張嬌珍，王小敏，李麗娟（海南省?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南海口570100）

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圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌感染情況和藥敏性試驗(yàn)及其與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系

張嬌珍，王小敏，李麗娟
（海南省?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南?？?70100）

摘要：目的探討孕婦妊娠期B族鏈球菌（GBS）感染情況及其藥物敏感性，分析GBS感染與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系及不同用藥方案對(duì)GBS感染孕婦妊娠結(jié)局的影響。方法選取2014年1月-2014年10月?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科行產(chǎn)前檢查的428例孕35～37周孕婦為研究對(duì)象，收集孕婦陰道及肛周分泌物，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)GBS感染情況，并對(duì)分離的菌株進(jìn)行耐藥試驗(yàn)。將GBS陽性患者分為A組（臨產(chǎn)后采用敏感性抗生素靜脈滴注至分娩結(jié)束，1次/4 h）及B組（發(fā)現(xiàn)感染即口服抗生素治療7 d，其余治療方法與A組相同），對(duì)比分析兩種治療方案妊娠結(jié)局。結(jié)果GBS陽性組胎兒宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、羊水污染、早產(chǎn)、新生兒肺炎、產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥期感染發(fā)生率高于GBS陰性組（P<0.05）。GBS孕婦對(duì)萬古霉素、頭孢噻肟、青霉素、氨芐青霉素的敏感性為100%，而對(duì)克林霉素、阿奇霉素及紅霉素的敏感率較低，分別為58.8%、44.1%及35.2%。B組胎兒宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、羊水污染、早產(chǎn)、新生兒肺炎、產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥期感染發(fā)生率低于A組（P<0.05）。結(jié)論GBS感染可增加孕婦不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，在發(fā)現(xiàn)孕婦感染GBS后立刻采用敏感性的抗生素類藥物治療能有效改善孕婦不良妊娠結(jié)局，有利于孕婦預(yù)后。

關(guān)鍵詞：圍產(chǎn)期孕婦；B族鏈球菌；藥敏性試驗(yàn)；不良妊娠結(jié)局

B族鏈球菌（group B Streptococcus，GBS）屬于革蘭陽性鏈球菌，主要定植在人類胃腸道及下生殖道中，同時(shí)也可定植在新生兒上呼吸道中[1]。GBS感染可引起孕婦圍產(chǎn)期不良妊娠結(jié)局，如可增加新生兒胎膜早破、宮腔感染、肺炎等不良妊娠結(jié)局的發(fā)生[2]。研究表明[3]，GBS感染后對(duì)孕婦采用敏感性抗生素治療能有效改善孕婦不良妊娠結(jié)局，降低新生兒發(fā)病率及死亡率。目前孕婦GBS臨床篩查方法常采用細(xì)菌培養(yǎng)法，但該方法培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，培養(yǎng)率低，不利于GBS孕婦臨床篩查及評(píng)估，而聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法因其快速、靈敏度高而備受關(guān)注[4]。本研究將采用PCR法測(cè)定孕婦下陰道GBS感染情況，并對(duì)陽性患者進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及探討不同治療時(shí)機(jī)對(duì)GBS感染孕婦妊娠結(jié)局的影響，旨在為臨床GBS感染治療提供指導(dǎo)。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2014年1～2014年10月?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科行產(chǎn)前檢查的428例孕婦為研究對(duì)象。均為單胎妊娠，入組前無性交史或應(yīng)用抗生素史，取材均獲得孕婦同意。年齡22～38歲，平均（27.8±2.5）歲，孕35～37周，平均（36.2±0.4）周，初產(chǎn)婦322例，經(jīng)產(chǎn)婦106例。所有產(chǎn)婦均由醫(yī)師采用拭子采集陰道及肛周分泌物標(biāo)本2份，其中1份用于培養(yǎng)鑒定，一份用于PCR檢測(cè)，并立刻送檢培養(yǎng)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)本采集取材方法參照2002年用戶研究與體驗(yàn)設(shè)計(jì)中心（CDC）推薦取材方法，在孕35～37周時(shí)收集樣本，先將外陰分泌物拭去，采用2根無菌陰道棉放入陰道1/3內(nèi)，旋轉(zhuǎn)1周后收集陰道分泌物，將同一根棉拭子再在肛門周圍旋轉(zhuǎn)一周，取材完畢后將拭子放入帶封帽的試管中備用。取材前不進(jìn)行外陰消毒，取材時(shí)不使用陰道窺器。

