柴士偉，屠亞茹，王興蕊，劉二偉，常艷旭，何　俊，3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津　300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津　300193；3.天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津　300193）

?

一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定胃力康顆粒中7種成分的含量*

柴士偉1，2，屠亞茹1，王興蕊1，劉二偉1，常艷旭1，何俊1，3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193；3.天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193）

摘要：[目的]建立可用于胃力康顆粒中7種成分含量測(cè)定的一測(cè)多評(píng)法。[方法]采用超高效液相色譜（UPLC），以芍藥苷為內(nèi)參物，確定蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸的相對(duì)校正因子，通過(guò)相對(duì)校正因子計(jì)算各成分的含量；同時(shí)比較10批胃力康顆粒一測(cè)多評(píng)法的計(jì)算值與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果的差異。[結(jié)果]建立了胃力康顆粒中7種成分一測(cè)多評(píng)的含量測(cè)定方法，10批胃力康顆粒中7種成分采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。[結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)建立的一測(cè)多評(píng)法可用于胃力康顆粒中7種成分的含量測(cè)定，方法快速、準(zhǔn)確，可用于胃力康顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：胃力康顆粒；一測(cè)多評(píng)法；超高效液相色譜法；質(zhì)量控制

胃力康顆粒由柴胡、赤芍、枳殼、木香、丹參、延胡索、大黃、甘草等12味藥材組成[1-2]，具有行氣活血，泄熱和胃的功效，適用于胃脘疼痛、脹悶、泛酸、灼熱、噯氣、暴躁易怒、口干口苦等癥[3-6]。作為臨床常用中藥[7-10]，胃力康顆?；瘜W(xué)成分復(fù)雜，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅以芍藥苷[11]作為其質(zhì)量控制指標(biāo)難以全面、客觀的反映藥品的內(nèi)在質(zhì)量。本研究采用超高效液相色譜法[12-14]，以芍藥苷為內(nèi)參物，建立胃力康顆粒中7種成分（芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸）同時(shí)測(cè)定的“一測(cè)多評(píng)法”，可快速、全面、準(zhǔn)確的控制其產(chǎn)品質(zhì)量。

1　儀器與材料

1.1儀器Waters Aquity超高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；AX205型十萬(wàn)分之一天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli -Q超純水制備儀（Millipore公司）；Tomos 2-16 A型高速離心機(jī)（上海托莫斯科學(xué)儀器有限公司）；SB-1000YDTD超聲清洗槽（寧波新芝生物科技有限公司）。

1.2材料甲醇為色譜純，購(gòu)自Fisher公司；超純水為Milli-Q制備；芍藥苷（批號(hào)110736-200731）、蘆?。ㄅ?hào)11022LD01）、柚皮苷（批號(hào)110722-200610）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；迷迭香酸（批號(hào)20140722）、丹酚酸B（批號(hào)：20121033）、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷（批號(hào)W14-7-0）、甘草酸（批號(hào)20121098）購(gòu)自天津一方科技有限公司。

胃力康顆粒購(gòu)自四川綠葉寶光藥業(yè)股份有限公司，共10個(gè)批次。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為Waters Aquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相為甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?～2 min，3% A；2～11 min，3%～36% A；11～13.5 min，36%～41% A；13.5～17 min，41%～54% A，17～18 min，54%～62% A；18～23 min，62%～80% A；23～24 min，80%～3% A；流速0.4 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量3 μL。

2.2對(duì)照品溶液的配制精密稱取芍藥苷、丹酚酸B對(duì)照品各5 mg，用甲醇分別配制成終濃度為5 g/L對(duì)照品溶液；精密稱取蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品各2.5 mg，用甲醇分別配制成終濃度為2.5 g/L對(duì)照品溶液。精密稱取甘草酸對(duì)照品2.5 mg，用50%的甲醇溶液配制成終濃度為2.5 g/L對(duì)照品溶液，所有對(duì)照品溶液儲(chǔ)存于4℃冰箱備用。

精密量取上述各對(duì)照品溶液適量，用甲醇配制成芍藥苷、丹酚酸B為500 mg/L和蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸為

250 mg/L的混合對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備精密稱定胃力康顆粒樣品0.20 g置10 mL容量瓶中，加入純水定容至刻度，超聲15 min，冷卻，用純水補(bǔ)足溶液至刻度，搖勻，取1 mL該溶液，14 000 r/min離心10 min，取上清用于分析。

2.4方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍精密量取上述混合照品溶液，用甲醇稀釋2、5、10、25、50、125、250倍得7個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液，取各個(gè)濃度上述溶液，進(jìn)樣3 μL分析，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表1。在該色譜條件下，芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的最低檢測(cè)限分別為0.67、0.33、0.33、0.33、0.67、0.33、0.33 mg/L，最低定量限分別為1、0.5、0.5、0.5、1、0.5、0.5mg/L。胃力康顆粒樣品及混合對(duì)照品UPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

表1　胃力康顆粒中7種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab.1 Equation of linear regression of seven analytes

