔紅霉素+左旋門冬酰胺酶+強(qiáng)的松)為主的方案進(jìn)行誘導(dǎo)緩解化療。療程均為1個(gè)月，共2個(gè)療程。

1.3 骨髓CD47表達(dá)檢測(cè) 采用流式細(xì)胞術(shù)。觀察組于治療前、治療后及出院后1年分別采集骨髓2～5 mL，對(duì)照組入組時(shí)采集等量骨髓，置于含有EDTA的試管中。取50 μL骨髓，加入3種熒光標(biāo)記抗體[異硫氰酸熒光素(FITC)、藻紅蛋白(PE)、PE-CY7標(biāo)記的單克隆抗體]20 μL，渦旋混勻。4 ℃條件下反應(yīng)20～30 min，加入2 mL紅四寶溶解液，震蕩后室溫下放置10 min。1 000 r/min離心5 min，棄去上清液，使用1 mL PBS反復(fù)洗滌3次；加入PBS制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/mL，以CD45/SSc設(shè)門識(shí)別白血病幼稚細(xì)胞，以白血病細(xì)胞表面抗原表≥20%為CD47陽性。

1.4 療效評(píng)價(jià)及隨訪 觀察組治療2個(gè)療程，參照文獻(xiàn)[3]方法評(píng)價(jià)臨床療效，計(jì)算完全緩解(CR)率。觀察組出院1年，由至少兩名專業(yè)醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行隨訪，詳細(xì)記錄獲得CR患者的復(fù)發(fā)情況。復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn)：白血病臨床癥狀依然存在，血細(xì)胞檢查不合格，外周血中依然存在白血病細(xì)胞，或存在骨髓外的白血病細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組骨髓CD47陽性表達(dá)率比較 觀察組治療前CD47陽性表達(dá)率為71.13%(69/97)，對(duì)照組為3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。觀察組中AML患者CD47陽性表達(dá)率為67.80%(40/59)，ALL患者為76.32%(29/38)，兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.2 觀察組CD47表達(dá)與療效的關(guān)系 治療2個(gè)療程，觀察組CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者CR率分別為45.00%(18/40)、63.16%(12/19)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05；ALL患者中，CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者CR率分別為41.38%(12/29)、88.89%(8/9)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達(dá)者或陰性表達(dá)者CR率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。

2.3 觀察組CD47表達(dá)與復(fù)發(fā)的關(guān)系 出院1年，觀察組CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者復(fù)發(fā)率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者復(fù)發(fā)率分別為55.56%(10/18) 、33.33%(4/12)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05；ALL患者中CD47陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者復(fù)發(fā)率分別為75.00%(9/12)、37.50%(3/8)，CD47不同表達(dá)者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達(dá)者或陰性表達(dá)者CR率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。

3 討論

AL的發(fā)病受到各種因素的影響，涉及多種染色體異位和基因突變，其發(fā)病機(jī)制尚未明確[3]。臨床上主要通過骨髓移植和化療來緩解AL患者的病情，但大部分患者容易在CR后再次復(fù)發(fā)，最終導(dǎo)致死亡[6,7]。研究證實(shí)，AL的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)與免疫逃逸和LSC關(guān)系密切[3]，而細(xì)胞表面抗原的表達(dá)對(duì)于機(jī)體的免疫應(yīng)答具有重要作用。CD47是一種廣泛表達(dá)于細(xì)胞表面的膜蛋白(又稱為整合素相關(guān)蛋白)，通常在正常細(xì)胞，如紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞等表面表達(dá)[8,9]。CD47可以與巨噬細(xì)胞表面分子信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα)結(jié)合，通過抑制吞噬細(xì)胞內(nèi)酪氨酸磷酶的活化和吞噬性突觸的聚集，抑制吞噬泡的形成。正常細(xì)胞可以向吞噬細(xì)胞發(fā)出信號(hào)，避免被吞噬，從而維持機(jī)體的正常功能。

本研究結(jié)果表明，觀察組CD47陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，提示CD47可以作為診斷AL的指標(biāo)之一。分析原因，可能是白血病細(xì)胞表面表達(dá)的CD47與SIRPα結(jié)合后可以產(chǎn)生抑制信號(hào)，從而躲避巨噬細(xì)胞的吞噬并大量增殖，最終導(dǎo)致病情惡化[3]。經(jīng)過兩個(gè)療程的治療，觀察組CD47陽性表達(dá)者CR率顯著低于CD47陰性表達(dá)者，AML和ALL患者也出現(xiàn)同樣的情況，表明白血病細(xì)胞表面CD47的表達(dá)對(duì)于AL的治療效果具有一定的影響?？赡苁怯捎贑D47陽性表達(dá)患者可以利用CD47-SIRPα結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白α鏈結(jié)合，抑制吞噬細(xì)胞的吞噬功能，逃避免疫系統(tǒng)對(duì)白血病細(xì)胞的清除，從而降低CR率[10,11]。CD47陰性表達(dá)患者體內(nèi)過度增殖的白血病細(xì)胞被機(jī)體的免疫系統(tǒng)清除出體外，因此經(jīng)過治療后CR率明顯升高。這也為臨床上可以通過抑制CD47和SIRPα結(jié)合治療AL提供了理論基礎(chǔ)。AL患者病情較難獲得緩解，且緩解后容易復(fù)發(fā)。本研究發(fā)現(xiàn)，獲得CR的CD47陽性表達(dá)患者復(fù)發(fā)率顯著高于CD47陰性表達(dá)患者，在AML和ALL患者中也是如此；可能是AL患者體內(nèi)CD47的陽性表達(dá)可以激活CD47-SIRPα通路的負(fù)向調(diào)節(jié)，從而降低被吞噬的概率和機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的清除作用[12,13]；證實(shí)CD47可以作為判斷AL患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

綜上所述，AL患者骨髓CD47表達(dá)升高，CD47可作為判斷患者療效及預(yù)后的指標(biāo)之一，但是其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

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