黃必飛，王超群，趙永明，孫鑫鑫，王倩，曾悅，邵俊康，王艷

（東陽市人民醫(yī)院，浙江 金華 322100，1.病理科；2.腫瘤外科；3.腫瘤內(nèi)科）

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宮頸癌中EGFR和FSCN1的表達(dá)及其相關(guān)性

黃必飛1，王超群1，趙永明2，孫鑫鑫1，王倩1，曾悅1，邵俊康1，王艷3

（東陽市人民醫(yī)院，浙江 金華 322100，1.病理科；2.腫瘤外科；3.腫瘤內(nèi)科）

[摘 要]目的：探討宮頸癌中表皮生長因子受體1（EGFR）及Fascin-1（FSCN1）蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測120例宮頸癌組織中EGFR及FSCN1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：宮頸癌組織中EGFR蛋白陽性率為89.2%（107/120），F(xiàn)SCN1蛋白陽性率為99.2%（119/120），其中強(qiáng)陽性率為88.3%（106/120）。EGFR陽性表達(dá)與FSCN1強(qiáng)陽性表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論：宮頸癌中EGFR可能參與正性調(diào)控FSCN1表達(dá)。

[關(guān)鍵詞]表皮生長因子受體1；Fascin-1；宮頸腫瘤；免疫組織化學(xué)

宮頸癌是全球女性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)均位于女性惡性腫瘤前列[1]。近年來，雖然宮頸癌的綜合治療有了新的進(jìn)展，但其仍然是導(dǎo)致中老年女性死亡的重要原因之一，且發(fā)病年齡有年輕化趨勢[2]。因此，尋找宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，并對其進(jìn)行干預(yù)，對提高患者生存質(zhì)量和生存率有著重要意義。表皮生長因子受體1（EGFR）是促腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因子，其在宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用[3-4]。Fascin-1（FSCN1）是一種相對分子質(zhì)量為5.5×104的細(xì)胞骨架蛋白，其高表達(dá)與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5-10]。有研究表明，激活食管癌中EGFR信號通路可上調(diào)FSCN1表達(dá)[11]。然而，關(guān)于宮頸癌中EGFR和FSCN1之間的關(guān)系尚鮮見相關(guān)報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測宮頸癌組織中EGFR和FSCN1蛋白的表達(dá)并分析其相關(guān)性，以進(jìn)一步探索影響宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。

1　資料和方法

1.1一般資料 收集2007年1月到2012年12月東陽市人民醫(yī)院病理科宮頸鱗狀細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本120例，患者年齡34～77歲，中位年齡55歲。按WHO標(biāo)準(zhǔn)（2003年）對各病例進(jìn)行分級和分期。組織學(xué)分化：高分化21例，中分化84例，低分化15例；TNM分期：I期81例，II/III期39例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移94例；浸潤深度：＞1/2 者75例，＜1/2者45例。所有病例術(shù)前均未行放療、化療等抗腫瘤治療。

1.2免疫組織化學(xué)染色 所有組織均以10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，用于HE及免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)染色采用EnVision二步法：枸櫞酸鹽緩沖液高壓熱修復(fù)，0.3% H2O2室溫孵育10～15 min，鼠抗人FSCN1單克隆抗體（克隆號：55K-2，Santa Cruz公司）及兔抗人EGFR多克隆抗體（克隆號：1005，Santa Cruz公司）均以1:100稀釋比例滴加，室溫孵育1 h，之后用Dako公司EnVision二步法試劑盒室溫孵育30 min，最后用DAB顯色劑顯色5～8 min，蘇木素復(fù)染、脫水、封蠟。1.3 免疫組織化學(xué)評分 ①FSCN1染色主要定位于細(xì)胞漿，其結(jié)果判定采用以下標(biāo)準(zhǔn)：染色強(qiáng)度計(jì)分：0（無染色），1（淡黃色），2（棕黃色），3（棕褐色）；染色范圍計(jì)分：0（無陽性細(xì)胞），1（1%～25%），2 （26%～50%），3（51%～75%），4（76%～100%）；兩者相加得分0～7分。以得分≥3分且切片中≥5%細(xì)胞染色視為陽性，其中得分為6～7分者視為強(qiáng)陽性，其余為弱陽性。②EGFR染色主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，本研究中以≥10%癌細(xì)胞可見弱或強(qiáng)的胞膜著色視為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)軟件。樣本率比較應(yīng)用x2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1EGFR和FSCN1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)及分布

EGFR蛋白主要定位于癌細(xì)胞胞膜和胞漿；FSCN1蛋白主要定位于癌細(xì)胞胞質(zhì)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞均陽性表達(dá)（見圖1）。宮頸癌組織中EGFR蛋白陽性率為89.2%（107/120）。120例宮頸癌中，119例（占99.2%）FSCN1蛋白表達(dá)為陽性，其中包含106例（占88.3%）強(qiáng)陽性病例。

