郭沛鑫，李奕融，鄭進(jìn)，陳普，張超

(云南中醫(yī)學(xué)院，昆明650500)

·基礎(chǔ)研究·

傣藥“雅解沙把”對(duì)大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷的保護(hù)作用

郭沛鑫，李奕融，鄭進(jìn)，陳普，張超

(云南中醫(yī)學(xué)院，昆明650500)

目的 探討傣藥“雅解沙把”對(duì)大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷的保護(hù)作用。方法 選擇SD大鼠32只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、“雅解沙把”低劑量組、“雅解沙把”高劑量組，每組8只。除空白對(duì)照組外，其余三組采用乙醇灌胃法(連續(xù)12周)建立慢性酒精性胃黏膜損傷模型。造模第2周開(kāi)始,“雅解沙把”低、高劑量組分別給予“雅解沙把”水提液灌胃(含“雅解沙把”生藥分別為0.27、2.43 g/kg)，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組等量蒸餾水灌胃，每日1次。末次灌胃2 h，采用毛細(xì)管眶內(nèi)取血，檢測(cè)血清巨噬細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)。取血后處死大鼠，取胃組織，測(cè)量胃潰瘍面積，計(jì)算潰瘍指數(shù)；制作胃組織切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織病理變化。結(jié)果 空白對(duì)照組無(wú)胃潰瘍形成。模型對(duì)照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成，模型對(duì)照組胃潰瘍面積及潰瘍指數(shù)明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組(P<0.05或<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，“雅解沙把”低、高劑量組胃黏膜損傷程度明顯輕于模型對(duì)照組，“雅解沙把”高劑量組胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大?？瞻讓?duì)照組血清MCP-1水平為(472.33±96.11)pg/mL，模型對(duì)照組為(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低劑量組為(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高劑量組為(350.58±93.77)pg/mL。模型對(duì)照組血清MCP-1水平明顯高于其余三組(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對(duì)照組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 傣藥“雅解沙把”對(duì)大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷具有保護(hù)作用；其作用機(jī)制可能與降低血清MCP-1水平有關(guān)。

酒精性胃黏膜損傷；傣藥；雅解沙把；巨噬細(xì)胞趨化蛋白1；大鼠

傣藥“雅解沙把”全方由葛根、百樣解、傣百解、大黃藤等組成，對(duì)乙醇所致的胃脘痛有較好的治療效果[1，2]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，“雅解沙把”能延長(zhǎng)小鼠醉酒潛伏期、縮短醉酒持續(xù)期，降低小鼠重度酒精中毒的病死率[3，4]。但其對(duì)胃黏膜損傷是否具有保護(hù)作用，目前尚無(wú)相關(guān)研究。2015年7～10月，我們觀察了“雅解沙把”對(duì)乙醇所致的大鼠慢性胃黏膜屏障損傷的保護(hù)作用?，F(xiàn)分析結(jié)果，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級(jí)SD大鼠32只，雌雄各半，7～8周齡，體質(zhì)量180～220 g，由四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(川)2013-12；飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物房?！把沤馍嘲选?商品名百解膠囊)，云南省西雙版納州傣醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，滇藥制字(Z)20082252K，規(guī)格：0.2 g/粒。實(shí)驗(yàn)前由本實(shí)驗(yàn)室提取膠囊內(nèi)容物(以下稱“雅解沙把”水提液)。共提取3次，第1次加3倍水，提取30 min；第2、3次均加2倍水，提取20 min；合并3次提取液，濃縮至含1 g生藥/mL，臨用前配制至所需濃度。M200 PRO酶標(biāo)儀，北京博宇騰輝科貿(mào)有限公司。無(wú)水乙醇，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；巨噬細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 動(dòng)物分組及藥物處理 隨機(jī)將SD大鼠分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、“雅解沙把”低劑量組(含“雅解沙把”生藥0.27 g/kg)、“雅解沙把”高劑量組(含“雅解沙把”生藥2.43 g/kg)，每組8只。參照文獻(xiàn)[5，6]方法，除空白對(duì)照組外，其余三組給予乙醇灌胃造模，1次/d，共12周。第1～4周每日灌胃40%乙醇10.00 mL/kg，第5～8周每日灌胃50%乙醇11.25 mL/kg，第9～12周每日灌胃50%乙醇12.50 mL/kg。造模第2周開(kāi)始，“雅解沙把”低、高劑量組分別給予“雅解沙把”水提液灌胃，生藥含量分別為0.27、2.43 g/kg；空白對(duì)照組和模型對(duì)照組等量蒸餾水灌胃；均每日1次。末次給藥后，眶內(nèi)取血2 mL，保存?zhèn)錂z；取血后，頸椎脫臼處死大鼠，取胃組織。

