楊文秀，李品浩，陳　琴，裴媛媛

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽(yáng)　550004)

?

IL-6對(duì)Raji和OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)影響的分子機(jī)制*＊?

楊文秀，李品浩，陳琴，裴媛媛

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽(yáng)550004)

［摘要］目的:觀察白介素-6(IL-6)對(duì)伯基特淋巴瘤(BL) Raji細(xì)胞和彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL) OCILY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，探討信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄活化-3(STAT3)及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)分子在BL和DLBCL中發(fā)生發(fā)展的作用及其相互關(guān)系。方法:用不同濃度的IL-6(0、50、100、150及200 μg/L)分別培養(yǎng)Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞24 h、48 h及72 h(分別為對(duì)照組和不同濃度IL-6試驗(yàn)組)，用MTT法檢查2株細(xì)胞生長(zhǎng)情況，用RT-qPCR檢測(cè)培養(yǎng)48 h時(shí)2株細(xì)胞STAT3、TIMP-1的mRNA表達(dá)，用Western blot檢測(cè)100 μg/L IL-6培養(yǎng)48 h時(shí)Raji細(xì)胞的STAT3、p-STAT3及TIMP-1蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)100 μg/L IL-6培養(yǎng)48 h 時(shí)2株細(xì)胞的細(xì)胞周期變化。結(jié)果:與相應(yīng)的對(duì)照組比較，不同濃度IL-6試驗(yàn)組2株細(xì)胞在A490nm處OD值明顯降低，呈現(xiàn)藥物濃度依賴關(guān)系(P＜0.01) ; 2株細(xì)胞內(nèi)的STAT3，TIMP-1的mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系(P＜0.05)，2株細(xì)胞內(nèi)TIMP-1與STAT3的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r =0.982，P = 0.018) ; IL-6組Raji細(xì)胞中p-STAT3、STAT3和TIMP-1蛋白表達(dá)增高; IL-6組Raji和OCI-LY8細(xì)胞的G1期細(xì)胞都明顯減少、S期細(xì)胞明顯增多(P＜0.05)，G2-M期的Raji細(xì)胞無(wú)明顯變化而OCI-LY8細(xì)胞則明顯增多(P = 0.037)。結(jié)論: IL-6對(duì)Raji細(xì)胞和OCI-ly8細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯作用，STAT3活化及其下游靶基因TIMP-1的上調(diào)表達(dá)可能是IL-6影響2株細(xì)胞生長(zhǎng)的重要分子機(jī)制。

［關(guān)鍵詞］淋巴瘤，B細(xì)胞;伯基特淋巴瘤;細(xì)胞培養(yǎng);信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄活化子-3;基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1;白細(xì)胞介素-6

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2016－02－23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.1909.022.html

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄活化子3(single transducer and transcription activater-3，STAT3)是STATS家族的重要成員，多項(xiàng)臨床研究發(fā)現(xiàn)，肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等腫瘤中STAT3活性均發(fā)生高頻率的異?；罨?，且活化程度與患者的預(yù)后呈顯著負(fù)相關(guān)［1－4］。STAT3是EGFR、IL-6/JAK、Src等多個(gè)致癌性酪氨酸激酶信號(hào)通道的匯聚焦點(diǎn)［5］，阻斷STAT3傳導(dǎo)通路可以阻斷多種腫瘤發(fā)生的機(jī)制。近年來(lái)，以STAT3為靶點(diǎn)的腫瘤治療研究逐漸成為腫瘤基因治療研究的熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道，伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma，BL)和彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)中存在STAT3分子的異常，但其活化對(duì)BL和DLBCL影響的分子機(jī)制尚未完全清楚［6－7］。本研究觀察了STAT3激動(dòng)劑白介素-6(interleukin-6，IL-6)對(duì)BLRaji細(xì)胞和DLBCL-OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，并進(jìn)一步探討了STAT3和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1 (tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1)的活化是否是藥物作用的分子機(jī)制，為臨床治療BL和DLBCL尋找可能的基因靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

