劉曉平，周小青，鄧偉，鐘寶元，曾祥福，吳平輝（.贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院胃腸外科，江西贛州34000；.贛南醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院外一科，江西信豐34600）

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直腸癌白細胞介素-6的表達與臨床病理因素的相關性研究*

劉曉平1，周小青2，鄧偉1，鐘寶元1，曾祥福1，吳平輝1
（1.贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院胃腸外科，江西贛州341000；2.贛南醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院外一科，江西信豐341600）

摘要：目的研究白細胞介素-6（IL-6）在直腸癌中的表達及與臨床病理因素的相關性。方法選取2013年2月-2014年1月在贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院診斷為直腸癌的患者49例為直腸癌組，取其腫瘤組織以及癌旁正常組織；選取同一時間段健康體檢者30例作為對照組。應用免疫組織化學和血清學檢測IL-6在直腸癌患者中的表達，分析其與臨床病理因素的關系。結果IL-6蛋白在直腸癌組織中的表達明顯高于癌旁組織。IL-6蛋白表達與直腸癌患者的年齡、性別、腫瘤分化程度以及淋巴結轉移無關，與臨床分期有關。直腸癌組術前血清IL-6水平明顯高于對照組。Ⅲ、Ⅳ期直腸癌患者的血清IL-6水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期；有淋巴結轉移患者的IL-6水平明顯高于無淋巴結轉移者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論IL-6的高表達與直腸癌病程發(fā)展密切相關，可能是腫瘤轉移的關鍵因子之一。

關鍵詞：直腸腫瘤；白細胞介素-6；腫瘤轉移

白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）是一種多效能的細胞炎癥因子，可由多種細胞，如單核細胞、巨噬細胞和成纖維細胞等生成，并在宿主防御體系中發(fā)揮調控作用。IL-6可通過誘導炎癥的急性期而啟動先天免疫反應，這種效應與發(fā)熱、血小板增多、惡病質和蛋白質成分改變等臨床反應有關[1]。多項研究表明，IL-6的高表達和異常的信號通路可促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，可影響腫瘤患者的預后[2-3]。血清IL-6水平上升也與胃癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌患者的不良預后密切相關[4-7]。關于IL-6與直腸癌的侵襲、轉移及其具體機制目前還不是很清楚。江西贛南地區(qū)以客家人居多，平時飲食習慣好吃咸、辣、腌漬食品，流行病學調查顯示，直腸癌的發(fā)病率高[8]。因此本研究運用免疫組織化學和血清學檢測IL-6在直腸癌患者中的表達，初步探討IL-6表達與直腸癌臨床病理因素的關系。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年2月-2014年1月在贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院診斷為直腸癌的患者49例為直腸癌組。其中，男性29例，女性20例；年齡（61.0±5.3）歲。患者術前均未接受放化療，病變組織活檢診斷為直腸腺癌。其中高分化腺癌15例，中分化腺癌23例，低分化腺癌11例。選取同一時間段本院體檢中心健康體檢者30例作為血清學檢測對照組。其中，男性19例，女性11例；年齡（63.0±4.7）歲。兩組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2標本制備與試劑

將直腸腺癌組織及癌旁正常組織（>5 cm）的石蠟包埋標本行4μm厚切片，每例連續(xù)做3張片。1張行HE染色，以觀察病理特征；1張作為陰性對照組，用PBS溶液代替一抗；另1張行IL-6免疫組織化學染色。病理特征和免疫組織化學結果由2名病理科醫(yī)師獨立單盲閱片?？谷薎L-6單抗購自美國Santa Cruz公司，SP免疫組織化學染色試劑盒購自北京中山生物技術有限公司，IL-6 ELISA試劑盒購自上海森雄試劑公司。直腸癌患者于手術前，健康體檢者于清晨空腹靜脈抽血3 ml，于室溫下自然凝集30 min后離心并分離血清，置于-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3方法與結果判斷