1.3 相關(guān)指標(biāo)觀察

1.3.1 胃黏膜損傷情況 取各組胃組織，以游標(biāo)卡尺測(cè)量胃潰瘍面積，計(jì)算潰瘍指數(shù)；按Guth標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行胃黏膜損傷評(píng)分[7]：正常胃黏膜為0分，點(diǎn)狀損傷計(jì)1分，病損<1 mm計(jì)2分，病損≥1～<2 mm計(jì)3分，病損≥2～<4 mm計(jì)4分，病損≥4 mm計(jì)5分。損傷寬度>2 mm，損傷指數(shù)計(jì)分×2。潰瘍指數(shù)即全胃各病灶計(jì)分的總和。

1.3.2 胃黏膜組織病理觀察 取各組胃組織，沿胃小彎至胃大彎切取1條胃黏膜組織(寬約10 mm)，10%甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織病理改變。

1.3.3 血清MCP-1檢測(cè) 取眶內(nèi)血2 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清。采用ELISA法檢測(cè)血清MCP-1。

2 結(jié)果

2.1 各組胃黏膜損傷情況比較 空白對(duì)照組無(wú)胃潰瘍形成。模型對(duì)照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成；模型對(duì)照組胃潰瘍面積及潰瘍指數(shù)明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組(P<0.05或<0.01)，而“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。各組胃潰瘍面積及潰瘍指數(shù)比較見(jiàn)表1。

表1 各組胃潰瘍面積及潰瘍指數(shù)比較

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各組胃黏膜組織病理觀察 空白對(duì)照組胃黏膜光滑，黏膜上皮完整，腺體排列整齊，未見(jiàn)出血、糜爛、潰瘍，皺襞光整，未見(jiàn)明顯隆起。模型對(duì)照組胃黏膜明顯充血、水腫，有新鮮出血附著，可見(jiàn)點(diǎn)灶狀糜爛及條線狀潰瘍，黏膜變白，皺襞隆起；黏膜結(jié)構(gòu)排列紊亂失去完整性及連續(xù)性，可見(jiàn)黏膜上皮脫落，黏膜下層血管擴(kuò)張充血，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)?！把沤馍嘲选钡蛣┝拷M有少量點(diǎn)狀及線狀潰瘍，充血水腫較輕，有黏膜上皮脫落，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)?！把沤馍嘲选备邉┝拷M胃黏膜上皮細(xì)胞清晰，充血水腫較輕，可見(jiàn)少量黏膜上皮脫落及中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組胃黏膜損傷情況明顯重于“雅解沙把”低、高劑量組?！把沤馍嘲选备邉┝拷M胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大。見(jiàn)插頁(yè)Ⅱ圖4。

2.3 各組血清MCP-1水平比較 空白對(duì)照組血清MCP-1水平為(472.33±96.11)pg/mL，模型對(duì)照組為(676.55±157.92)pg/mL，“雅解沙把”低劑量組為(348.58±55.58)pg/mL，“雅解沙把”高劑量組為(350.58±93.77)pg/mL。模型對(duì)照組血清MCP-1水平明顯高于其余三組(P均<0.01)，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對(duì)照組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

3 討論

胃脘痛是指上腹胃脘部近心窩處經(jīng)常發(fā)生疼痛為主癥的病證，可伴脘腹脹滿，噯腐吞酸，惡心嘔吐，不思食，大便或結(jié)或溏等脾胃癥狀，以及神倦乏力、面黃消瘦、浮腫等全身癥狀。胃潰瘍、急慢性胃炎、胃黏膜脫垂等均可出現(xiàn)胃脘痛，其主要原因?yàn)槲葛つて琳蠐p傷[8，9]。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，胃黏膜屏障受損與胃黏膜攻擊因子和防御因子的平衡失調(diào)有關(guān)[10，11]。攻擊因子主要包括胃酸、胃蛋白酶、幽門(mén)螺桿菌、酒精、炎癥等，防御因子主要包括黏膜屏障、碳酸氫鹽屏障及黏膜下血流屏障等。減弱攻擊因子或增強(qiáng)防御因子均能達(dá)到保護(hù)胃黏膜屏障的作用[12，13]。

