張琰琴 丁方睿 王 芳 肖慧捷 姚 勇 丁 潔

Alport綜合征患兒血清可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體水平變化的臨床意義

張琰琴 丁方睿 王 芳 肖慧捷 姚 勇 丁 潔

目的：初步探討Alport綜合征患兒血清可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體(suPAR)的水平及其臨床意義。 方法：入選34例Alport綜合征患兒，11例原發(fā)性局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)患兒疾病對(duì)照以及13例健康對(duì)照兒童，采用ELISA法檢測(cè)血清suPAR的濃度，并收集患兒同期臨床資料。 結(jié)果：Alport綜合征患兒平均年齡(9.56±4.65)歲，男性28例、女性6例，X連鎖顯性遺傳型24例、常染色體隱性遺傳型10例。Alport綜合征組血清suPAR濃度顯著高于健康對(duì)照組[(3 896.65±979.34) pg/mlvs(2 747.62±277.59) pg/ml,P<0.000 1]，但低于原發(fā)性FSGS組(4 619.27±1 043.56) pg/ml(P=0.042)。Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與24h尿蛋白定量(r=0.400，P=0.021)、血清肌酐(SCr)水平(r=0.410，P=0.016)呈正相關(guān)。Alport綜合征Ccr<90 ml/(min·1.73m2)組患兒的血清suPAR的濃度顯著高于Ccr≥90 ml/(min·1.73m2)組(P<0.000 1)。Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與年齡、性別、遺傳型等無(wú)明顯相關(guān)性。原發(fā)性FSGS患兒血清suPAR濃度與Ccr呈負(fù)相關(guān)(r=-0.833，P=0.008)，與24h尿蛋白定量、SCr水平無(wú)明顯相關(guān)性。 結(jié)論：Alport綜合征患兒血清suPAR濃度升高，提示該指標(biāo)是一種新的標(biāo)志物，可與蛋白尿、SCr共同用來(lái)反映腎臟損傷程度。

Alport綜合征 可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體 慢性腎臟病 蛋白尿

近年來(lái)研究報(bào)道可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體(suPAR)與局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)相關(guān)，血清高濃度suPAR是腎移植后FSGS復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素[1]。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)與非腎小球性腎臟疾病患者和健康對(duì)照組相比，F(xiàn)SGS患者血清suPAR濃度并未升高[2]。還有研究者認(rèn)為肌酐清除率(Ccr)降低是血清suPAR濃度升高的主要原因[3]。因此，suPAR是否與腎臟疾病相關(guān)及其在腎臟疾病的臨床意義尚不完全清楚。本研究選擇病因明確的Alport綜合征，一種由于COL4A3/A4/A5基因突變導(dǎo)致的遺傳性進(jìn)行性腎炎，旨在進(jìn)一步分析血清suPAR水平及其臨床意義。

對(duì)象和方法

研究對(duì)象 選取2012年7月至2013年6月在北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科診斷Alport綜合征的患兒，并符合以下條件：(1)均檢出COL4A3/A4/A5基因突變；(2)生物標(biāo)本庫(kù)中有患兒血清標(biāo)本；(3)排除臨床資料不全的患兒。選擇同期住院行腎活檢診斷原發(fā)性FSGS的11例患兒作為疾病對(duì)照，以及來(lái)自體檢中心的13例健康兒童作為正常對(duì)照。

研究方法

臨床資料收集 患兒留存血清標(biāo)本時(shí)間對(duì)應(yīng)的臨床資料，包括收集患兒性別、年齡、診斷、24h尿蛋白定量、血清肌酐(SCr)、血清尿素氮、Ccr、腎臟病理等。Ccr是采用堿性苦味酸法檢測(cè)，并應(yīng)用體表面積進(jìn)行校正。

血清中suPAR濃度的檢測(cè) ELISA法檢測(cè)血清中suPAR的濃度，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)(R&DSystems， Catalog Number DUP00)進(jìn)行操作，使用酶標(biāo)儀在450/570 nm處讀取各樣本吸光度值，繪制suPAR標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各樣本的suPAR濃度值。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，兩變量間相關(guān)性分析采用Spearman’s correlation test。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。

結(jié) 果

臨床資料 本研究共入選34例Alport綜合征患兒。男28例，女6例，平均年齡(9.56±4.65)歲。遺傳型分別是X連鎖顯性遺傳型(XLAS)24例、常染色體隱性遺傳型(ARAS)10例。Alport綜合征患兒和疾病對(duì)照組的11例原發(fā)性FSGS患兒的臨床資料見(jiàn)表1。

