顧 玉吳春園

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高效液相色譜梯度洗脫法測定十味蒂達(dá)膠囊中的松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的含量

顧 玉1吳春園2

【摘要】目的 采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫法建立同時(shí)測定十味蒂達(dá)膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯含量的方法。方法 采用C(18)色譜柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1.2 ml/min；以乙腈-甲醇（2:3）作為流動(dòng)相A，以1%冰醋酸溶液作為流動(dòng)相B，按規(guī)定程序進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長：松果菊苷為334 nm，木香烴內(nèi)酯為225 nm，柱溫為25 ℃。結(jié)果 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別在23.24～464.80 μg/ml（r=0.9994）、19.47～389.40 μg/ml（r=0.9998）時(shí)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系；松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的平均加樣回收率分別為99.27%、96.85%，RSD（n=6）分別為1.08%、0.59%。結(jié)論 該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可作為十味蒂達(dá)膠囊的含量測定控制方法。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜；梯度洗脫法；十味蒂達(dá)膠囊；松果菊苷；木香烴內(nèi)酯；洪連；木香

1無錫市精神衛(wèi)生中心，江蘇無錫 214151

2常州市新北區(qū)三井人民醫(yī)院，江蘇常州 213022

十味蒂達(dá)膠囊是由洪連、木香、蒂達(dá)、榜嘎、波棱瓜子、角茴香、苦賣菜、金腰草、小檗皮和熊膽粉等10味藥物加工而成的中藥復(fù)方制劑，具有疏肝理氣、清熱解毒、利膽溶石的作用，是治療肝膽濕熱所致肋痛，癥見右上腹鈍痛或絞痛，口苦，惡心，噯氣，泛酸，腹脹，慢性膽囊炎或膽石癥見上述癥候的首選藥物[1]。本研究采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫法對十味蒂達(dá)膠囊中洪連[2]中松果菊苷和木香[2]所含木香烴內(nèi)酯進(jìn)行定量檢測，為進(jìn)一步控制十味蒂達(dá)膠囊的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 安捷倫Agilent 1200型高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站；依利特C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm）；松果菊苷對照品（111670-201304，含量以97.1%計(jì)）、木香烴內(nèi)酯（111524-201208，含量以99.5%計(jì)）均購于中國食品藥品檢定研究院；十味蒂達(dá)膠囊（每粒裝0.45g；批號(hào)為140503、141203、150202）購于西藏諾迪康藥業(yè)股份有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，冰醋酸為分析純。

1.2 色譜條件 試驗(yàn)過程中以乙腈-甲醇（2:3）作為流動(dòng)相A，以1%冰醋酸溶液作為流動(dòng)相B[2-3]，按照規(guī)定程序進(jìn)行梯度洗脫（0～8 min，20.0%A；9～20 min，20.0%升至35.0%A；21～35 min，35.0%A升至50.0%A；36～40 min，50.0%A降至20.0%A）；所測組分檢測波長為：0～20 min，λ1=334 nm[3-4]；21～40 min，λ2=225 nm[5-7]；流速為1.2 ml/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量為20 μl。此系統(tǒng)條件下松果菊苷、木香烴內(nèi)酯與其他組分分離效果較好，理論塔板數(shù)按照松果菊苷、木香烴內(nèi)酯計(jì)均應(yīng)不得低于2500，分離度均應(yīng)大于1.5。

1.3 混合對照品溶液的配制 分別精密稱取松果菊苷對照品和木香烴內(nèi)酯對照品適量，加80%甲醇制成質(zhì)量濃度分別為2.324、1.947 mg/ml的對照品儲(chǔ)備液。再精密吸取配制成的對照品儲(chǔ)備液，加80%甲醇制成松果菊苷和木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別為0.1162、0.1947 mg/ml的混合對照品溶液。

