任國(guó)華（山東省菏澤市立醫(yī)院，菏澤274000）

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嗜酸性粒細(xì)胞增多性皮炎患者皮損中蛋白酶活化受體2的表達(dá)及意義

任國(guó)華
（山東省菏澤市立醫(yī)院，菏澤274000）

摘要：目的觀察蛋白酶活化受體2（PAR-2）在嗜酸性粒細(xì)胞增多性皮炎（HED）患者皮膚中的表達(dá)情況。方法采用免疫組化方法比較20例HED患者皮損及15例正常對(duì)照中PAR-2的表達(dá)情況。結(jié)果PAR-2在皮膚的表皮全層尤其是顆粒層以及毛囊、汗腺、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)纖維樣結(jié)構(gòu)中均表達(dá)。HED患者皮損真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞中PAR-2的明顯表達(dá)高于正常對(duì)照（t=3.83，P＜0.001）。結(jié)論P(yáng)AR-2在HED患者血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)增加，推測(cè)與其發(fā)病有一定關(guān)系。

關(guān)鍵詞：嗜酸性粒細(xì)胞增多性皮炎；蛋白酶活化受體-2；血管內(nèi)皮細(xì)胞

嗜酸性粒細(xì)胞增多性皮炎（HED）是一種劇烈瘙癢的疾病，病因不明，可能與超敏反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)有關(guān)［1］。HED是嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征（HES）的輕型或此疾病譜的良性端，是一種特發(fā)性嗜酸性粒細(xì)胞增多引起的皮膚病，由于外周血和組織中嗜酸性粒細(xì)胞增生并在靶組織中集聚而引起。既往研究發(fā)現(xiàn)，蛋白酶活化受體2（PAR-2）在特應(yīng)性皮炎（AD）及銀屑病皮損內(nèi)的表達(dá)顯著增加，且在AD皮損內(nèi)注射PAR-2激動(dòng)劑會(huì)增強(qiáng)和延長(zhǎng)患者的癢感［2-3］。推測(cè)活化的PAR-2也可能是介導(dǎo)HED瘙癢和炎癥反應(yīng)的一條重要途徑。本研究以免疫組化方法檢測(cè)嗜酸性粒細(xì)胞增多性皮炎患者皮損中PAR-2的表達(dá)情況。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1對(duì)象入選者為2012年2月—2014年2月來我科就診，符合Chusid［4］于1975年制定的HES的標(biāo)準(zhǔn)，且只有皮膚損害而沒有明顯內(nèi)臟損害的患者，共20例，患者皆行血尿便常規(guī)及血生化、骨髓穿刺、病理活檢檢查。入選標(biāo)準(zhǔn)：2周內(nèi)未外用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑類藥物，4周內(nèi)未接受系統(tǒng)糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑治療或光療。本研究通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

正常對(duì)照15例，取自非炎癥性皮膚病外科手術(shù)切口邊緣正常皮膚，性別、年齡及取材部位與患者基本匹配。

1.1.2主要試劑PAR-2鼠抗人單克隆抗體（PAR-2msIgG）購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

1.2方法

1.2.1皮膚標(biāo)本制備4mm環(huán)鉆切取患者軀干或四肢皮損，正常對(duì)照15例，取自非炎癥性皮膚病（色素痣等）外科手術(shù)切口邊緣正常皮膚。切取的皮膚組織浸入4%甲醛固定，石蠟包埋。

1.2.2免疫組化組織切片常規(guī)脫蠟，浸入0.01mo1/L檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0）進(jìn)行抗原熱修復(fù)；3%H2O2室溫孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化酶；滴加Ⅰ抗PAR-2msIgG，4℃孵育過夜，PBS沖洗；滴加免疫組化二步法的試劑1（聚合酶輔助劑），室溫孵育20min，PBS沖洗；滴加免疫組化二步法的試劑2（過氧化物酶標(biāo)記的抗鼠/兔IgG多聚體），室溫孵育30min，PBS沖洗；DAB顯色；自來水充分沖洗；蘇木精復(fù)染，脫水，中性樹膠封片。Leica數(shù)字?jǐn)z像系統(tǒng)采集圖像，專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro P1us6進(jìn)行圖像分析，測(cè)量PAR-2染色的平均吸光度值。每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)取5個(gè)獨(dú)立高倍視野（×400）測(cè)量，結(jié)果取平均值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05?；颊咂p與非皮損部位及正常對(duì)照的比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HED患者臨床特點(diǎn)共20例，其中男14例，女6例，年齡45～75歲，平均（65.5±12.7）歲。病程從5個(gè)月～20年不等，發(fā)病年齡均在40歲以上，其中3例有異位性疾病病史，10例患者均為家族史。皮疹分布以軀干、四肢為主，皮疹形態(tài)為紅色、暗紅色及褐色，彌漫性浸潤(rùn)性紅斑、丘疹、斑疹及色素沉著為主要皮損表現(xiàn)。患者均述瘙癢劇烈，部分患者睡眠受影響。全身見抓痕、結(jié)痂，6例患者四肢皮膚明顯粗糙、增厚、苔蘚化。