圖1　胃力康顆粒樣品(A)和混合對(duì)照品(B) UPLC色譜圖Fig.1 The UPLC chromatogram of Weilikang granules (A) and standard solution (B)

2.4.2精密度實(shí)驗(yàn)取胃力康顆粒（批號(hào)1304021），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，以各色譜峰峰面積值計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的峰面積RSD值分別為0.22%、0.25%、1.34%、1.34%、0.32%、0.33%和0.20%，表明方法精密度良好。

2.4.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)胃力康顆粒（批號(hào)1304021），按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算得芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的RSD分別為0.60%，0.95%，2.02%，1.85%，0.58%，1.65%，和0.77%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一批胃力康顆粒樣品（批號(hào)1304021）制備的供試品溶液，分別于室溫條件下放置0、2、4、6、8、24 h進(jìn)行測(cè)定，芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的峰面積RSD值分別為0.99%，1.38%，1.09%，0.80%，0.38%，1.04%，0.66%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的胃力康顆粒樣品（批號(hào)1304021）0.1 g共6份，分別精密加入一定量的各對(duì)照品溶液，氮?dú)獯蹈?。按?.3”項(xiàng)下方法制備溶液，進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹參酚B、大黃素-8-O-β-D吡喃葡萄糖苷、甘草酸的加樣回收率和RSD值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 The recovery rate of seven effective components in Weilikang granules

2.4.6相對(duì)校正因子的計(jì)算相對(duì)校正因子（RCF）計(jì)算公式為fsi=（As/Cs）/（Ai/Ci），其中As、Cs分別為內(nèi)參物對(duì)照品s的峰面積和濃度，Ai、Ci分別為待測(cè)成分對(duì)照品i的峰面積和濃度[15-18]。

依次進(jìn)樣分析各濃度的混合對(duì)照品溶液3 μL，測(cè)得各成分色譜峰峰面積。以芍藥苷為內(nèi)參物，計(jì)算蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸的相對(duì)校正因子，結(jié)果分別為0.072、0.336、0.124、0.108、0.872、0.175，RSD值分別為0.35%、1.28%、1.16%、0.17%、0.25%、0.14%。

2.5相對(duì)校正因子和相對(duì)保留時(shí)間的考察采用Waters Aquity UPLC和Agilent 1290 Infinity兩個(gè)品牌的超高效液相色譜儀及CORTECS UPLC C18和ACQUITY UPLC BEH C18兩種色譜柱測(cè)定RCF和相對(duì)保留時(shí)間（RRT）。取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋得7個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣3 μL，測(cè)定芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸的峰面積。以芍藥苷為內(nèi)參物計(jì)算蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸RCF值和RRT值，結(jié)果見(jiàn)表3和表4。結(jié)果表明使用不同超高效液相色譜儀和不同色譜柱，各成分相對(duì)于芍藥苷的RCF值和RRT值的RSD均小于5%，說(shuō)明該方法重現(xiàn)性較好。

2.6外標(biāo)法與一測(cè)多評(píng)法測(cè)定結(jié)果的比較取10批胃力康顆粒，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取各供試品溶液3 μL，進(jìn)樣測(cè)定。采用外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法計(jì)算樣品中蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明一測(cè)多評(píng)法與外標(biāo)法測(cè)得的各批次胃力康顆粒樣品中7種成分含量的結(jié)果相對(duì)偏差＜2%，兩種測(cè)定方法所得結(jié)果無(wú)明顯差異，一測(cè)多評(píng)法可用于胃力康顆粒的質(zhì)量控制。

表3　胃力康顆粒中6種主要成分的RCFTab.3 RCFs of six components in Weilikang granules

表4　胃力康顆粒中6種主要成分的RRTTab.4 RRT of six components in Weilikang granules

表5　一測(cè)多評(píng)法與外標(biāo)法測(cè)定胃力康顆粒中主要成分含量的結(jié)果比較Tab.5 Contents of components by external standard method and quantitative analysis of multi-components by single marker mg/g

3　討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用甲醇-水體系時(shí)，胃力康顆粒中各個(gè)成分分離度較差，加入甲酸后各色譜峰分離度明顯改善，且甲醇-0.1%甲酸水體系分離效果最好。并考察了乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相中的有機(jī)相選用甲醇的分離效果比乙腈好。最終采用甲醇-0.1%甲酸水作為實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相。在方法建立過(guò)程中，分別考察了采用HPLC、UPLC建立檢測(cè)胃力康顆粒中7種主要成分的分析方法。結(jié)果表明，HPLC所需檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)（120 min），而UPLC僅需24 min即可完成檢測(cè)，極大的提高了檢測(cè)效率。本研究以芍藥苷為內(nèi)參物，建立了能同時(shí)測(cè)定胃立康顆粒中芍藥苷、蘆丁、柚皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷和甘草酸7種有效成分的一測(cè)多評(píng)法，與現(xiàn)有檢測(cè)方法比較[19-20]，能夠更加快速、全面、準(zhǔn)確的控制胃力康顆粒的藥品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1]姚慧靜，王青.胃力康顆粒治療上腹不適綜合征臨床療效觀察[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32（3）：215-216.

