余夢(mèng)懿，成元華＊＊，申九妹，孫　博

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽(yáng)　550004; 2.廈門(mén)市中醫(yī)院病理科，福建廈門(mén)　361009; 3.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州貴陽(yáng)　550004)

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肝細(xì)胞癌中胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體的表達(dá)及意義*＊?

余夢(mèng)懿1，成元華1＊＊，申九妹2，孫博3

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，貴州貴陽(yáng)550004; 2.廈門(mén)市中醫(yī)院病理科，福建廈門(mén)361009; 3.貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州貴陽(yáng)550004)

［摘要］目的:探討胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)在肝細(xì)胞癌(HCC)中的表達(dá)及意義。方法:采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測(cè)HCC病例癌組織及配對(duì)癌旁組織中IGF-1R的蛋白表達(dá)，分析IGF-1R表達(dá)水平與HCC患者臨床病理特征及微血管密度(MVD)的關(guān)系，同時(shí)隨訪觀察不同IGF-1R表達(dá)水平或MVD計(jì)數(shù)HCC患者的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡率。結(jié)果: HCC癌組織中IGF-1R蛋白表達(dá)水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ; IGF-1R高表達(dá)的HCC中，有血管浸潤(rùn)、病理分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)、臨床TNMⅡ～Ⅲ期患者人數(shù)多于IGF-1R低表達(dá)人數(shù)(P＜0.05) ;癌組織中MVD值明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001) ;經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示IGF-1R蛋白表達(dá)水平與MVD計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，IGF-1R高表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)較高的HCC患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡率也較高(P＜0.05)。結(jié)論: IGF-1R可促進(jìn)HCC的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，與促進(jìn)腫瘤血管新生有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］癌，肝細(xì)胞;胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體;免疫組織化學(xué);微血管密度;基因表達(dá)

＊＊通信作者E-mail: chengyuanhua@ gmc.edu.cn

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2016－02－23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.1833.004.html

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)病例約748 300例，死亡695 900例，我國(guó)發(fā)病和死亡患者數(shù)量約占全球50%［1－2］。有研究發(fā)現(xiàn)，HCC發(fā)生的分子機(jī)制與胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factors，IGFs)系統(tǒng)信號(hào)通路異常相關(guān)［3］。IGFs是一種多功能細(xì)胞增殖調(diào)控因子，在胚胎發(fā)育、中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及腫瘤細(xì)胞增殖等方面具有重要的生物學(xué)功能。胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(insulinlike growth factor 1 receptor，IGF-1R)在多種腫瘤中呈高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［4］。本研究應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)51例HCC患者癌組織及癌旁組織中IGF-1R蛋白表達(dá)情況并計(jì)數(shù)兩組中的微血管密度(microvessel density，MVD)，探討IGF-1R的表達(dá)與HCC臨床病理特征之間的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1臨床資料

51例HCC病例癌組織及相應(yīng)的癌旁組織為廈門(mén)市中醫(yī)院病理科2011年6月～2013年8月的石蠟包埋標(biāo)本，所有切片均由兩位高年資病理醫(yī)師復(fù)查診斷;癌旁組織取自距腫瘤邊緣2 cm處的肝組織。采用國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)第六版制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期9例、Ⅱ期13例、Ⅲ期29例及Ⅳ期0例。病理分級(jí)根據(jù)經(jīng)典的Edmondson-Steiner＇s分級(jí)系統(tǒng)，Ⅰ級(jí)6例、Ⅱ級(jí)25例、Ⅲ級(jí)18例和Ⅳ級(jí)2例。

1.2方法

所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色。免疫組織化學(xué)染色采用EnVision兩步法，一抗包括IGF-1R(美國(guó)Ventana公司，克隆號(hào)G11，即用型)、CD34(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，克隆號(hào)QBEnd/10，即用型，用于標(biāo)記微血管)，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)立相應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照，PBS液代替一抗作為空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3觀察指標(biāo)

觀察51例HCC癌組織及癌旁組織IGF-1R陽(yáng)性細(xì)胞、計(jì)數(shù)MVD值并隨訪。IGF-1R定位于細(xì)胞質(zhì)，為棕黃色顆粒。每張切片于顯微鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，取其平均值。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分率及其染色強(qiáng)度綜合評(píng)分進(jìn)行判斷。(1)陽(yáng)性細(xì)胞＜5% 記0分，5～25%記1分，26～50 %記2分，＞50%記3分。(2)按細(xì)胞染色強(qiáng)弱:不著色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，黃褐色記3分。兩種評(píng)分相加，0～1分為陰性，2分為弱陽(yáng)性，3～4分為陽(yáng)性，5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性。2分以上視為陽(yáng)性表達(dá)，2～4分歸為低表達(dá)，5～6分歸為高表達(dá)［5］。MVD用抗體CD34標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞參照參考文獻(xiàn)［6］進(jìn)行計(jì)數(shù)，在光鏡低倍視野下掃視整張切片尋找3個(gè)染色陽(yáng)性的血管高密度集中的區(qū)域作為“熱點(diǎn)”，然后在光鏡200倍視野下計(jì)數(shù)微血管的數(shù)目，平均值即為該病例的MVD值。全部病例MVD值均以中位數(shù)分為低計(jì)數(shù)組與高計(jì)數(shù)組。并對(duì)患者的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存率進(jìn)行隨訪，平均隨訪時(shí)間29個(gè)月。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件分析處理。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，分類資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，等級(jí)相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，單因素生存分析采用Kaplan-Meier法，差異的顯著性采用log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 IGF-1R蛋白表達(dá)