胃黏膜屏障損傷過(guò)程往往伴隨炎癥反應(yīng)的發(fā)生。在此過(guò)程中，胃黏膜肥大細(xì)胞釋放出5-羥色胺、白介素、血管活性腸肽、一氧化氮等炎性介質(zhì)，使毛細(xì)血管通透性增加，大量蛋白滲漏，胃黏膜血流減少，導(dǎo)致胃黏膜微循環(huán)障礙，同時(shí)炎癥介質(zhì)可介導(dǎo)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的聚集、黏附、浸潤(rùn)，導(dǎo)致胃黏膜損傷[14，15]。另外，胃黏膜肥大細(xì)胞可釋放組胺與胃黏膜壁細(xì)胞H2受體結(jié)合，刺激胃酸分泌，加重胃黏膜損傷[16，17]。MCP-1屬于趨化因子家族成員之一。以往研究認(rèn)為，MCP-1由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌[18]。近年研究發(fā)現(xiàn)，胃黏膜肥大細(xì)胞顆粒中纖維蛋白溶酶可促進(jìn)人內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1表達(dá)增加[19，20]。MCP-1可通過(guò)不同的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，激活與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲和存活等相關(guān)的各種基因的轉(zhuǎn)錄；通過(guò)趨化作用，趨化白細(xì)胞亞群的召集和運(yùn)輸；調(diào)控樹(shù)突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的發(fā)育成熟，與炎癥過(guò)程和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)[21]。胃癌的發(fā)生、發(fā)展常伴隨著MCP-1高表達(dá)[22，23]。MCP-1對(duì)單核細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞均有趨化作用，可誘導(dǎo)單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，使各種炎性細(xì)胞尤其是單核細(xì)胞向病變部位聚集[24，25]。因此，血清MCP-1水平對(duì)評(píng)價(jià)藥物效果、病情發(fā)展和預(yù)后具有重要意義。

胃脘痛屬傣醫(yī)“攏接崩”的范疇，傣醫(yī)認(rèn)為，該病的發(fā)生是由于體內(nèi)“四塔”(風(fēng)、火、水、土)、“五蘊(yùn)”(色、識(shí)、受、想、行)功能失調(diào)(尤其是風(fēng)、水、土失調(diào))及“五蘊(yùn)”受損引起?！把沤馍嘲选睘榇鏊帍?fù)方制劑，全方由葛根、百樣解、傣百解、大黃藤等組成。該制劑通過(guò)調(diào)平“四塔”、“五蘊(yùn)”，行氣破瘀，消食消脹，理氣止痛，對(duì)酒精性胃脘痛有較好的治療作用。因酒精性胃脘痛與胃黏膜屏障損傷及炎癥因子侵襲密切相關(guān)。因此推測(cè)，通過(guò)降低炎癥因子的表達(dá)、消除炎癥反應(yīng)可保護(hù)胃黏膜屏障。本研究結(jié)果顯示，模型對(duì)照組及“雅解沙把”低、高劑量組均有胃潰瘍形成；其中，模型對(duì)照組胃潰瘍面積及潰瘍指數(shù)明顯高于“雅解沙把”低、高劑量組，但“雅解沙把”低、高劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；胃黏膜組織病理顯示，“雅解沙把”低、高劑量組胃黏膜損傷均輕于模型對(duì)照組，“雅解沙把”高劑量組胃黏膜損傷程度低于“雅解沙把”低劑量組，但差別不大；模型對(duì)照組血清MCP-1水平明顯高于空白對(duì)照組和“雅解沙把”低、高劑量組，“雅解沙把”低、高劑量組及空白對(duì)照組兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證實(shí)“雅解沙把”對(duì)乙醇導(dǎo)致的胃黏膜損傷具有保護(hù)作用。

綜上所述，“雅解沙把”對(duì)大鼠慢性酒精性胃黏膜損傷具有保護(hù)作用；其機(jī)制可能是通過(guò)降低血清MCP-1水平，繼而減少胃黏膜屏障的攻擊因子。

[1] 曾君，曾湘榮.傣藥雅解沙把(百解膠囊)的研究概況[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2009，18(21)：23-24.