2.2實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī)：白細(xì)胞總數(shù)（4.6～19.5）×109/ L，嗜酸性粒細(xì)胞（1.6～10.5）×109/L。尿、便常規(guī)陰性。生化檢查：1例患者乳酸脫氫酶升高，2例血肌酸激酶增高。3例三酰甘油升高，2例血糖增高。2例行骨髓穿刺示骨髓中嗜酸性粒細(xì)胞增生活躍。

其余化驗(yàn)未見明顯異常。組織病理示真皮淺中層血管擴(kuò)張，血管周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，部分血管壁可見內(nèi)皮細(xì)胞增生，管腔閉塞，真皮深層及脂膜層大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.3HED患者皮損PAR-2表達(dá)情況PAR-2在正常皮膚及HED患者皮膚的表皮全層表達(dá)，此外，在毛囊、汗腺、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)纖維樣結(jié)構(gòu)均有陽(yáng)性表達(dá)。陽(yáng)性細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)呈棕黃色細(xì)顆粒狀分布，見圖1。

2.4HED皮損與正常對(duì)照PAR-2表達(dá)對(duì)比HED患者皮損內(nèi)真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞PAR-2吸光度值明顯高于正常對(duì)照（P＜0.001），見表1。

圖1　HED患者（A）和正常對(duì)照（B）皮膚PAR-2表達(dá)對(duì)照（DAB染色×400）

表1　HED皮損與正常對(duì)照PAR-2蛋白表達(dá)對(duì)比

3　討論

PAR-2屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，介導(dǎo)跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，可以被絲氨酸蛋白酶激活。PAR-2在包括皮膚在內(nèi)的不同組織細(xì)胞均有表達(dá)，具有廣泛的生物學(xué)活性。其主要效應(yīng)細(xì)胞為角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞。既往研究表明，在炎癥性皮膚病如AD和銀屑病皮損中，角質(zhì)形成細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和肥大細(xì)胞［5］表達(dá)PAR-2均顯著增加。皮膚真皮內(nèi)皮細(xì)胞的PAR-2激活后可引起各種細(xì)胞因子如PGE2［6］、IL-8和趨化因子ICAM-16的分泌和釋放，調(diào)節(jié)皮膚的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。本研究證實(shí)，PAR-2在HED患者皮膚的表皮全層尤其是顆粒層以及毛囊、汗腺、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)纖維樣結(jié)構(gòu)均呈陽(yáng)性表達(dá)。HED患者皮損真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞PAR-2明顯表達(dá)高于正常對(duì)照。正常對(duì)照組微弱表達(dá)PAR-2，而HED組PAR-2表達(dá)水平均明顯增高，說明HED發(fā)生與發(fā)展與PAR-2正相關(guān)。嗜酸性粒細(xì)胞通過與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用和趨化作用來進(jìn)行其運(yùn)輸，從而實(shí)現(xiàn)其在靶器官的集聚。嗜酸性粒細(xì)胞一旦集聚于組織中，則通過多種細(xì)胞因子的作用而活化，并隨即引起促炎癥效應(yīng)，隨后引起病原體或者組織的破壞。表明HED患者發(fā)病可能與局部表達(dá)增高的PAR-2引起細(xì)胞因子和趨化因子分泌增高，從而導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞積聚有關(guān)。AD和銀屑病皮損中有PAR-2的相關(guān)研究，但在HED中尚屬首次報(bào)道，具體通過何種機(jī)制引起HED患者PAR-2增高還需進(jìn)一步研究。

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·論著·

Expression of Protease-activated Receptor 2 in the Lesions of Hypereosinophilic Dermatitis Patients

Ren Guohua
Heze Municipal Hospital，Shandong 274000，China

Abstract：Objective In order to observe the expression of protease -activated receptor 2（PAR -2）in patients with hypereosinophi1ic dermatitis（HED）. Methods Immunohistochemica1 method was used to compare the expression 1eve1s of PAR-2 between the 1esions of 20 HED patients and 15 norma1 contro1s. Results PAR-2 were detected in epiderma1 1ayer，especia11y the granu1ar 1ayer and hair fo11ic1es，sweat g1ands，vascu1ar endothe1ia1 ce11s and nerve fibers-1ike structures. Moreover，the expression of PAR-2 in 1esiona1 vascu1ar endothe1ia1 ce11s in HED patients was significant1y higher than in hea1thy contro1s（t = 3.83，P＜0.001）. Conclusion The expression of PAR-2 was induced in endothe1ia1 ce11s of patients with HED，which maybe re1ated to the onset of HED.

Key words：Hypereosinophi1ic dermatitis；Protease-activated receptor-2；Vascu1ar endothe1ia1 ce11

收稿日期：（2015-12-06）

中圖分類號(hào)：R758.63

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-0709（2016）02-0081-03