1.2.2GBS分離及鑒定標(biāo)本采集、分離、培養(yǎng)嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版）進(jìn)行，獲得純培養(yǎng)后將分離的病原菌接種于35℃的血瓊脂平板中恒溫培養(yǎng)24 h，采用應(yīng)用編程接口（API）法或VITEK全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)對(duì)菌種進(jìn)行鑒定。采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦的紙片擴(kuò)散法（K-B）進(jìn)行檢測(cè)，將血瓊脂板上的待測(cè)菌稀釋至0.5麥?zhǔn)蠁挝坏募?xì)菌懸液，并將菌種接種至MH平板中，待菌液風(fēng)干后應(yīng)用GPS-15藥敏最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定試驗(yàn)條進(jìn)行鑒定，試劑盒由美國(guó)Sigma公司提供，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3PCR檢測(cè)GBS將陰道拭子浸于pH 8.0的鹽酸緩沖液中，于37℃中加入100μg/ml溶菌酶充分搖勻震蕩30 min后，加入200μg/ml蛋白酶K，于56℃中反應(yīng)3 h，并置于離心機(jī)中以10 000 r/min中離心處理5 min后留取上清液200μl，采用DNA試劑盒（美國(guó)Sigma公司）提取DNA，具體步驟參照說明書進(jìn)行操作。采用PCR檢測(cè)法測(cè)定GBS水平，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明方法進(jìn)行。

1.3治療方法

根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將GBS陽性患者分為A組及B組。其中，A組于臨產(chǎn)后采用敏感性抗生素靜脈滴注至分娩結(jié)束，1次/4 h，B組于發(fā)現(xiàn)感染即口服敏感性抗生素7 d，同時(shí)于臨產(chǎn)后采用敏感性抗生素靜脈滴注至分娩結(jié)束，1次/4 h。A組若分娩前發(fā)現(xiàn)胎膜早破現(xiàn)象，應(yīng)立刻采用敏感性抗生素靜脈滴注治療。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)、構(gòu)成比或率進(jìn)行描述，組間計(jì)數(shù)資料率的比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1孕婦GBS檢出結(jié)果及GBS感染對(duì)妊娠結(jié)局的影響

428例孕婦經(jīng)PCR檢測(cè)，GBS陽性68例（15.89%），GBS陰性360例（84.11%），GBS陽性組胎兒宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、羊水污染、早產(chǎn)、新生兒肺炎、產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥期感染發(fā)生率高于GBS陰性組（P<0.05），見表1。

2.2GBS陽性孕婦藥敏性試驗(yàn)情況分析

經(jīng)藥敏性試驗(yàn)分析可知，GBS孕婦對(duì)萬古霉素、頭孢噻肟、青霉素、氨芐青霉素的敏感性為100%，而對(duì)克林霉素、阿奇霉素及紅霉素的敏感率分別為58.8%、44.1%及35.2%，見表2。

2.3不同的治療方法對(duì)GBS陽性孕婦妊娠結(jié)局的影響

B組胎兒宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、羊水污染、早產(chǎn)、新生兒肺炎、產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥期感染發(fā)生率低于A組（P<0.05），見表3。

表1　孕婦GBS檢出結(jié)果及GBS感染對(duì)妊娠結(jié)局的影響例（%）

表2　GBS陽性孕婦藥敏性試驗(yàn)情況分析　例（%）

表3　不同治療方法對(duì)GBS陽性孕婦妊娠結(jié)局的影響　例（%）

3　討論

GBS是一種寄生于人類泌尿系統(tǒng)及下消化道的致病菌。研究表明[5]，不同種族、不同地區(qū)的妊娠晚期婦女GBS感染率為6.5%～36.0%。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)告[6]為10.1%～32.4%。本研究中孕婦GBS檢出率為15.89%，與上述報(bào)告相近。由于標(biāo)本培養(yǎng)法容易受到標(biāo)本取樣、運(yùn)送及培養(yǎng)等條件的影響，容易產(chǎn)生假陽性率。實(shí)時(shí)PCR技術(shù)是近年細(xì)菌感染檢測(cè)中的熱門方法，其不僅檢測(cè)時(shí)間段，且準(zhǔn)確率高。為此，本研究對(duì)圍產(chǎn)期孕婦采用PCR技術(shù)檢測(cè)GBS感染情況，以提高研究準(zhǔn)確性。

本研究結(jié)果顯示，GBS陽性組胎兒宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、羊水污染、早產(chǎn)、新生兒肺炎、產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥期感染發(fā)生率高于GBS陰性組（P<0.05），表明圍產(chǎn)期孕婦GBS感染會(huì)增加不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，這與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相一致。GBS是目前國(guó)際公認(rèn)的引起圍產(chǎn)期母嬰不良妊娠結(jié)局的致病菌。當(dāng)孕婦感染GBS后，寄生于泌尿道、陰道及宮頸的病原菌上行感染胎膜，通過細(xì)胞蛋白水解酶及炎癥細(xì)胞吞噬作用侵襲胎膜會(huì)降低胎膜張力，導(dǎo)致胎膜早破[7]。同時(shí)孕婦感染GBS后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子、前列腺素及磷酸酯酶A2釋放，從而刺激子宮收縮，這是GBS陽性孕產(chǎn)婦早產(chǎn)高于GBS陰性孕產(chǎn)婦的原因。此外病原菌可侵入宮腔，引起胎膜感染，并可穿透胎膜使得胎兒感染，增加新生兒肺部感染發(fā)生率，與本文結(jié)果相符。胎膜破裂后其屏障作用消失，GBS可直接上行感染并擴(kuò)散至胎膜及子宮中從而導(dǎo)致宮腔感染，引起胎兒發(fā)育不良，也會(huì)引起絨毛羊膜炎、子宮內(nèi)膜炎、泌尿系統(tǒng)感染等疾病。對(duì)于絨毛膜羊膜炎患者由于其胎盤血管阻力增加而影響胎兒正常血供，導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)窘迫[8]。此外，孕婦感染GBS后會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜損傷，引起產(chǎn)婦宮縮乏力，導(dǎo)致產(chǎn)婦產(chǎn)后出血，并會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)婦產(chǎn)褥期感染[9]。