表1 Alport綜合征患兒與原發(fā)性FSGS患兒的臨床特點(diǎn)

XLAS：X連鎖顯性遺傳型Alport綜合征；ARAS：常染色體隱性遺傳型Alport綜合征；FSGS：局灶節(jié)段性腎小球硬化；SCr:血清肌酐

Alport綜合征患兒血清suPAR濃度 正常對(duì)照組兒童、原發(fā)性FSGS患兒及Alport綜合征患兒血清中suPAR的平均濃度分別為(2 747.62±277.59) pg/ml、(4 619.27±1 043.56) pg/ml和(3 896.65±979.34) pg/ml。與正常對(duì)照兒童相比，原發(fā)性FSGS患兒及Alport綜合征患兒血清中suPAR的濃度均顯著升高(圖1)。與原發(fā)性FSGS患兒相比，Alport綜合征患兒血清中suPAR的濃度較低(P=0.042)。

圖1 各組患兒血清中suPAR的濃度suPAR：可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體；FSGS：局灶節(jié)段性腎小球硬化；*：P<0.000 1

Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與尿蛋白、SCr及Ccr相關(guān)性分析 34例Alport綜合征患兒中，25例(73.5%)尿蛋白定量<50 mg/(kg·d)，9例(26.5%)尿蛋白定量≥50 mg/(kg·d)，兩組血清suPAR濃度分別是(3 693.25±993.78) pg/ml和(4 244.00±687.00) pg/ml(P=0.138)。34例Alport綜合征患兒中，慢性腎臟病(CKD)1期25例(73.5%)，CKD 2期6例(17.6%)，CKD 3期3例(8.9%)。血清suPAR濃度與尿蛋白定量呈正相關(guān)，與SCr水平呈正相關(guān)，與Ccr無(wú)明顯相關(guān)性(圖2A～C)。但是在Ccr<90 ml/(min·1.73m2)的Alport綜合征患兒，血清suPAR的平均濃度為(4 780.22±1 319.69) pg/ml，顯著高于Ccr≥90 ml/(min·1.73m2)組患兒血清suPAR的濃度(3 492.17±400.21) pg/ml(圖3)。此外，Alport綜合征患兒血清中suPAR濃度與年齡、性別、遺傳型均無(wú)明顯相關(guān)性。

圖2 血清suPAR濃度與尿蛋白、SCr及Ccr相關(guān)性SCr：血清肌酐；suPAR：可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體；FSGS：局灶節(jié)段性腎小球硬化；Ccr：肌酐清除率；Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與尿蛋白(A)、SCr(B)及Ccr(C)相關(guān)性，F(xiàn)SGS患兒血清suPAR濃度與尿蛋白(D)、SCr(E)及Ccr(F)相關(guān)性

圖3 不同Ccr的Alport綜合征患兒血清suPAR的濃度suPAR：可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體；Ccr：肌酐清除率；*：P<0.000 1

FSGS患兒血清suPAR濃度與尿蛋白、SCr及Ccr相關(guān)性分析 在FSGS患兒，血清中suPAR濃度與24h尿蛋白定量、SCr水平無(wú)明顯相關(guān)性，與Ccr呈負(fù)相關(guān)(圖2D～F)。

Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與腎臟病理 共12例Alport綜合征患兒進(jìn)行了腎臟病理檢查。輕度系膜增生性腎小球病6例，血清suPAR濃度為(4 035.33±820.48) pg/ml；腎小球輕微病變2例，血清suPAR濃度為(3 732.00±141.42) pg/ml；FSGS樣病變2例(2/12，16.7%)，血清suPAR濃度為(5 142.00±197.99) pg/ml；不典型膜性腎病1例，血清suPAR濃度為3 722 pg/ml；膜增生樣腎小球病變，伴部分新月體形成1例，血清suPAR濃度為4 862 pg/ml(表2)。不同腎臟病理改變的Alport綜合征患兒血清中suPAR濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 12例Alport綜合征患兒腎臟病理與血清中suPAR濃度

腎臟病理n(%)血清suPAR濃度(pg/ml)輕度系膜增生性腎小球病6(50.0)4035.33±820.48腎小球微小病變2(16.7)3732.00±141.42FSGS樣病變2(16.7)5142.00±197.99不典型膜性腎病1(8.3)3722.00膜增生樣腎小球病變1(8.3)4862.00

suPAR：可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體；FSGS：局灶節(jié)段性腎小球硬化

