羅華榮，柯莽，周濤，徐鋮，包衛(wèi)光

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺(tái)州醫(yī)院，浙江 臺(tái)州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫(kù)）

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CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床病理分析

羅華榮1，柯莽2，周濤1，徐鋮1，包衛(wèi)光3

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺(tái)州醫(yī)院，浙江 臺(tái)州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫(kù)）

[摘 要]目的：檢測(cè)CD147和Survivin在人腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，以探討二者在腎細(xì)胞癌中表達(dá)的相關(guān)性及其與預(yù)后的關(guān)系。方法：利用組織芯片技術(shù)構(gòu)建85例腎細(xì)胞癌與35例癌旁正常腎組織芯片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision法檢測(cè)CD147和Survivin在腎癌組織中的表達(dá)。結(jié)果：腎細(xì)胞癌組中CD147和Survivin的表達(dá)率分別為65.7%（23/35）和71.4%（25/35），顯著高于癌旁對(duì)照組（P＜0.01）。CD147在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)隨著腫瘤大小與病理分級(jí)的升高而升高（P＜0.05）；Survivin在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)隨著病理分級(jí)與臨床分期的升高而升高（P＜0.05）。CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)具有弱一致性（Kappa=0.388，P ＜0.05）。Logistic回歸分析顯示Survivin的表達(dá)是腎細(xì)胞癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05）。結(jié)論：CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中均有過(guò)量表達(dá)，可能參與了腎癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，兩者聯(lián)合檢測(cè)可用于評(píng)估腎細(xì)胞癌的惡性程度和預(yù)后。

[關(guān)鍵詞]腎細(xì)胞癌；組織芯片；免疫組織化學(xué)；CD147；Survivin

CD147又稱為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），是一種新的細(xì)胞表面黏附分子，介導(dǎo)細(xì)胞間及細(xì)胞與間質(zhì)間的黏附作用，可通過(guò)多種途徑刺激腫瘤細(xì)胞及周?chē)g質(zhì)成纖維細(xì)胞合成并釋放基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs），降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。生存素（Survivin）是一種獨(dú)特的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs），選擇性地表達(dá)于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，旨在探討二者與腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1　材料和方法

1.1材料來(lái)源 收集本院病理科2005年1月至2008 年12月間手術(shù)切除腎細(xì)胞癌石蠟包埋標(biāo)本85例，其中男57例，女28例，男女比例為2.04:1，年齡最小17歲，最大80歲，平均56.3歲。標(biāo)本按2004年WHO腎細(xì)胞癌的病理學(xué)分類(lèi)分為：透明細(xì)胞癌63例，乳頭狀腎細(xì)胞癌12例，嫌色細(xì)胞癌6例，Bellini集合管癌2例，黏液樣小管狀和梭形細(xì)胞癌1例，多囊性腎細(xì)胞癌1例。第1種類(lèi)型歸為經(jīng)典型腎細(xì)胞癌組，共63例；后5種類(lèi)型歸為非經(jīng)典型腎細(xì)胞癌組，共22例。核分級(jí)按Fuhrman分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：I級(jí)核33例，II級(jí)核30例，III級(jí)核15例，IV級(jí)核7例。腫瘤大?。耗[瘤小于5 cm 32例，5～7 cm 28例，大于7 cm 25例。按Robson法臨床分期分為：I期45例，II期30例，III期9例，IV期1例。因標(biāo)本限制等客觀原因，隨機(jī)選取了35例腎癌旁（距腎癌組織邊緣＞5 cm）正常腎組織作癌旁對(duì)照組。有完整隨訪資料的患者共72例，所有標(biāo)本的患者術(shù)前均未接受化療及放療。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑 所用一抗CD147試劑為鼠抗人單克隆抗體，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。Survivin試劑為兔抗人多克隆抗體，購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。EnVision檢測(cè)試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自Dako公司。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，使用組織芯片打孔儀穿取合格組織芯轉(zhuǎn)移到受體蠟塊，構(gòu)建和制備腎癌及癌旁正常對(duì)照標(biāo)本組織芯片。將制成的組織芯片行4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行HE及免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)采用EnVision兩步法，高溫高壓抗原修復(fù)，DAB顯色。

1.4結(jié)果判定 CD147以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，Survivin主要以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，偶見(jiàn)于細(xì)胞核。觀察5個(gè)以上高倍視野，計(jì)數(shù)不少于1 000個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)數(shù)資料單因素比較采用x2檢驗(yàn)，采用Kappa檢驗(yàn)評(píng)判兩種抗體表達(dá)的一致性，危險(xiǎn)因素分析采用logistic回歸分析，通過(guò)向后剔除法擬合腎細(xì)胞癌的logistic回歸模型，獲得比值比（odds ratio，OR）和95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）。以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2　 結(jié)果