在51例HCC中，癌組織IGF-1R蛋白高表達(dá)34例，低表達(dá)17例;在癌旁組織中IGF-1R蛋白高表達(dá)20例，低表達(dá)31例。IGF-1R高表達(dá)率在癌組織(34/51，66.7%)較癌旁組織(20/51，39.2%)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)圖1A、B; IGF-1R蛋白表達(dá)在有無(wú)血管浸潤(rùn)、病理學(xué)分級(jí)及TNM分期組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;而在不同年齡、性別、飲酒史、HBsAg、AFP、腫瘤數(shù)目、腫瘤大小及是否合并肝硬化組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05) ;見(jiàn)表1。

表1　HCC中IGF-1R蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Tab.1　The correlation between the expression of IGF-1R protein and the clinicopathologic features in HCC

2.2 MVD計(jì)數(shù)

51例HCC病例中，以CD34標(biāo)記的MVD在癌組織中計(jì)數(shù)為(231.57±110.65)明顯高于配對(duì)癌旁組織(146.08±64.68)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，見(jiàn)圖1C、D。MVD水平在有無(wú)血管浸潤(rùn)、不同病理分級(jí)及TNM分期組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在不同年齡、性別、飲酒史、HB-sAg、AFP、腫瘤數(shù)目、不同腫瘤大小及是否合并肝硬化組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

A為HCC中IGF-1R強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(+ + +)，B為癌旁組織中IGF-1R弱陽(yáng)性表達(dá)(+)，C為癌組織中CD34標(biāo)記的微血管，D為癌旁組織中CD34標(biāo)記的微血管圖1　HCC組織及癌旁組織中IGF-1R蛋白的表達(dá)和CD34標(biāo)記的微血管(EnVision法，×200)Fig.1 The microvessel marked by CD34 in HCC(EnVision，×200)

2.3 MVD與IGF-1R表達(dá)的Spearman等級(jí)相關(guān)分析

在51例HCC中，MVD高計(jì)數(shù)組26例，低計(jì)數(shù)組25例;在26例MVD高計(jì)數(shù)的癌組織中IGF-1R蛋白呈高表達(dá)22例，低表達(dá)14例，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，顯示MVV與IGF-1R表達(dá)呈正相關(guān)(r =0.362，P =0.006)。

2.4隨訪情況

51例HCC中38例獲訪，隨訪率74.5%，隨訪時(shí)間16～42個(gè)月，平均隨訪時(shí)間29個(gè)月，其中19例復(fù)發(fā)，17例轉(zhuǎn)移，13例死亡，無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)者19例。單因素生存分析結(jié)果顯示，IGF-1R蛋白高、低表達(dá)組間比較，復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及生存率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。MVD高計(jì)數(shù)組與低計(jì)數(shù)組比較，復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;見(jiàn)表2。

表2　不同IGF-1R蛋白表達(dá)水平及MVD計(jì)數(shù)的HCC患者復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及死亡率Tab.2 The correlation between the expression of IGF-1R protein，the value of MVD and the follow-up data in HCC