[2] 呂顯榮，張闖，陳眉，等.傣醫(yī)“雅解”理論及其方藥的研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，32(2)：23-26.

[3] 李相融，代蓉，王輝，等.傣醫(yī)解藥“雅解沙把”防醉、解酒作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2012，21(11)：60-63.

[4] 代蓉，李相融，李松梅，等.傣藥“雅解沙把”對(duì)醉酒小鼠平衡失調(diào)的影響[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，35(2)：8-10.

[5] 王炳元，吳作艷，曹艷雪，等.慢性乙醇攝取對(duì)胃黏膜損害的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，32(1)：13-14.

[6] Wang BY, Liu DP, Fu BY, et al. Relationship between establishment of experimental alcoholic liver fibrosis and serum fibrosis marks[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2000,15(Suppl):1218.

[7] 高會(huì)軍，黃裕新，王勝智，等.應(yīng)激對(duì)大鼠胃黏膜VCL和海馬NMDAR2表達(dá)的影響[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，43(10)：727-730.

[8] 丁全祥，丁全茂.手法治療胃脘痛臨床研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，20(7)：97-98.

[9] 郭新雪，朱先康.中醫(yī)治療小兒胃脘痛研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15(1)：212-214.

[10] 王瑩，丁世蘭，齊學(xué)潔，等.應(yīng)激性胃潰瘍發(fā)病機(jī)制與中醫(yī)藥治療的研究進(jìn)展[J].天津中醫(yī)藥，2013，30(3)：186-189.

[11] 梅杰，李芳，陳建敏，等.胃黏膜屏障與胃潰瘍的研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(6)：841-843.

[12] 陳建章，陳文，喻菁，等.半四左方對(duì)胃潰瘍大鼠表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，25(2)：313-314.

[13] 陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：387.

[14] 羅丹，向未，肖國(guó)輝，等.胃黏膜屏障功能及其中醫(yī)外治法的研究進(jìn)展[J].光明中醫(yī)，2014，29(1)：202-204.

[15] 沈貴芳，趙偉春，張文詩(shī).胃黏膜損傷防御機(jī)制的研究進(jìn)展[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，6(3)：257-260.

[16] Kong W, Wang J, Ping X, et al. Biomarkers for assessing mucosal barrier dysfunction induced by chemotherapy: identifying a rapid and simple biomarker[J]. Clin Lab, 2015,61(3-4):371-378.

[17] Yuan XG, Xie C, Chen J, et al. Seasonal changes in gastric mucosal factors associated with peptic ulcer bleeding[J]. Exp Ther Med, 2015,9(1):125-130.

[18] 曾鈞.單核細(xì)胞趨化蛋白-1與炎性疾病的研究現(xiàn)狀[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21(12)：84-87.

[19] 郭海平，高樺，邱明才.吡格列酮對(duì)糖尿病大鼠胃黏膜肥大細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(17)：3112-3114.

[20] 沈艷婷，闕任燁，陶智會(huì)，等.納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜TNF-α、IL-8、ICAM-1及MCP-1的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，29(6)：55-59，69.

[21] 張哲，王艷紅.單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1/CCL2)與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2008，15(5)：735-737.

[22] 陳海濤，張文俊.單核細(xì)胞趨化蛋白-1與胃癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].國(guó)際消化病雜志，2014，34(3)：198-200.

[23] 宋軍民，劉明華，李巖.MCP-1誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞NF-κB-p65的表達(dá)和核移位[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2013，22(9)：841-843.

[24] Deng B, Fang F, Yang T, et al. Ghrelin inhibits AngⅡ-induced expression of TNF-α, IL-8, MCP-1 in human umbilical vein endothelial cells[J]. Int J Clin Exp Med, 2015,8(1):579-588.

[25] Li S, Wang W, Zhang N, et al. IL-1β mediates MCP-1 induction by Wnt5a in gastric cancer cells[J]. BMC Cancer, 2014(14):480.

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160555)。

張超(E-mail： zhangc19@21cn.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.008

R573.3

A

1002-266X(2016)24-0026-03

2015-11-15)