1.4 供試品溶液的制備 取十味蒂達(dá)膠囊適量，取出其內(nèi)容物，研磨成細(xì)粉，取約1.0 g，對其精密稱定，置50 ml量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，超聲處理30 min，放冷，采用80%甲醇補(bǔ)充至刻度，振搖均勻，過濾，即得續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.5 陰性樣品溶液的制備 按照十味蒂達(dá)膠囊的處方要求，分別稱取除洪連的其余藥味和除木香的其余藥味各1份，參照十味蒂達(dá)膠囊的制備工藝方法，分別制成洪連空白樣品和木香空白樣品，按照1.4項(xiàng)下所描述的供試品溶液制備方法制成洪連空白溶液和木香空白溶液。

2 結(jié)果

2.1 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取供試品溶液、混合對照品溶液、洪連空白溶液及木香空白溶液，進(jìn)樣量為20 μl，依法測定，結(jié)果顯示：在與所測組分對照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間，樣品色譜圖中有對應(yīng)吸收峰；而洪連空白溶液圖譜上未顯示松果菊苷的吸收峰；木香空白溶液圖譜上未顯示木香烴內(nèi)酯的吸收峰，見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，處方中其他藥味對檢測結(jié)果無影響。

圖1 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的HPLC圖注：1松果菊苷;2木香烴內(nèi)酯;A對照品;B樣品;C陰性對照品

2.2 線性關(guān)系考察 精密量取松果菊苷儲(chǔ)備液、木香烴內(nèi)酯儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，分別置于5個(gè)10 ml的容量瓶中，加80%甲醇制成系列濃度的混合對照品溶液，依法測定，以峰面積A與對照品質(zhì)量濃度C，得松果菊苷回歸方程為：A= 3.1057×106C+315.8，r=0.9994，線性范圍為23.24～464.80 μg/ml；木香烴內(nèi)酯A=5.9516×106C+265.8，r=0.9998，線性范圍為19.47～389.40 μg/ml。結(jié)果表明：松果菊苷和木香烴內(nèi)酯在各自的線性范圍內(nèi)，呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取松果菊苷0.1162 mg/ml、木香烴內(nèi)酯0.1947 mg/ml的混合對照品溶液20 μl，連續(xù)6次注入高效液相色譜儀中，測得松果菊苷和木香烴內(nèi)酯峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.29%、0.87%。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的十味蒂達(dá)膠囊，按1.4項(xiàng)下方法制成6份供試品溶液，在上述條件依法進(jìn)樣測定，計(jì)算各成分含量和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的RSD分別為0.96%、1.05%。

表1 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯回收率試驗(yàn)

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一批號(hào)十味蒂達(dá)膠囊的供試品溶液，分別于即刻、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣20 μl測定，測得松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的RSD分別為1.31%、0.75%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取十味蒂達(dá)膠囊（松果菊苷為6.48 mg/g，木香烴內(nèi)酯為9.56 mg/g）適量，取出其內(nèi)容物，研磨成細(xì)粉，取約0.5 g，對其精密稱定，置50 ml量瓶中，加入混合對照品溶液25 ml，采用80%甲醇稀釋至刻度，采用超聲波超聲提取30 min，放冷，采用80%甲醇補(bǔ)充至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為加樣供試品試液。依法進(jìn)樣測定，平均加樣回收率及RSD見表1。

2.7 樣品的含量測定 取3個(gè)批號(hào)的樣品，按供試品制備方法，在上述色譜條件下測定本品中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的含量，結(jié)果見表2。

表2 3個(gè)批號(hào)樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

洪連系藏族習(xí)用藥材，為玄參科植物短筒兔耳草的干燥全草，具有清熱、解毒、利濕、平肝、行血、調(diào)經(jīng)的功效；木香為菊科植物木香的干燥根，具有行氣止痛，健脾消食的功效。松果菊苷為洪連的主要成分，木香烴內(nèi)酯為木香的主要成分。本研究采用HPLC梯度洗脫法對十味蒂達(dá)膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯進(jìn)行定量控制研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可作為十味蒂達(dá)膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的控制方法。

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作者簡介：顧玉（1981.11-），主管藥師。主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究工作。Email：guyuxueshu@163.com

【中圖分類號(hào)】R927.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.005