3　討論

HCC病程進(jìn)展快且預(yù)后很差［7］。肝臟是合成和分泌IGFs的主要器官［8］。研究顯示，IGF-1R蛋白是酪氨酸激酶蛋白，可以激活下游一系列細(xì)胞增殖和抗凋亡信號(hào)通路，誘導(dǎo)其分裂增殖，細(xì)胞的過(guò)度分裂增殖將大大增加腫瘤發(fā)生的概率，其表達(dá)的高低，在一定程度上決定了細(xì)胞的致瘤性或腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性，HCC患者機(jī)體由于對(duì)IGF-1R的抑制作用減弱或消失，使得IGF-1R過(guò)表達(dá)，造成腫瘤的發(fā)生［9］。Ohshima-Hosoyama等［10］通過(guò)抑制小鼠髓母細(xì)胞瘤模型的IGFs途徑，抑制了腫瘤生長(zhǎng)。有研究認(rèn)為，IGF-1R能以IGF-1和IGF-2作為主要的下游分子，通過(guò)不同途徑上調(diào)胰腺癌細(xì)胞中VEGF的表達(dá)，在促進(jìn)腫瘤血管新生中起到重要作用［11］。成莉等［12］發(fā)現(xiàn)IGF-1R表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌組織內(nèi)MVD明顯高于IGF-1R表達(dá)陰性者，提示IGF-1R可以促進(jìn)腫瘤血管形成。還有研究顯示IGF-1R不僅具有上調(diào)金屬基質(zhì)蛋白酶及尿激酶型纖溶酶原活化因子的表達(dá)，促使細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用;也能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)鈣黏蛋白、層黏連蛋白、纖黏連蛋白等黏附分子的形成，增加其對(duì)內(nèi)皮及基底膜的黏附性，來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［13］。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在51例HCC病例的癌組織中IGF-1R蛋白表達(dá)高于相應(yīng)的癌旁組織，提示IGF-1R的高表達(dá)可能與HCC的發(fā)生有關(guān)，且與腫瘤的分期、分級(jí)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及生存率相關(guān)。牛堅(jiān)等［14］應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)了36例原發(fā)性肝癌組織中IGF-1R的表達(dá)，結(jié)果顯示原發(fā)性肝癌組織中IGF-1R蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常肝組織。本次研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1R高表達(dá)患者發(fā)生血管浸潤(rùn)人數(shù)(25例)多于低表達(dá)患者(4例)，病理分級(jí)Ⅲ+Ⅳ級(jí)人數(shù)(24例)多于低表達(dá)患者(7例)，TNM臨床分期Ⅱ+Ⅲ期人數(shù)(32例)多于低表達(dá)患者(10例)，提示IGF-1R表達(dá)水平與HCC的生物學(xué)行為有關(guān)，其在HCC的發(fā)病、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)機(jī)制中的作用值得探討。

阻斷腫瘤血管形成目前已成為臨床腫瘤治療研究的熱點(diǎn)，如何選擇有效的治療靶點(diǎn)以阻斷腫瘤新生血管形成還有待解決。本實(shí)驗(yàn)顯示HCC中IGF-1R的蛋白表達(dá)強(qiáng)度與MVD水平呈正相關(guān)，但其因果關(guān)系值得探討。推測(cè)抑制HCC中IGF-1R的高表達(dá)能抑制腫瘤血管新生，IGF-1R有望成為阻斷HCC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中血管生成的有效靶點(diǎn)，這還需要進(jìn)一步研究。

4　參考文獻(xiàn)

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(2015－11－12收稿，2015－12－31修回)

中文編輯:吳昌學(xué);英文編輯:劉華

The Significance of Insulin-like Growth Factor 1 Receptor Expression in Hepatocellular Carcinoma

YU Mengyi1，CHENG Yuanhua1，SHEN Jiumei2，SUN Bo3
(1.Department of Pathology，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China; 2.Department of Pathology，Traditional Chinese Medicine Hospital，Xiamen 361009，F(xiàn)ujian，China; 3.Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To investigate the expression of insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) and the relationship between IGF-1R and the clinicopathologic features in hepatocellular carcinoma (HCC).Methods: Immunohistochemical Envision method was utilized to detect the expression of IGF-1R.MVD was marked by antibody CD34 and counted.The follow-up data of the cases of HCC was analyzed by Kaplan-Merier method for survival with log-rank test.Result: (1) The IGF-1R protein showed a higher expression in HCC than in the tumor-adjacent tissues，the difference was statistically significant(P＜0.05).(2) The difference of the number of IGF-1R protein overexpression in histological grade and TNM stage was significant(P＜0.05)，moreover，the vascular infiltration group was significantly more than group without vascular invasion (P＜0.05).But there was no significant difference between different tumor size，different gender，age，alcohol intake history，HBsAg，AFP，tumor number and with or without liver cirrhosis (P＞0.05).(3) The value of MVD was higher in HCC than that in tumor-adjacent tissues (P＜0.05).(4) By Spearman rank correlation analysis，the level of MVD was positively correlated with IGF-1R protein expression.(5) By survival analysis of the 38 cases of HCC with follow-up data，the difference in terms of the rate of recurrence，metastasis and survival rate between the group of the high and low expression of IGF-1R protein was significant(P＜0.05).book=151,ebook=32Conclusion: IGF-1R protein may promote the occurrence and development of HCC，and promote the neovasculation in HCC.The expression of IGF-1Rcan be used as a marker to evaluate the prognosis of HCC.

［Key words］carcinoma，hepatocellular; insulin-like growth factor 1 receptor; immunohistochemistry; vessel density; gene expression

*［基金項(xiàng)目］貴州省科學(xué)技術(shù)基金［黔科合J字KLG(2013) 27號(hào)］;貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目［黔科合SY字(2011) 3062號(hào)］;貴州省科學(xué)技術(shù)基金［黔科合J字(2009) 2187號(hào)］;貴陽(yáng)市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目［(2009)筑科農(nóng)合同字第3－020號(hào)］

［中圖分類號(hào)］R735.7

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1000-2707(2016) 02-0150-05