BL-Raji細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，DLBCL-OCI-LY8細(xì)胞株由復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院周曉燕教授惠贈(zèng)。細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640購(gòu)自Hyclone公司，總RNA試劑盒購(gòu)自上海碧云天公司，RTPCR試劑盒購(gòu)自Invitrogen公司，抗STAT3(單克隆抗體)、抗TIMP-1和抗β-actin抗體購(gòu)自Santa Cruz公司，抗p-STAT3抗體購(gòu)自CST公司，IL-6購(gòu)自Pepro TECH公司，PCR引物由上海生工合成。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和分組分別將Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞置于RPMI1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素)及混合培養(yǎng)基(含 10%胎牛血清、90% IMDM和1%雙抗)中，在37℃、5% CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d換液1次，待細(xì)胞計(jì)數(shù)＞1×106/mL時(shí)，按1∶2～1∶3傳代培養(yǎng)。收集細(xì)胞并調(diào)節(jié)濃度為2× 105/mL，2株細(xì)胞分別加入不同濃度的IL-6(0、50、100、150及200 μg/L)，分別為對(duì)照組和不同IL-6濃度試驗(yàn)組，繼續(xù)培養(yǎng)24、48及72 h。

1.2.2檢測(cè)細(xì)胞活力用MTT法對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活力進(jìn)行檢測(cè)。分別于培養(yǎng)24、48及72 h后收集對(duì)照組和不同IL-6濃度試驗(yàn)組的Raji和OCI-ly8細(xì)胞，再于無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，同步化后于96孔板布板。每孔加入0.5% MTT 20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，加入三聯(lián)溶劑(SDS 10 g +異丁醇5 mL + 10 mol/L HCl 0.1 mL，用雙蒸水溶解配成100 mL溶液) 150 μL，置搖床上低速振蕩10 min。鏡下觀察結(jié)晶物充分溶解后在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm處測(cè)量各孔的吸光值A(chǔ)。每組5個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3檢測(cè)STAT3和TIMP-1的mRNA按試劑盒說(shuō)明提取細(xì)胞mRNA，檢測(cè)mRNA 260/280光密度比值。RT-qPCR擴(kuò)增檢測(cè)STAT3和TIMP-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量。PCR循環(huán)參數(shù): 95℃10 min、90℃15 s、60℃1 min，40個(gè)循環(huán)。結(jié)果用2－ΔΔCT表示，以β-actin作為內(nèi)參照。mRNA相對(duì)表達(dá)量2－ΔΔCt= 2－［實(shí)驗(yàn)組(Ct目的基因－Ct管家基因)－對(duì)照(Ct目的基因－Ct管家基因)］。PCR引物序列和產(chǎn)物見(jiàn)表1。

表1　RT-qPCR引物序列及相應(yīng)產(chǎn)物Tab.1　The sequences of the primers for RT-qPCR and corresponding products

1.2.4 STAT3、p-STAT3和TIMP-1蛋白表達(dá)IL-6的最佳作用濃度取100 μg/L，收集該濃度下培養(yǎng)48 h足量的Raji細(xì)胞，用PBS洗滌3次后，加入一定量的細(xì)胞裂解液及蛋白酶抑制劑，冰上不時(shí)振蕩充分裂解30 min，12 000 r/m離心5 min后取上清液。蛋白樣品采用BCA法進(jìn)行定量后，進(jìn)行PAGE凝膠電泳，每孔上樣30 mg，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜上，用5% BSA封閉p-STAT3、5%脫脂牛奶封閉其他目的蛋白后，分別加一抗孵育過(guò)夜(稀釋度:抗STAT3、抗p-STAT3、抗TIMP-1均為1∶500，抗β-actin為1∶1 000)，二抗稀釋比例為1∶5 000，洗膜，加辣根過(guò)氧化酶偶聯(lián)的二抗孵育1.5 h、再洗膜。加ECL發(fā)光液顯色，暗室曝光，得到STAT3、p-STAT3和TIMP-1的條帶膠片，膠片掃描后用Gelpro32軟件分析。