組織學標本應用SP法進行免疫組織化學染色，PBS代替一抗作為陰性對照。IL-6免疫組織化學染色陽性物質主要定位于細胞漿，呈棕黃色。在400倍光鏡下，隨機選取5個視野進行細胞計數(shù)，蛋白表達評估標準分為2類，①按染色強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色；②按陽性染色細胞百分率計分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50% 為2分，>50%為3分。然后將2類計分結果相加，0～1分為陰性（-），2～3為陽性（+），>3分為強陽性（++）[9]。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1直腸癌組織及癌旁組織中IL-6蛋白的表達

IL-6蛋白陽性物質主要表達于細胞漿中，呈棕黃色（見圖1、2）。在49例直腸癌標本中，34例染色陽性（69.4%）；與其對應的直腸癌旁組織中，有11例染色陽性（22.4%）。IL-6在直腸癌中的表達明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

圖1　IL-6在直腸癌組織中的表達（SP×400）

圖2　IL-6在癌旁組織中的表達（SP×200）

2.2直腸癌組織中IL-6蛋白表達與臨床參數(shù)的關系

IL-6蛋白表達與直腸癌患者的年齡、性別、腫瘤分化程度以及淋巴結轉移無關，與臨床分期有關。Ⅲ、Ⅳ期直腸癌的IL-6蛋白表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3直腸癌組和對照組血清IL-6水平的比較

直腸癌組術前血清IL-6水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4直腸癌組血清IL-6水平與臨床參數(shù)的關系

直腸癌組術前血清IL-6水平與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度無關，與臨床分期和淋巴結轉移相關。血清IL-6水平隨著直腸癌臨床分期增加而逐漸升高，Ⅲ、Ⅳ期直腸癌患者的血清IL-6水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期；有淋巴結轉移患者的IL-6水平明顯高于無淋巴結轉移者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表4。

表1　直腸癌和癌旁組織中IL-6的表達（n=49）

表2　臨床參數(shù)與直腸癌組織中IL-6蛋白表達的關系

表3　直腸癌組和對照組血清IL-6水平的比較（±s）

表3　直腸癌組和對照組血清IL-6水平的比較（±s）

組別例數(shù)　IL-6/（pg/ml）　P值直腸癌組　49　32.90±7.74　0.000對照組　30　5.37±1.96

表4　臨床參數(shù)與直腸癌組血清IL-6水平的關系（±s）

表4　臨床參數(shù)與直腸癌組血清IL-6水平的關系（±s）

臨床參數(shù)例數(shù)　IL-6/（pg/ml）　P值年齡/歲≥60　32　32.84±7.31　0.947 <60　17　33.00±8.74性別男29　32.86±8.36　0.969 女20　32.95±6.97腫瘤分化程度高、中　38　32.37±6.88　0.379 低11　34.73±10.39臨床分期Ⅰ、Ⅱ期　21　29.81±7.72　0.014Ⅲ、Ⅳ期　28　35.21±7.03淋巴結轉移有19　30.11±7.09　0.043 無30　34.67±7.73

3　討論

近年研究表明，結直腸癌是由環(huán)境、飲食、生活習慣與遺傳因素協(xié)同作用的結果。由于致癌物的作用，結合細胞遺傳學背景，導致細胞遺傳突變而逐漸發(fā)展為癌[10]。根據(jù)江西省贛州市章貢區(qū)疾控中心所發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，結直腸癌發(fā)病率在男、女性惡性腫瘤中均排第3位，而且35歲開始腫瘤發(fā)病率明顯增加，男性上升幅度大于女性，結直腸癌的治療成為當?shù)鼐用裰饕募膊∝摀鶾8，11]。因此，全面研究江西省贛南地區(qū)結直腸癌的發(fā)病機制對當?shù)亟Y直腸癌的診療十分重要。