[2]王樹(shù)桂，朱敏嘉.胃力康顆粒劑治療慢性淺表性胃炎100例臨床觀察[J].廣西醫(yī)學(xué)，2005，27（9）：1407-1408.

[3]劉秀健.六君子丸合胃力康顆粒治療肝郁脾虛型功能性消化不良[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11（17）：45-46.

[4]洪汝濤.胃力康顆粒治療動(dòng)力障礙型功能性消化不良療效觀察[J].安徽中醫(yī)臨床雜志，2003，15（5）：398.

[5]葉恒.胃力康顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠胃組織堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2012，20（4）：165-169.

[6]臧秉媛，張柏林.梔連平胃方治療慢性胃炎及清除HP的觀察[J].天津中醫(yī)藥，2010，27（2）：120.

[7]莫志勐.胃力康顆粒聯(lián)合泮托拉唑治療反流性食管炎的臨床應(yīng)用體會(huì)[J].現(xiàn)代診斷與治療，2015，26（9）：1954-1955.

[8]馬速，別艾桂，馬玉蘭，等.胃力康顆粒聯(lián)合多潘立酮片治療功能性消化不良[J].湖北中醫(yī)雜志，2010，32（12）：31.

[9]田樺，卓越，成立娟，等.中藥胃力康顆粒與莫沙比利治療功能性消化不良（FDD）的臨床對(duì)比研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2003，26（2）：26.

[10]郭公新，艾迎春.胃力康顆粒與H2受體拮抗劑聯(lián)合抗生素治療消化性潰瘍臨床觀察[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2002，25（6）：22-23.

[11]魏承志.高效液相色譜法測(cè)定胃力康顆粒中芍藥苷的含量[J].中成藥，2003，25（2）：165-166.

[12]楊靜，劉海濤，王躍飛，等. UPLC-UV法應(yīng)用于丹紅注射液多個(gè)活性成分的穩(wěn)定性研究[J].天津中醫(yī)藥，2012，29（6）：579-582. [13]李薇，吉利娜，宋新波. UPLC法測(cè)定人參流動(dòng)浸膏中8種人參皂苷類成分[J].天津中醫(yī)藥，2014，31（10）：624-626.

[14]劉炳旺，徐文貴，王健. UPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地大黃中游離蒽醌的含量[J].天津中醫(yī)藥，2014，31（4）：238-240.

[15]王智民，錢忠直，張啟偉，等.一測(cè)多評(píng)法建立的技術(shù)指南[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（6）：657-658

[16]卞曉霞，羅躍娥，閆利華.一測(cè)多評(píng)法同步測(cè)定玄參藥材中兩種環(huán)烯醚萜類成分的含量[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（2）：98-100.

[17]李玲，趙順，羅疆南，等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定胃蘇顆粒中4種成分的含量[J].藥物分析雜志，2015，35（4）：751-757

[18]李安平，楊錫，丁永輝，等.一測(cè)多評(píng)HPLC法測(cè)定丹參注射液中7個(gè)水溶性成分含量[J].藥物分析雜志，2012，32（9）：1537

[19]曹云飛，葉飛. HPLC法測(cè)定胃力康顆粒中鹽酸小檗堿的含量[J].齊魯藥事，2009，28（4）：205-207.

[20]張俊燕.高效液相色譜法測(cè)定胃力康顆粒中延胡索乙素的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，24（3）：343-344.

（本文編輯：高杉，馬英）

Simultaneous determination of seven constituents in Wenlikang granules by quantitative analysis of multi-components by single marker

CHAI Shi-wei1，2，TU Ya-ru1，WANG Xing-rui1，LIU Er-wei1，CHANG Yan-xu1，HE Jun1，3
（1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 2. The First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 3. Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base, Tianjin 300193, China）

Abstract:[Objective] To establish a method for simultaneous determination of seven bioactive components in Weilikang Granules by quantitative analysis of multi-components by single marker（QAMS）. [Methods] Peoniflorin was select as an index，relative correction factors of Rutin，Naringin，Rosmarinic acid，Salvianolic acid B，Emodin-8-O-β-D-glucopyranoside and Glycyrrhizic acid were established by UPLC and calculated to achieve QAMS. The accuracy of the new method was evaluated by comparing the results between QAMS and the external standard method. [Results] The analysis method was established and there is no significant difference between the calculated contents and the contents which were determined by external reference method in 10 batches of samples. [Conclusion] The QAMS method is reliable，accurate to control the quality of seven bioactive components of Weilikang granules.

Key words:Weilikang granules；quantitative analysi of multi-components by single marker；UPLC；quality control

收稿日期：（2015-11-30）

通訊作者：何俊，E-mail：hejun673@163.com。

作者簡(jiǎn)介：柴士偉（1979-），男，博士研究生，主管藥師，主要從事中藥分析研究工作。

*基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目（2013ZX0 9402201）。

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2016.04.14

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-1519（2016）04-0241-04