1.2.5檢測(cè)細(xì)胞周期分別將Raji細(xì)胞和OCILY8細(xì)胞以70 000 mL接種于6孔板中，加入最佳作用濃度(100 μg/L)的IL-6培養(yǎng)48 h后，收集Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包。STAT3，TIMP-1 的mRNA及蛋白表達(dá)水平采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，藥物作用的多組間比較采用單因素方差分析，多組間均數(shù)的兩兩比較采用SNK q檢驗(yàn)，多組均數(shù)與一個(gè)對(duì)照樣本均數(shù)比較采用Dunnett t檢驗(yàn)。各藥物濃度組間兩分子表達(dá)之間的關(guān)系及分子表與藥物濃度的相關(guān)性關(guān)系采用Pearson相關(guān)性分析，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1細(xì)胞活力

與相應(yīng)的對(duì)照組比較，Raji細(xì)胞及OCI-LY8細(xì)胞490 nm處吸光度值在加入IL-6培養(yǎng)后顯著增高(P＜0.05)。Raji和OCI-LY8細(xì)胞吸光度值與IL-6呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系，r和P依次為0.966、0.008及0.959、0.010。見(jiàn)圖1。

2.2 STAT3 mRNA和TIMP-1mRNA

各組細(xì)胞mRNA的A260/A280光密度比值為1.8～2.0，符合后續(xù)試驗(yàn)要求。RT-qPCR結(jié)果顯示，與相應(yīng)的對(duì)照組比較，2株細(xì)胞的試驗(yàn)組STAT3，TIMP-1的mRNA表達(dá)明顯升高，不同IL-6濃度試驗(yàn)組Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞之間STAT3 和TIMP-1的mRNA表達(dá)均有顯著差異(P＜0.05)，且2種基因mRNA表達(dá)都呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系(Raji細(xì)胞IL6與STAT3 r = 0.979，P = 0.021，IL-6與TIMP-1 r = 0.981，P = 0.019; OCILY8細(xì)胞IL6與STAT3 r = 0.996，P = 0.004，IL-6 與TIMP-1 r =0.973，P =0.027)。2株細(xì)胞TIMP-1與STAT3的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r = 0.961、0.998，P =0.039、0.002)。見(jiàn)表2。

2.3 Raji細(xì)胞p-STAT3、STAT3及TIMP-1蛋白

與對(duì)照組比較，100 μg/L IL-6培養(yǎng)48 h時(shí)的Raji細(xì)胞p-STAT3及STAT3蛋白升高，P分別為0.026、0.001，見(jiàn)圖2。

2.4細(xì)胞周期

Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞G0/G1、S、G2-M各周期的細(xì)胞百分率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P =0.001、P =0.001、P =0.000)。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組Raji和OCI-LY8細(xì)胞的G1期細(xì)胞都明顯減少(P = 0.031和P = 0.019)，S期細(xì)胞明顯增多(P = 0.038和P = 0.034)，G2-M期的Raji細(xì)胞無(wú)明顯變化(P = 0.63)，G2-M期的OCI-LY8細(xì)胞則明顯增多(P =0.037)。見(jiàn)表3。

表2　不同濃度IL-6培養(yǎng)Raji和OCI-LY8細(xì)胞48 h時(shí)STAT3 mRNA及TIMP-1 mRNA水平Tab.2 The mRNA expressions of STAT3 and TIMP-1 in the Raji and OCI-LY8 cells treated with IL-6 for 48 h

表3　100 μg/L IL-6培養(yǎng)Raji和OCI-LY8細(xì)胞48 h時(shí)的細(xì)胞周期變化(±s)Tab.3 Propotion of the cell cycle in OCI-LY8 and the Raji cells cultured with 100 μg/L IL-6

表3　100 μg/L IL-6培養(yǎng)Raji和OCI-LY8細(xì)胞48 h時(shí)的細(xì)胞周期變化(±s)Tab.3 Propotion of the cell cycle in OCI-LY8 and the Raji cells cultured with 100 μg/L IL-6

