陳亮　沈燕　孫如意

摘 要：該文以水生動(dòng)物斑馬魚(yú)及大型溞為受試生物，在實(shí)驗(yàn)室條件下測(cè)定了5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑對(duì)2種水生生物的急性毒性，并進(jìn)行了安全性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑對(duì)斑馬魚(yú)和大型溞的毒性均為中毒，因而在水田及附近應(yīng)謹(jǐn)慎施用，避免造成對(duì)水生生物的危害。

關(guān)鍵詞：5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑；斑馬魚(yú)；大型溞；急性毒性；安全性評(píng)價(jià)

中圖分類(lèi)號(hào) X171 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）17-0034-03

Abstract：Aquatic animal zebrafish and Daphnia magna are as test organisms in this paper，under laboratory conditions，5% nicosulfuron-21% atrazine dispersed oil suspension agent was studied on two acute toxicity of aquatic organisms，and safety evaluation. The results showed that the 5% nicosulfuron-21% atrazine dispersed oil suspension agent are poisoning to zebar fish and daphnia magna.so in the paddy field and the nearby caution should be applied，to avoid causingharm to aquatic organisms.

Key words：5% nicosulfuron-21% atrazine dispersed oil suspension agent；Zebra fish；Daphnia magna；Acute toxicity；Safety evaluation

農(nóng)藥污染是世界主要環(huán)境污染問(wèn)題之一，長(zhǎng)期以來(lái)受到了全球范圍內(nèi)的廣泛關(guān)注，隨著農(nóng)藥使用量的增加，殘留農(nóng)藥進(jìn)入水體對(duì)水環(huán)境的污染日益加重，對(duì)水生生物的危害也越來(lái)越大，甚至對(duì)人類(lèi)健康產(chǎn)生了潛在威脅[1]。大型溞和斑馬魚(yú)均為經(jīng)合組織（OECD）推薦的環(huán)境毒理試驗(yàn)代表性受試生物，被廣泛應(yīng)用于水生生物毒性的測(cè)試和評(píng)價(jià)[2-4]。

煙嘧磺隆和莠去津是玉米和谷物田地中的常用除草劑品種，煙嘧磺隆系磺酰脲類(lèi)除草劑，主要用于防治禾本科雜草并兼治若干闊葉雜草，莠去津是三氮苯類(lèi)除草劑，用于防除闊葉雜草和多種一年生禾本科雜草。文獻(xiàn)表明，煙嘧磺隆和莠去津混用不僅可以提高藥效，還可以克服對(duì)煙嘧磺隆中度敏感的玉米品種藥害[5-7，12]。目前國(guó)內(nèi)研究主要集中于其除草效果和殘留降解方面[5-12]，而有關(guān)上述2種除草劑對(duì)水生生物的毒性研究則相對(duì)較少。為此，本研究選用5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑，參照國(guó)家《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[13]中農(nóng)藥對(duì)水生物的毒性等級(jí)，分別測(cè)定了其對(duì)斑馬魚(yú)和大型溞的急性毒性，結(jié)合試驗(yàn)藥液的真實(shí)濃度，對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，以期為科學(xué)評(píng)價(jià)其對(duì)水生系統(tǒng)可能造成的危害提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試生物 藍(lán)色斑馬魚(yú)（Brachydanio rerio），購(gòu)自合肥裕豐花鳥(niǎo)市場(chǎng)飛揚(yáng)水族館，平均體重0.25g，平均體長(zhǎng)2.5cm，健康無(wú)病，與試驗(yàn)相同條件下預(yù)養(yǎng)10d，預(yù)養(yǎng)期間自然死亡率0.6%（<5.0%），試驗(yàn)前24h停止喂食。大型溞（Daphnia magna），選用實(shí)驗(yàn)室條件下孤雌繁殖代數(shù)3代以上、出生時(shí)間6～24h的幼溞用于試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)藥劑 5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑，由上海市農(nóng)藥研究所提供。

1.3 主要儀器設(shè)備 電子天平、智能人工氣候箱、光學(xué)顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、酸度計(jì)、便攜式pH計(jì)、溶解氧測(cè)定儀、硬度計(jì)、溫濕度記錄儀、移液器、容量瓶、三角瓶、量筒、玻璃缸、玻璃棒、燒杯、滴管等。SHIMADZU LCMSMS-8030，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，分液漏斗，濃縮瓶。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 魚(yú)類(lèi)急性毒性試驗(yàn) 在預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的濃度范圍內(nèi)，按照1.2倍幾何倍差設(shè)置5個(gè)濃度組，進(jìn)行正式試驗(yàn)時(shí)，以不加藥的曝氣水為空白對(duì)照。試驗(yàn)中，每處理均放入10條斑馬魚(yú)，試驗(yàn)周期為96h，于24h、48h、72h和96h觀察記錄各處理斑馬魚(yú)死亡數(shù)和中毒癥狀以及供試物各濃度溶液的溫度、溶解氧濃度、pH值等。于試驗(yàn)開(kāi)始后0h、48h和96h時(shí)分別留取藥液樣品，檢測(cè)藥液真實(shí)濃度。

1.4.2 溞類(lèi)急性活動(dòng)抑制試驗(yàn) 在預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的濃度范圍內(nèi)，按照1.3倍幾何倍差設(shè)置7個(gè)濃度組，試驗(yàn)時(shí)，以不加藥的人工稀釋水為空白對(duì)照。試驗(yàn)用50mL的燒杯裝30mL各處理組藥液及對(duì)照組溶液，每個(gè)濃度4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放入5只幼溞。于24h、48h觀察和記錄供試幼溞中毒癥狀和受抑制數(shù)以及供試物溶液的溫度、溶氧量、pH值、硬度等。并于試驗(yàn)開(kāi)始后0h和48h時(shí)分別留取藥液樣品，檢測(cè)藥液真實(shí)濃度。

1.5 藥液真實(shí)濃度檢測(cè) 隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，藥液會(huì)發(fā)生一定程度的降解，其實(shí)際濃度與初始設(shè)計(jì)濃度存在一定差別，故需分別在魚(yú)類(lèi)急性毒性試驗(yàn)的0h、48h、96h，溞類(lèi)急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)的0h、48h以及藻類(lèi)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)的0、72h測(cè)定藥液的真實(shí)濃度。取混勻后的式樣0.1mL，加入0.9mL超純水稀釋?zhuān)旌暇鶆蚝筮^(guò)0.22μm水系濾膜，待測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)處理 根據(jù)試驗(yàn)期間斑馬魚(yú)的死亡數(shù)和大型溞的受抑制數(shù)，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20.0處理數(shù)據(jù)，得到5%煙嘧磺隆·21%莠去津可分散油懸浮劑對(duì)2種水生生物的回歸方程、差異顯著性、半致死濃度LC50或半抑制濃度EC50以及95%置信限[16]。

1.7 毒性等級(jí)劃分 參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》進(jìn)行毒性等級(jí)劃分。按魚(yú)類(lèi)半致死濃度LC50（96h）值，將農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)毒性等級(jí)劃分為4個(gè)等級(jí)：劇毒（LC50≤0.1mg a. i. /L）；高毒（0.110mg a. i. /L）。按溞類(lèi)半抑制濃度EC50（48h）值，將農(nóng)藥對(duì)溞類(lèi)毒性等級(jí)劃分為4個(gè)等級(jí)：劇毒（EC50≤0.1mg a. i. /L）；高毒（0.1