A：EGFR陽性表達(dá)（×200）；B：FSCN1強(qiáng)陽性表達(dá)（×100）圖1　宮頸鱗狀細(xì)胞癌免疫組織化學(xué)染色（EnVision二步法）

2.2宮頸癌中EGFR和FSCN1的相關(guān)性 表1顯示，EGFR陽性組中FSCN1強(qiáng)陽性率為91.6%，而在EGFR陰性組中FSCN1強(qiáng)陽性率為61.5%，宮頸癌中EGFR陽性表達(dá)與FSCN1強(qiáng)陽性表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P＜0.01）。

表1　宮頸癌中EGFR和FSCN1的相關(guān)性 [n（%）]

3　討論

EGFR是表皮生長因子受體家族（HER/erbB家族）的重要成員，其廣泛分布于人體各組織中，是一種具有酪氨酸激酶活性的I型跨膜糖蛋白受體，它由胞外N末端配基結(jié)合區(qū)、跨膜親脂片段和胞內(nèi)C末端酪氨酸激酶區(qū)三部分組成。當(dāng)配體（如EGF）結(jié)合于胞外區(qū)后，EGFR形成二聚體，引起胞內(nèi)區(qū)自身磷酸化并激活酪氨酸激酶，啟動一系列下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞各方面功能，包括細(xì)胞增殖、凋亡和分化[12]。研究表明，在多種腫瘤細(xì)胞中存在EGFR的高表達(dá)或異?；罨?，其通過激活下游PI3K-AKT和MEK-ERK1/2兩條主要的信號通路，在腫瘤細(xì)胞增殖、分化以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中起了重要作用[13]。國內(nèi)外已有大量研究[3-4]證實(shí)，宮頸癌中EGFR高表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部浸潤等預(yù)后不良因素相關(guān)。

FSCN1是一種相對分子質(zhì)量為55 000的細(xì)胞骨架蛋白，它與細(xì)胞膜絲狀偽足、片狀偽足、微棘的形成密切相關(guān)，從而促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動、遷移及腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[14]。研究[5-10]表明，F(xiàn)SCN1在胃癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)，且能顯著增強(qiáng)胃癌及非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的侵襲能力。因此，F(xiàn)SCN1在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展過程中發(fā)揮了重要作用。目前，國內(nèi)外僅有少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道了宮頸癌中FSCN1的表達(dá)[15-17]，這些研究顯示宮頸癌中FSCN1陽性率在67.0%到90.9%之間。而本研究中FSCN1陽性率為99.2%，其中強(qiáng)陽性率為88.3%，與先前的研究比較陽性率偏高，我們分析可能是由于這些研究間采用了互不相同的FSCN1評分標(biāo)準(zhǔn)，或者是因?yàn)檫x取了不同地區(qū)的宮頸癌患者。

有研究[11]顯示食管癌中激活EGFR信號通路可上調(diào)FSCN1表達(dá)。本研究通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測了120例宮頸癌組織中EGFR和FSCN1的表達(dá)，顯示EGFR與FSCN1強(qiáng)陽性表達(dá)呈正相關(guān)。但本研究中因FSCN1僅1例陰性，故分層分析不能顯示EGFR與FSCN1陽性（包含全部陽性病例）之間的關(guān)系。以上結(jié)果初步顯示宮頸癌中EGFR可能參與正性調(diào)控FSCN1表達(dá)，有待進(jìn)一步大樣本進(jìn)行驗(yàn)證。

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（本文編輯：丁敏嬌）

·臨 床 經(jīng) 驗(yàn)·

Expression and correlation of EGFR and FSCN1 in cervical cancer

HUANG Bifei1,WANG Chaoqun1,ZHAO Yongming2,SUN Xinxin1,WANG Qian1,ZENG Yue1,SHAO Junkang1,WANG Yan3.1.Department of Pathology,Dongyang People’s Hospital,Jinhua,322100; 2.Department of Surgical Oncology,Dongyang People’s Hospital,Jinhua,322100; 3.Department of Medical Oncology,Dongyang People’s Hospital,Jinhua,322100

Abstract:Objective:To explore the expression of EGFR and FSCN1 protein in cervical cancer and its correlation.Methods:The expression of EGFR and FSCN1 in 120 cases of cervical cancer was evaluated with immunohistochemical technique,EnVision method.Results:EGFR protein expression rates in cervical cancer was 89.2% (107/120).FSCN1 protein positive rate in cervical cancer was 99.2% (119/120),in which strong positive rate was 88.3% (106/120).EGFR positive expression was signifi cantly positive correlation with FSCN1 strong positive expression (P＜0.01).Conclusion:EGFR may participate in positive regulation FSCN1 expression in cervical cancer.

Key words:EGFR; FSCN1; cervical neoplasms; immunohistochemistry

作者簡介：黃必飛（1971-），男，浙江東陽人，副主任醫(yī)師。

基金項(xiàng)目：金華市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2012-3-021）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012KYB230）；金華市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013-3-097）。

收稿日期：2015-02-06

[中圖分類號]R651.65

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]B

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.017