(1)與相應(yīng)對(duì)照組比較，P＜0.05

細(xì)胞　　分組　　細(xì)胞周期細(xì)胞(%) G1　S　G2/M Raji　 Control 46.51±2.03　 44.31±1.01　 9.18±1 16.59±1.89 .90 IL-6　 40.81±2.29(1)49.94±2.59(1)9.25±1.71 OCI-LY8　 Control 55.74±2.55　 30.42±2.27　 13.88±0.40 IL-6　 49.02±1.91(1)34.39±2.09(1)

圖1　IL-6對(duì)Raji、OCI-LY8細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Fig.1　The effects of IL-6 at different concentrations for different times on the growth of the two kind of cells

圖2　100 μg/L IL-6培養(yǎng)48 h時(shí)Raji細(xì)胞中STAT3、p-STAT3、TIMP-1蛋白表達(dá)Fig.2 The protein levels of STAT3，p-STAT3 and TIMP-1 in the Raji cells with 100 μg/L IL-6

3　討論

有研究發(fā)現(xiàn)，JAK/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路持續(xù)激活可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖或惡性轉(zhuǎn)化，該通路在侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用［8－10］。用該通路的抑制劑可抑制STAT3在侵襲性惡性淋巴瘤細(xì)胞系中的活性。TIMP-1是基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)家族中的一員。TIMPS是一個(gè)多基因家族編碼蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)的內(nèi)源性特異性抑制因子。關(guān)于TIMP-1的研究，一方面認(rèn)為它具有抗有絲分裂的活性，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增生，能與基質(zhì)膠原酶、基質(zhì)分解素及明膠酶(主要是明膠酶B)形成可逆的復(fù)合物，通過(guò)抑制MMPs的活化及其對(duì)ECM的降解、抑制ECM中相關(guān)凋亡蛋白的釋放，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的功能［11］。還有研究認(rèn)為，TIMP-1作為一種轉(zhuǎn)錄抑制劑抑制MMPs基因的轉(zhuǎn)錄;另一方面TIMP-1位于JAK/STAT信號(hào)通路的下游，其表達(dá)受JAK/STAT信號(hào)通路調(diào)控。后者可通過(guò)上調(diào)TIMP-1的表達(dá)而抑制大鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡［12］。近年來(lái)，在人紅白血病細(xì)胞研究中又發(fā)現(xiàn)TIMP-1和JAK/STAT存在雙向調(diào)控作用［13］。在肝的纖維化研究中發(fā)現(xiàn)敲除STAT3基因之后，CCl4導(dǎo)致的肝纖維化中TIMP-1的高表達(dá)消失［14］。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，TIMP-1可以由淋巴瘤細(xì)胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生，通過(guò)B細(xì)胞生長(zhǎng)分化因子IL-10以及原癌基因bcl-xL來(lái)抑制細(xì)胞程序性死亡，從而延長(zhǎng)正常扁桃體B細(xì)胞、Burkitt淋巴瘤細(xì)胞的壽命［15］。還有研究發(fā)現(xiàn)TIMP-1與非霍奇金淋巴瘤的臨床分級(jí)相關(guān)。