討 論

suPAR屬于尿激酶型纖溶酶原激活劑系統(tǒng)，是尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)去除糖基磷脂酰肌醇錨鏈結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的可溶性小分子蛋白(分子量約22～45 kD)。在生理?xiàng)l件下，人血清中存在低濃度的suPAR，是一種循環(huán)蛋白，參與中性粒細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)和干細(xì)胞動(dòng)員。大量研究發(fā)現(xiàn)在疾病條件下，人血清suPAR濃度升高，在炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等方面具有重要的意義[4-7]。

2011年,Wei等[1]研究發(fā)現(xiàn)FSGS患者血清中suPAR濃度較正常對(duì)照組顯著升高，而腎小球微小病變及膜性腎病患者血清suPAR濃度無(wú)明顯升高。并且發(fā)現(xiàn)FSGS患者行腎移植治療1年后，復(fù)發(fā)FSGS的患者血清suPAR濃度顯著高于移植后腎功能正常的患者。因此Wei等認(rèn)為血清suPAR是導(dǎo)致FSGS發(fā)生的循環(huán)因子。2013年我國(guó)研究者Huang等[8]同樣發(fā)現(xiàn)原發(fā)性FSGS和繼發(fā)FSGS患者血漿suPAR濃度升高，而腎小球微小病變及膜性腎病患者血漿suPAR濃度無(wú)明顯改變。在FSGS之外的其他腎臟病方面，2015年我國(guó)研究者Zhao等[9]發(fā)現(xiàn)IgA腎病患者血漿suPAR濃度較正常對(duì)照人群、腎小球微小病變及膜性腎病患者明顯升高，但低于原發(fā)性FSGS患者的suPAR濃度。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)與上述報(bào)道不同。2013年,Bock等[2]對(duì)20例原發(fā)FSGS、24例非FSGS腎小球病、26例非腎小球腎臟疾病及29例健康對(duì)照進(jìn)行血清suPAR濃度檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各組患者血清suPAR濃度無(wú)顯著差異?？梢?jiàn)目前對(duì)suPAR與多種CKD的相關(guān)性的研究結(jié)果并不一致，對(duì)suPAR在CKD的意義的認(rèn)識(shí)尚不清楚。

基于目前suPAR在腎臟疾病研究的發(fā)現(xiàn)尚存在爭(zhēng)議，因此本研究檢測(cè)Alport綜合征患兒血清suPAR濃度，并以原發(fā)FSGS患兒和健康兒童分別為疾病對(duì)照和正常對(duì)照。Alport綜合征是一種病因明確，由編碼Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈相應(yīng)的基因突變導(dǎo)致的遺傳性腎臟疾病。本研究發(fā)現(xiàn)Alport綜合征患兒與原發(fā)性FSGS患兒血清suPAR濃度均較正常對(duì)照顯著升高，說(shuō)明血清suPAR不僅與FSGS相關(guān)，而且可能也參與了Alport綜合征疾病過(guò)程。

Alport綜合征病因明確，如何確定suPAR參與其疾病過(guò)程？是否與腎臟疾病相關(guān)新的分子標(biāo)志物？因此有必要進(jìn)一步探討suPAR在腎臟疾病中的臨床意義。2015年Hayek等[10]研究發(fā)現(xiàn)血漿suPAR濃度升高是CKD發(fā)生及腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)加速下降的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2013年我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)血漿suPAR濃度與Ccr呈負(fù)相關(guān)，與新月體形成呈正相關(guān)[8]。同年Morath等[11]報(bào)道了通過(guò)血漿置換和免疫吸附降低血清中suPAR的濃度，可改善FSGS復(fù)發(fā)患者的腎臟各項(xiàng)指標(biāo)。本研究分析發(fā)現(xiàn)，Alport綜合征患兒血清suPAR濃度與24h尿蛋白定量及SCr水平呈正相關(guān)，與Ccr無(wú)明顯相關(guān)性，但是在Ccr<90 ml/(min·1.73m2)的Alport綜合征患兒，血清suPAR濃度明顯高于Ccr≥90 ml/(min·1.73m2)的患兒。在原發(fā)性FSGS患者血清suPAR濃度與Ccr呈負(fù)相關(guān)。本研究進(jìn)一步證實(shí)血清suPAR與CKD相關(guān)，是一種新的標(biāo)志物，可與蛋白尿、SCr共同用來(lái)反映腎臟損傷程度。