研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織常伴有大量炎癥細胞的浸潤以及炎癥因子表達的升高。腫瘤細胞及其周圍免疫細胞分泌的炎癥因子可激活炎癥相關信號通路，誘導腫瘤免疫抑制微環(huán)境的形成，參與腫瘤的發(fā)生、進展和轉移過程。潰瘍性結腸炎、克羅恩病及其他炎癥性腸炎患者發(fā)展成為結腸、直腸癌的危險性明顯增加。20%的潰瘍性結腸炎患者在發(fā)病后30年可進展為結直腸癌[12]。與結直腸癌存在密切聯(lián)系的炎癥因子主要有TNF-α、IL-8、TGF-β、PGE2等，其可作為結直腸癌臨床預后判斷的指標，同時也是腫瘤免疫與生物治療的靶點。IL-6早期主要由黏膜固有層的巨噬細胞和樹突狀細胞產生，后期則是由T細胞釋放。在APCMin/+結直腸小鼠模型和結腸炎相關性結腸癌模型中，發(fā)現(xiàn)IL-6在早期可促進癌變細胞的增殖以及增長[13-14]。IL-6有調節(jié)免疫細胞功能及調控結腸炎相關性結腸癌進展的作用[15]。本研究證實IL-6與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系。而IL-6與直腸癌侵襲、轉移的關系及其分子機制尚不清楚。

本研究通過免疫組織化學和血清學檢測IL-6在直腸癌患者中的表達，初步探討IL-6表達與直腸癌臨床病理因素的關系。研究結果表明，IL-6蛋白陽性物質主要表達于細胞漿中，呈棕黃色。在49例直腸癌標本中，34例染色陽性（69.4%）；與其對應的直腸癌旁組織中，有11例染色陽性（22.4%）。IL-6在直腸癌中的表達明顯高于癌旁組織，IL-6蛋白表達僅與直腸癌患者的臨床分期有關。Ⅲ、Ⅳ期直腸癌的IL-6蛋白表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，提示IL-6與直腸癌轉移有關，可能是直腸癌發(fā)展的關鍵因子之一。同時本實驗還檢測到直腸癌組術前血清IL-6水平明顯高于對照組，直腸癌組術前IL-6水平與臨床分期和淋巴結轉移相關。提示IL-6和直腸癌的病程發(fā)展相關，參與腫瘤的侵襲和轉移，可能影響直腸癌患者的預后。有研究顯示，IL-6通過活化JAK/STAT3信號通路來促進膽囊癌細胞的增殖和侵襲[16]。那么IL-6在直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其機制如何？是否和當?shù)仫嬍沉晳T致癌具有相關性，將是下一步的研究方向。

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（張蕾編輯）

Correlation between IL-6 expression and clinicopathologic features in rectal cancer*

Xiao-ping Liu1,Xiao-qing Zhou2,Wei Deng1,Bao-yuan Zhong1,Xiang-fu Zeng1,Ping-hui Wu1
(1.Department of Gastrointestinal Surgery,the First Affiliated Hospital,Gannan Medical University,Ganzhou,Jiangxi 341000,China; 2.The First Department of General Surgery,the Second Affiliated Hospital,Gannan Medical University,Xinfeng,Jiangxi 341600,China)

Abstract:Objective To study the correlation between IL-6 and clinicopathologic features in rectal cancer.Methods IL-6 expression was detected by immunohistochemistry and peripheral blood assay in rectal cancer tissues and pericarcinomatous tissues of 49 rectal cancer patients,and 30 healthy people for physical examination were taken as controls.Then its relationship with clinicopathologic features was analyzed.Results IL-6 expression in the rectal cancer tissues was higher than that in the pericarcinomatous tissues.IL -6 expression had no relationship with age,gender,histological type or lymph node metastasis.However,IL-6 protein expression was correlated with clinical stage of rectal cancer.Peripheral blood IL-6 level in the rectal cancer patients was higher than that in the healthy persons before operation.Serum IL-6 level was significantly associated with clinical stage and lymph node metastasis (P < 0.05).Conclusions High -expression of IL -6 is closely associated with the development of rectal cancer.IL-6 may be a key factor of tumor metastasis.

Keywords:rectal carcinoma; IL-6; tumor metastasis

*基金項目：江西省教育廳科學技術研究項目（No：GJJ14677）[通信作者]吳平輝：E-mail：371913821@qq.com

收稿日期：2015-11-23

文章編號：1005-8982（2016）06-0023-04

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.06.006

中圖分類號：R735.3

文獻標識碼：A