IL-6是IL-6/JAK信號(hào)通路的激活劑［16－17］，激活JAK后可促進(jìn)STAT3的表達(dá)及磷酸化，以磷酸化二聚體的形式進(jìn)入細(xì)胞核，與下游凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控基因、基質(zhì)金屬蛋白酶等靶基因的啟動(dòng)子結(jié)合，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖凋亡和遷移等過(guò)程。本研究在培養(yǎng)的Raji和OCI-LY8細(xì)胞中分別加入不同濃度的IL-6后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)活力增強(qiáng)，呈現(xiàn)出藥物濃度依賴關(guān)系。2株細(xì)胞G1期均體現(xiàn)出減少的趨勢(shì)，S期細(xì)胞明顯增多，處于G2-M的Raji細(xì)胞無(wú)明顯改變，而OCI-ly8細(xì)胞明顯增多。這表明JAK/STAT3信號(hào)通路對(duì)Raji和OCI-LY8細(xì)胞的生長(zhǎng)可能有明顯的影響。進(jìn)一步探討IL-6影響2株細(xì)胞生長(zhǎng)的相關(guān)分子機(jī)制，本研究檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)STAT3和TIMP-1的mRNA及蛋白表達(dá)情況。Raji細(xì)胞和OCI-LY8細(xì)胞內(nèi)STAT3基因的mRNA表達(dá)水平隨著IL-6濃度的增加而增高，TIMP-1和STAT3的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。在IL-6作用48 h后Raji細(xì)胞內(nèi)p-STAT3，STAT3和TIMP-1蛋白表達(dá)明顯升高，三者變化趨勢(shì)一致。提示IL-6作用下，TIMP-1蛋白的表達(dá)可能與STAT3的活化有關(guān)。

綜上，IL6能顯著促進(jìn)淋巴瘤Raji及OCI-LY8細(xì)胞的生長(zhǎng)，并促進(jìn)細(xì)胞周期的運(yùn)行。其作用可能與細(xì)胞內(nèi)STAT3分子活化有關(guān)，細(xì)胞內(nèi)TIMP-1的上調(diào)表達(dá)也可能是IL-6活化STAT3的結(jié)果。2種細(xì)胞內(nèi)STAT3的活化及其引起的TIMP-1的表達(dá)上調(diào)可能是IL-6影響淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的重要機(jī)制，這可能是Burkitt和DLBCL淋巴瘤治療的新思路。

4　參考文獻(xiàn)

［1］Morikawa T，Baba Y，Yamauchi M，et al.STAT3 expression，molecular features，inflammation patterns，and prognosis in a database of 724 colorectal cancers［J］.Clin Cancer Res，2011(6) : 1452－1462.

［2］Grivennikov S，Karin E，Terzic J，et al.IL-6 and STAT3 are required for survival of intestinal epithelial cells and development of colitis-associated cancer［J］.Cancer Cell，2009(2) : 103－113.

［3］Berishaj M，Gao SP，Ahmed S，et al.STAT3 is tyrosinephosphorylated through the interleukin-6/glycoprotein 130/Janus kinase pathway in breast cancer［J］.Breast Cancer Res，2007(3) : R32.

［4］Kim DY，Cha ST，Ahn DH，et al.STAT3 expression in gastric cancer indicates a poor prognosis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2009(4) : 646－651.

［5］侯嘉杰，孫倍成.STAT3:慢性炎癥介導(dǎo)腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)［J］.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2014 (1) : 69－78.

［6］Soldini D，Montagna C，Schüffler P，et al.A new diagnostic algorithm for Burkitt and diffuse large B-cell lymphomas based on the expression of CSE1L and STAT3 and on MYC rearrangement predicts outcome［J］.Ann Oncol，2013(1) : 193－201.

［7］Mizowaki T，Sasayama T，Tanaka K，et al.STAT3 activation is associated with cerebrospinal fluid interleukin-10 (IL-10) in primary central nervous system diffuse large B cell lymphoma［J］.Journal of neuro-oncology，2015(2) : 165－74.

［8］Al Zaid Siddiquee K，Turkson J.STAT3 as a target for inducing apoptosis in solid and hematological tumors［J］.Cell Res，2008(2) : 254－67.

［9］Siveen KS，Sikka S，Surana R，et al.Targeting the STAT3 signaling pathway in cancer: role of synthetic and natural inhibitors［J］.Biochim Biophys Acta，2014(2) : 136-154.

［10］Lam LT，Wright G，Davis RE，et al.Cooperative signaling through the signal transducer and activator of transcription 3 and nuclear factor-κB pathways in subtypes of diffuse large B-cell lymphoma［J］.Blood，2008 (7) : 3701－3713.