suPAR參與腎臟損傷的機(jī)制尚不完全清楚。有研究報(bào)道血清高濃度suPAR與FSGS患者移植后腎臟足細(xì)胞足突融合相關(guān)，還發(fā)現(xiàn)suPAR是通過(guò)激活足細(xì)胞整合素β3進(jìn)而導(dǎo)致足突融合和蛋白尿[12-13]。體外研究發(fā)現(xiàn)在人足細(xì)胞，suPAR與整合素αⅤβ3 相互作用使足細(xì)胞nephrin和WT-1表達(dá)下調(diào)，提示suPAR引起足細(xì)胞損傷[14]。但也有研究發(fā)現(xiàn)FSGS患者血清suPAR濃度升高與Ccr呈負(fù)相關(guān)，腎移植后受者血清suPAR濃度降低，而移植后復(fù)發(fā)FSGS患者血清suPAR濃度并未升高，研究者認(rèn)為Ccr降低是血清suPAR濃度升高的主要原因[3]。本研究發(fā)現(xiàn)Alport綜合征患兒血清suPAR濃度升高，但具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究。suPAR濃度升高是否只是Ccr下降的結(jié)果？而不是腎損傷的原因？

本研究首次報(bào)道了Alport綜合征患兒血清suPAR濃度升高，通過(guò)相關(guān)性分析進(jìn)一步證明suPAR與腎臟損傷程度相關(guān)。但由于本研究為橫斷面研究，未能提供患者血清suPAR濃度與預(yù)后的關(guān)系，且患兒均來(lái)自我院一個(gè)中心，樣本結(jié)果可能存在偏倚。因此需進(jìn)行大樣本、多中心、隊(duì)列研究，進(jìn)一步明確suPAR用于腎臟疾病診斷及預(yù)后評(píng)估的臨床價(jià)值。

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(本文編輯 莫 非)

Change of serum soluble urokinase-type plasminogen activator receptor in children with Alport syndrome

ZHANGYanqin,DINGFangrui,WANGFang,XIAOHuijie,YAOYong,DINGJie

DepartmentofPediatrics,PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China

Correspondingauthor:DINGJie(E-mail:djnc_5855@126.com)

T Objective：To investigated the role of serum levels of soluble urokinase plasminogen activator receptor (suPAR) in children with Alport syndrome. Methodology：34 children with Alport syndrome were enrolled into this study. 11 children with primary FSGS were as disease controls and 13 healthy children were as normal controls. The clinical and pathological data were collected at the time of take the serum samples. The serum suPAR were measured using commercially available kits. The relationship between levels and protienuria, serum creatinine, creatinine clearance rate, and other clinical and pathological data were analyzed. Results：The average age of children with Alport syndrome was 9.56±4.65 ys. Male and female rate was 28∶ 6. There were 24 children with X-linked Alport syndrome, and 10 with autosomal recessive Alport syndrome. 12 children were combined with hearing loss. The mean level of serum suPAR was significantly elevated in children with Alport syndrome compared to normal controls [(3 896.65±979.34) pg/mlvs(2 747.62±277.59) pg/ml,P<0.000 1]. The mean level of serum suPAR in children with primary FSGS was (4 619.27±1 043.56) pg/ml. Furthermore, the serum suPAR levels in children with Alport syndrome were positively correlated with the 24 hours proteinuria (r=0.400 0,P=0.021 1) and serum creatinine levels (r=0.410 1,P=0.016 0). The serum suPAR level was significantly higher in Alport children with Ccr<90 (ml/min·1.73m2) than in Alport children with Ccr≥90 (ml/min·1.73m2) (P<0.000 1). The serum suPAR levels in children with primary FSGS were negatively correlated with Ccr (r=-0.833 3，P=0.008 3). Conclusion：An elevated level of suPAR was detected in children with Alport syndrome. The serum suPAR level may serve as a new marker associated with renal damage.

Alport syndrome soluble urokinase plasminogen activator receptor chronic kidney disease proteinuria

10.3969/cndt.j.issn.1006-298X.2016.05.004

國(guó)家自然科學(xué)基金(81070545，81400685)，兒科遺傳性疾病分子診斷與研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(Z141107004414036)；北京大學(xué)第一醫(yī)院院級(jí)科研基金

北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科(北京，100034)

丁 潔(E-mail：djnc_5855@126.com)

2016-05-16

? 2016年版權(quán)歸《腎臟病與透析腎移植雜志》編輯部所有