姜茁松,李井濤

(吉林省藥品檢驗(yàn)所,長(zhǎng)春 130033)

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HPLC法測(cè)定北敗醬中綠原酸含量

姜茁松,李井濤*

(吉林省藥品檢驗(yàn)所,長(zhǎng)春 130033)

摘要：目的建立HPLC法測(cè)定北敗醬中綠原酸含量的方法。方法采用色譜柱Diamonsil(5 μm，4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm；流速1.0 mL/min；柱溫35 ℃。結(jié)果綠原酸在0.04～0.36 μg(r=0.999 5)范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，加樣回收率(n=6)為99.27%(RSD=1.03%)。結(jié)論本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為評(píng)價(jià)北敗醬的質(zhì)控方法。

關(guān)鍵詞：北敗醬；綠原酸；高效液相色譜；綠原酸

北敗醬BeibaijiangIxerischinensis(Thunb Nakai)，別名中華苦菜，山苦菜，屬菊科植物。全草入藥，性寒味苦，既可藥用又可食用。在我國(guó)北方地區(qū)常作“敗醬草”使用，因此稱北敗醬。據(jù)報(bào)道[1-5]，北敗醬全草含有多種有機(jī)酸類和黃酮類化合物，其中黃酮類分離的有槲皮素、異鼠李素。而綠原酸成分多存在于葉類植物中，有清熱解毒、祛瘀排膿的功效。目前對(duì)其有效成分研究的報(bào)道鮮見，本研究對(duì)吉林省道地藥材北敗醬進(jìn)行了檢測(cè)，建立了北敗醬中綠原酸成分的鑒別、測(cè)定方法，從而為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定提供了依據(jù)。

1材料

Agilent 1200型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；島津UV-2550型紫外-可見分光光度計(jì)；AL204-IC型電子分析天平(十萬分之一)。對(duì)照品：綠原酸(110753-200413)，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸餾水。北敗醬購(gòu)自吉林省北藥藥材公司(采自吉林省通化市)，經(jīng)鑒定，為菊科植物北敗醬干燥全草。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 對(duì)綠原酸對(duì)照品最大吸收進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示溶液在326 nm處有最大吸收。綜合參考《中國(guó)藥典》2010年版金銀花項(xiàng)下綠原酸含量測(cè)定的方法，故確定327 nm為本法的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3溶液的制備

2.3.1對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品10 mg，用70%甲醇溶解到25 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，再取1 mL溶液用70%甲醇稀釋到10 mL，搖勻，過0.45 μm濾膜，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取藥材粉末2.5 g，加70%甲醇50 mL，超聲處理40 min，濾過，于沸水浴鍋上蒸干，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用70%甲醇定容，取續(xù)濾液，搖勻，過0.45 μm濾膜，即得。2.4線性關(guān)系考察 分別精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液(0.04 mg/mL)1、3、5、7、9 μL，注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算回歸方程：A=1 616.1X+19.905，r=0.999 5。結(jié)果表明：綠原酸在0.04～0.36 μg范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液5 μL,注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測(cè)定其峰面積(RSD=0.96%)。表明精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，分別在0、1、2、8、24 h進(jìn)樣，記錄色譜峰的峰面積。結(jié)果RSD為0.26%。表明在24 h內(nèi)，供試品溶液中綠原酸的含量比較穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取供試品粉末，以2.3.2方法獨(dú)立測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.10%。表明該方法重現(xiàn)性好。

2.8回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取同法測(cè)定已知含量的供試品6份，加70%甲醇50 mL，超聲處理40 min，濾過，蒸干，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，分別加入綠原酸對(duì)照品0.20、0.40 mg，用70%甲醇定容，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果回收率為99.54%(RSD=0.96%)。表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度高。

2.9樣品測(cè)定[6-8]取不同產(chǎn)地的藥材粉末，依2.3.2 方法測(cè)定，用外標(biāo)法測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地藥材中綠原酸的含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1　 綠原酸的含量測(cè)定(n=4) 　mg/g

3結(jié)論

通過對(duì)乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)和甲醇- 0.4%磷酸溶液(13∶87)不同流動(dòng)相的研究比較，結(jié)果顯示前者峰型和分離均比較好；對(duì)乙腈-0.4%磷酸溶液的不同比例考察結(jié)果表明：乙腈-0.4%磷酸溶液比例為13∶87時(shí)基線分離徹底，理論版數(shù)較高。故選用乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)作為流動(dòng)相。

對(duì)樣品分別進(jìn)行了超聲20、30、40 min的提取，結(jié)果表明超聲40 min時(shí)提取比較完全，因此，選擇40 min作為提取處理時(shí)間。

本研究還分別對(duì)高效液相色譜儀(Agilent1200、島津2010CHT)和Alttima、Diamonsil、Appllo的C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱進(jìn)行了耐用性試驗(yàn)的考察，結(jié)果表明，選用的兩個(gè)廠家的儀器和3種色譜柱均達(dá)到系統(tǒng)適用性的要求。

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Determination of chlorogenic acid in ixeris chinensis by HPLC

JIANG Zhuosong,LI Jingtao*

(Drug Determination Department In JiLin,ChangChun 130033,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid in Ixeris Chinensis by HPLC.MethodsA column of Diamonsil (5 μm，4.6 mm ×250 mm) was adopted,and the mobile phase was the mixture of acetonitrile-0.4% phosphoric acd and water(13∶87)at a flow rate of 1.0 mL/min;The wavelength was set at 327nm.ResultsThere was a good linear relationship in the concentration range of 0.04～0.36 μg(r=0.999 5)of chlorogenic acid;The average recovery (n=6) was 99.27%(RSD=1.03%).ConclusionThe method is simple，accurate，and can be used for the quantitative analysis of Ixeris Chinensis.

Keywords：ixeris chinensis;chlorogenic acid;HPLC;DAD

(收稿日期:2015-12-30)

文章編號(hào)：2095-6258(2016)02-0259-02

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

*通信作者：李井濤,電話-17790006880,電子信箱-13514472003@126.com

作者簡(jiǎn)介：姜茁松(1967-)，女，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)研究。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.02.013