［11］Udayakumar TS，Stratton MS，Nagle RB，et al.Fibroblast growth factor-1 induced promatrilysin expression through the activation of extracellular-regulate kinases and STAT3［J］.Neoplasia，2002(4) : 60－67.

［12］溫文斌，林洪麗，吳泰華，等.JAK/STAT通路在金屬蛋白酶1組織抑制劑抑制腎小球系膜細(xì)胞凋亡中的作用［J］.中華腎臟病雜志，2008(1) : 24－29.

［13］Lambert E，Boudot C，Kadri Z，et al.Tissue inhibitor of metalloproteinases-1 signalling pathway leading to erythroid cell survival［J］.Biochem J，2003 (3) : 767－774.

［14］Wang H，Lafdil F，Wang L，et al.Tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) deficiency exacerbates carbon tetrachloride-induced liver injury and fibrosis in mice: involvement of hepatocyte STAT3 in TIMP-1 production［J］.Cell＆bioscience，2011(1) : 14.

［15］樊嶸，金冶寧.TIMP-1在乳腺癌中的作用機(jī)制和臨床意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009(1) : 154－158.

［16］Garbers C，Aparicio-Siegmund S，Rose-John S.The IL-6/gp130/STAT3 signaling axis: recent advances towards specific inhibition［J］.Curr Opin Immunol，2015 (34C) : 75－82.

［17］Munoz J，Dhillon N，Janku F，et al.STAT3 inhibitors: finding a home in lymphoma and leukemia［J］.Oncologist，2014(5) : 536－544.

(2015－12－20收稿，2015－12－31修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:趙毅

Molecular Mechanism of IL-6 Effect on the Growth of Two Lymphoma Cells

YANG Wenxiu，LI Pinhao，CHEN Qin，PEI Yuanyuan
(Department of Pathology，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To observe the effects of IL-6 (interleukin-6) on the growth of Burkitt lymphoma (BL) cell line Raji and Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) cell line OCI-LY8，and to investigate their effect on cellular growth and the relationship between changes of STAT3 (single transducer and transcription activater-3) and TIMP-1 (tissue inhibitors of metalloproteinase-1) expression.

［Key words］lymphoma，B cell; Burkitt lymphoma; cell culture; single transducer and transcription activator-3; tissue inhibitors of metalloproteinase-1; interleukin-6

*［基金項(xiàng)目］國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81160299) ;貴州省優(yōu)秀人才省長(zhǎng)基金(No.2011.125)

［中圖分類號(hào)］R559; R34

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1000-2707(2016) 02-0125-05

Methods: Raji and OCI-LY8 cells were cultured by varied concentration of IL-6(0 g/L，50 g/L，100 g/L，150 g/L and 200 g/L) for 24 h，48 h and 72 h.Viability of 2 strains of cells was measured by MTT.The mRNA expressions of STAT3 and TIMP-1 of 2 strains of cells were detected by RT-PCR，and p-STAT3，STAT3 and TIMP-1 protein expression of Raji cell cultivated by 100 g/L IL-6 for 48 h were detected by Western blotting.Cell cycle was examined by flow cytometry.Results: Comparing with control group，OD value at 490 nm decreased the two strain of cells treated by varied concentration of IL-6.It was presented concentration-dependence relationship(P＜0.01) ; mRNA expressions of STAT3 and TIMP-1 in both cells exhibited positive correlation (r = 0.982，P = 0.018) ; protein expression of p-STAT3，STAT3 and TIMP-1 of Raji cells in IL-6 groups increased.Cells were distinctly reduced at phase G1 and increased at phase S in two types of cell of IL-6(P＜0.05).The Raji cell atphase G2-M showed no significant change while OCI-LY8 cells increased significantly(P = 0.037).Conclusions: IL-6 has an obvious effect on the growth of Raji and OCI-LY8 cell.The activation of STAT3 and up-regulated expression of TIMP-1 might be important molecular mechanism for promoting the viability of Burkitt and DLBCL cell.