2.1組織芯片 共制備了3個(gè)組織芯片，每個(gè)芯片包含42個(gè)位點(diǎn)，比較原HE切片，剔除切片不全及圖象不良者，實(shí)際包含85例腎細(xì)胞癌組織及35例癌旁腎組織。

2.2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 CD147在腎細(xì)胞癌中的總陽(yáng)性率為71.8%（61/85），主要在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，染色較強(qiáng)（見(jiàn)圖1-2）。CD147在35例有癌旁對(duì)照的腎細(xì)胞癌組中的陽(yáng)性率為65.7%（23/35），癌旁對(duì)照組僅10例呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為28.6%（10/ 35），主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)的陽(yáng)性表達(dá)，腎細(xì)胞癌組CD147陽(yáng)性率顯著高于癌旁對(duì)照組（P＜0.01）。Survivin在腎細(xì)胞癌組織中的總陽(yáng)性表達(dá)率為76.5%（65/85），主要在腎細(xì)胞癌的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)（見(jiàn)圖3），部分病例也可見(jiàn)到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核同時(shí)著色，且染色較強(qiáng)（見(jiàn)圖4）。Survivin在35例有癌旁對(duì)照的腎細(xì)胞癌組中的陽(yáng)性率為71.4%（25/ 35），癌旁對(duì)照組無(wú)一例表達(dá)，腎細(xì)胞癌組Survivin陽(yáng)性率顯著高于癌旁對(duì)照組（P＜0.01）。CD147在腎細(xì)胞癌中的陽(yáng)性率隨著腫瘤大小和病理分級(jí)的升高而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同組織學(xué)分型和臨床分期間CD147的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Survivin在腎細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率隨著病理分級(jí)和臨床分期的升高而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Survivin在不同腫瘤大小和組織學(xué)分型間的表達(dá)均無(wú)顯著性差異（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

圖1　CD147在腎細(xì)胞癌中呈細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（EnVision，×100）

圖2　CD147在腎細(xì)胞癌中呈細(xì)胞膜陽(yáng)性表達(dá)（EnVision，×200）

圖3　Survivin在腎細(xì)胞癌中呈細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)（EnVision，×200）

圖4　Survivin在腎細(xì)胞癌中呈細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（EnVision，×200）

表1　CD147和Survivin表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系[n（%）]

2.3CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中表達(dá)的一致性CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌組織中表達(dá)的共同陽(yáng)性率為62.4%（53/85），共同陰性率為14.1%（12/ 85）。Kappa檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析顯示CD147和Survivin的表達(dá)具有一致性（Kappa=0.388，P＜0.05），但在Kappa系數(shù)區(qū)段中一致性程度屬于弱。見(jiàn)表2。

表2　CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中表達(dá)的一致性

2.4CD147、Survivin表達(dá)與腎細(xì)胞癌患者的預(yù)后分析 85例腎細(xì)胞癌患者中共獲得72例隨訪資料，隨訪時(shí)間2～98個(gè)月。其中存活5年以上的有55例，因腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移5年內(nèi)死亡的共17例，總的5年生存率為76.4%。生存組中CD147陽(yáng)性表達(dá)率為61.8%（34/55），Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為65.5%（36/ 55）；死亡組中CD147陽(yáng)性表達(dá)率88.2%（15/17），Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為94.1%（16/17）。取腫瘤大小、組織學(xué)分型、病理分級(jí)、臨床分期、CD147表達(dá)及Survivin表達(dá)為自變量，以隨訪5年是否死亡為應(yīng)變量，通過(guò)向后剔除法作logistic回歸分析，依次剔除CD147表達(dá)和組織學(xué)分型兩個(gè)自變量，結(jié)果顯示腫瘤大小、病理分級(jí)、臨床分期和Survivin表達(dá)是腎細(xì)胞癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表3。

表3　腎細(xì)胞癌危險(xiǎn)因素logistic回歸分析

3　討論

腎細(xì)胞癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多步驟的級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程。細(xì)胞外基質(zhì)（包括基底膜）的降解是腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一[1]。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的蛋白水解酶[2-3]。CD147是一種單鏈跨膜糖蛋白，在惡性腫瘤細(xì)胞膜上有較強(qiáng)表達(dá)，能刺激腫瘤周?chē)h(huán)境細(xì)胞分泌MMPs，在癌細(xì)胞表面形成復(fù)合物，將MMPs濃聚于癌細(xì)胞周?chē)?，破壞天然組織屏障，導(dǎo)致基底膜和間質(zhì)成分降解，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[4-5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CD147在腎細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常腎組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CD147在腎細(xì)胞癌組中的表達(dá)隨著病理分級(jí)的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，CD147的表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)。另外CD147的表達(dá)率與腫瘤的大小也有密切關(guān)系，腫瘤越大，CD147的表達(dá)率越高。提示CD147可能參與腎癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，影響腫瘤的惡性程度和發(fā)展趨勢(shì)。

Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，特異表達(dá)于人和鼠的胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類(lèi)腫瘤細(xì)胞，而在成人正常分化的組織中除了少數(shù)組織外極少表達(dá)[6]。Survivin通過(guò)直接或間接地干預(yù)凋亡蛋白酶Caspases的功能而發(fā)揮其抗凋亡作用，在調(diào)控細(xì)胞周期和抑制細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示85例腎細(xì)胞癌Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為76.5%（65/85），35例癌旁正常腎組織無(wú)一例表達(dá)，表明Survivin在腎細(xì)胞癌組織中有高度選擇性表達(dá)的特征，可能參與了腎癌的發(fā)生。另外Survivin表達(dá)隨著病理分級(jí)和臨床分期的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，臨床分期越高，Survivin的表達(dá)陽(yáng)性率越高。這說(shuō)明Survivin的表達(dá)與腎癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)，Survivin的高表達(dá)可能參與惡性腫瘤的臨床進(jìn)展。

最新研究[9]表明，在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展過(guò)程中，CD147的過(guò)表達(dá)能夠抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡，并能促進(jìn)細(xì)胞的遷移。Tang等[10]的研究表明，CD147能夠通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因免疫球蛋白結(jié)合蛋白（BIP），誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白反應(yīng)（UPR），從而抑制肝癌細(xì)胞的凋亡。這些均表明CD147參與了細(xì)胞的凋亡抑制過(guò)程，并且可能在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、遷移過(guò)程中起著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎細(xì)胞癌中CD147和Survivin均高表達(dá)，癌旁正常組織中CD147和Survivin低表達(dá)或不表達(dá)；Kappa檢驗(yàn)顯示CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)有弱一致性?？梢酝茰y(cè)CD147與凋亡抑制因子Survivin之間可能存在相同的信號(hào)通路，兩者在腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能存在相互誘導(dǎo)、相互協(xié)同的作用。

本組多因素logistic回歸分析顯示Survivin的表達(dá)是腎細(xì)胞癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且比值比較大（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05），這與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致。Rabien等[12]的研究表明，CD147在腎細(xì)胞癌中存在過(guò)表達(dá)，并且與腎透明細(xì)胞癌患者的不良預(yù)后有關(guān)。本研究顯示CD147雖不是腎細(xì)胞癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但死亡組中CD147陽(yáng)性表達(dá)率高于生存組，表明CD147的陽(yáng)性表達(dá)在一定程度上可以提示腫瘤的不良預(yù)后。

CD147和Survivin在腎細(xì)胞癌中高表達(dá)，而在正常腎組織中不表達(dá)或弱表達(dá)的特點(diǎn)，為腎癌的分子靶向治療提供了新的靶點(diǎn)，使得促進(jìn)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡而不影響周?chē)＝M織細(xì)胞的抗腫瘤療法成為可能[5，13]。因此，聯(lián)合檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織中CD147和Survivin的表達(dá)，對(duì)于臨床治療可能具有重要的指導(dǎo)意義。

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（本文編輯：丁敏嬌）

·臨 床 經(jīng) 驗(yàn)·

Expression of CD147 and Survivin in renal cell carcinoma and their correlation with clinicopathologic pa-rameters

LUO Huarong1,KE Mang2,ZHOU Tao1,XU Cheng1,BAO Weiguang3.1.Department of Pathology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 2.Department of Urology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 3.Human Tissue Bank,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000

Abstract:Objective:To investigate the expression of CD147 and Survivin in human renal cell carcinoma (RCC) and their correlation with clinicopathologic parameters.Methods:The RCC tissue microarrays containing 85 renal cell carcinoma specimens and 35 normal kidney tissue specimens were used to detect CD147 and Survivin expression by immunohistochemistry.Results:The expression rates of CD147 and Survivin were 65.7% (23/35) and 71.4% (25/35) in RCC group,respectively,signifi cantly higher than that in control group (P＜0.01).The expression of CD147 in RCC increased with the size of tumor and pathological grade (P＜0.05).And the expression of Survivin in RCC increased with the pathological grade and clinical stage (P＜0.05).The expression of CD147 and Survivin in RCC specimens showed weak consistency (Kappa=0.388,P＜0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that the positive expression of Survivin was an independent risk factor of RCC (OR=16.256,95%CI:1.132～ 233.515,P＜0.05).Conclusion:CD147 and Survivin are over-expressed in RCC specimens.CD147 and Survivin may play a crucial stage in development of human RCC.Detection of the expression of CD147 and Survivin can be used in the evaluation of malignant degree and prognosis of RCC.

Key words:renal cell carcinoma; tissue microarray; immunohistochemistry; CD147; Survivin

作者簡(jiǎn)介：羅華榮（1980-），男，浙江臺(tái)州人，主治醫(yī)師。

收稿日期：2014-09-04

[中圖分類(lèi)號(hào)]R737.11

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]B

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.013