美國(guó)疾病預(yù)防控制中心對(duì)圍產(chǎn)期GBS感染患者預(yù)防性應(yīng)用抗生素，推薦氨芐青霉素、青霉素G，而對(duì)于青霉素G過敏者可用紅霉素或克林霉素[10]。本研究顯示，GBS孕婦對(duì)萬古霉素、頭孢噻肟、青霉素、氨芐青霉素的敏感性為100%，而對(duì)克林霉素、阿奇霉素及紅霉素的敏感率較低，分別為58.6%、44.5%及34.5%，與國(guó)外文獻(xiàn)[11]的研究結(jié)果一致。GBS對(duì)克林霉素、紅霉素等耐藥主要與其體內(nèi)Elm基因編碼的23rRNA甲基化引起的。近年由于大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥性呈上升趨勢(shì)，因此，臨床用藥時(shí)應(yīng)根據(jù)藥物試驗(yàn)結(jié)果及時(shí)調(diào)整用藥方案，減少菌株耐藥性的產(chǎn)生。既往關(guān)于GBS治療時(shí)機(jī)缺乏統(tǒng)一的指導(dǎo)，認(rèn)為過早對(duì)患者應(yīng)用抗生素藥物會(huì)影響胎兒發(fā)育，因此一般在臨產(chǎn)前及分娩后對(duì)患者用藥[12]。而本研究發(fā)現(xiàn)，盡早對(duì)GBS陽性孕婦用藥能有效降低母嬰不良妊娠結(jié)局。由于本研究所選的孕婦為孕晚期，此時(shí)胎兒腦部發(fā)育基本完成，因此藥物對(duì)胎兒影響較小，不會(huì)對(duì)胎兒產(chǎn)生較大的影響。而對(duì)于早中期孕婦在發(fā)現(xiàn)GBS后即刻采用藥物治療是否對(duì)胎兒產(chǎn)生影響，在日后的研究中還需要進(jìn)一步探討。

綜上所述，GBS感染可增加孕婦不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，在發(fā)現(xiàn)孕婦感染GBS后立刻采用敏感性的抗生素類藥物治療能有效改善孕婦不良妊娠結(jié)局，有利于孕婦預(yù)后。

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（張西倩編輯）

Perinatal infection and drug sensitivity of GBS in pregnant women and their relationships with adverse pregnant outcomes

Jiao-zhen Zhang,Xiao-min Wang,Li-juan Li
(Clinical Laboratory,Haikou Hospital of Chinese Traditional Medicine,Haikou,Hainan 570100,China)

Abstract:Objective To investigate the infection status and drug sensitivity of group B Streptococcus (GBS) in pregnant women,analyze the relationship between GBS infection and adverse pregnancy outcomes,and compare the influence of different treatment regimens on the outcomes of pregnant women with GBS infection.Methods Totally 428 cases of pregnant women with 35-37 weeks pregnancy were selected as the research subjects from January 2014 to October 2014.Vaginal and anal secretions of the pregnant women were collected,and real time quantitative PCR was used to detect GBS infection,and drug resistance test was carried out for the isolated strains.The GBS-positive patients were divided into group A (using sensitive antibiotics intravenously once every 4 hours from the beginning to the end of delivery) and group B (oral antibiotic treatment for 7 d once GBS infection was confirmed,the rest was the same as group A),and the pregnancy outcomes of the two treatment regimens were compared.Results The incidences of intrauterine infection,fetal distress,meconium,premature birth,neonatal pneumonia,postpartum hemorrhage and puerperal infection in the GBS-positive group were significantly higher than those in the GBS-negative group (P < 0.05).GBS-positive maternal sensitivity to Vancomycin,Cefotaxime,Penicillin and Ampicillin was 100%,while the sensitivity rates to Clindamycin,Azithromycin and Erythromycin was lower (58.8%,44.1% and 35.2% re－book=51,ebook=56spectively).The incidences of intrauterine infection,fetal distress,meconium,premature birth,neonatal pneumonia,postpartum hemorrhage and puerperal infection in the group B were significantly lower than those in the group A (P < 0.05).Conclusions GBS infection can increase the incidence of adverse pregnancy outcomes in pregnant women.Use of sensitive antibiotics immediately after diagnosis of GBS infection can effectively improve pregnancy outcomes.

Keywords:perinatal pregnant woman; group B Streptococcus; susceptibility test; adverse pregnancy outcome

收稿日期：2015-12-25

文章編號(hào)：1005-8982（2016）06-0050-04

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.06.011

中圖分類號(hào)：R714.2；R378.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A