陳晉廣，吳浩浪（.浙江省臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）臺(tái)州市中心醫(yī)院，臺(tái)州38000；.南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院，中山5845）

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窄譜中波紫外線對(duì)尋常性銀屑病Th1/Th2平衡偏移的影響

陳晉廣1，吳浩浪2
（1.浙江省臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）臺(tái)州市中心醫(yī)院，臺(tái)州318000；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院，中山528415）

摘要：目的研究窄譜中波紫外線（NB-UVB）治療尋常性銀屑病的臨床療效以及對(duì)患者Th1/Th2的影響，探討NB-UVB治療尋常性銀屑病的機(jī)制。方法55例尋常性銀屑病患者采用NB-UVB光療。采用流式細(xì)胞技術(shù)分別于光療前、光療20次后檢測(cè)患者外周血中CD4+CCR5+和CD4+CD30+細(xì)胞的表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)50例健康人作為對(duì)照組。結(jié)果治療前銀屑病組CCR5+細(xì)胞的百分比均高于對(duì)照組（P＜0.05）；CD30+細(xì)胞的百分比較對(duì)照組明顯降低（P＜0.05）?；颊吖獐熀蟮玫矫黠@改善（P＜0.01）。結(jié)論NB-UVB可有效調(diào)節(jié)銀屑病患者Th1/Th2表達(dá)失衡，這可能是NB-UVB治療銀屑病免疫學(xué)機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：窄譜中波紫外線；銀屑??；T輔助性細(xì)胞1；T輔助性細(xì)胞2

銀屑病是一種復(fù)發(fā)性自身免疫性疾病，大量的研究提示，CD4+T細(xì)胞即T輔助性細(xì)胞（He1per T ce11s，Th）在銀屑病的發(fā)病中起著重要作用。在不同的條件下，初始CD4+T淋巴細(xì)胞可分化成不同T淋巴細(xì)胞亞群，包括Th1/Th2型、輔助性T細(xì)胞17（T he1per 17 ce11s，Th17）/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regu1atory T ce11，Treg）等，發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。近年來隨著對(duì)輔助性T淋巴細(xì)胞（Th細(xì)胞）研究的深入，發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞向不同的方向極化時(shí)細(xì)胞表達(dá)不同的表面分子。其中CCR5和CD30分別被認(rèn)為是Th1和Th2細(xì)胞的表面特異標(biāo)志之一。許多學(xué)者認(rèn)為銀屑病的發(fā)病與Th1優(yōu)勢(shì)應(yīng)答緊密相關(guān)［1］。窄譜中波紫外線（Narrow-bandu1travio1et B，NB-UVB）治療銀屑病臨床療效較好，但其作用機(jī)制仍未完全明了。本研究以Th1、Th2為觀察指標(biāo)，分別對(duì)銀屑病患者接受NB-UVB光療前、后Th1、Th2變化情況進(jìn)行檢測(cè)，探討NB-UVB治療銀屑病的免疫學(xué)機(jī)制。

1　資料與方法

1.1病例資料55例尋常性銀屑病患者均來自2013年6月—2014年10月中山市人民醫(yī)院和南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院皮膚科門診和住院患者。其中男31例，女24例；年齡21～45歲，平均（31.0±3.5）歲；病程1.5～10年。50例健康體檢人員作為正常對(duì)照組，其中男27例，女23例；年齡19～47歲，平均（32.0±3.0）歲。2組研究對(duì)象在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有研究對(duì)象對(duì)實(shí)驗(yàn)知情同意并簽署知情同意書，實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2排除標(biāo)準(zhǔn)患者近1個(gè)月內(nèi)接受過系統(tǒng)性抗銀屑病治療或半個(gè)月內(nèi)局部應(yīng)用相關(guān)藥物治療者；妊娠期、哺乳期患者；伴有其他嚴(yán)重性系統(tǒng)性疾病或皮膚疾?。挥凶贤饩€照射禁忌證人群。

1.3光療方法使用窄譜中波紫外線光療儀（德國(guó)沃曼公司，波長(zhǎng)為310～315nm、峰值311nm）進(jìn)行治療。首次光療劑量為70%的最小紅斑量（Minima1 erythema doses，MED），隔日1次；后續(xù)光療劑量在前次劑量基礎(chǔ)上按局部皮膚反應(yīng)依次遞增10%～20%，至光療區(qū)皮膚出現(xiàn)淡紅斑時(shí)則維持該劑量進(jìn)行治療。治療過程中若出現(xiàn)疼痛性紅斑或水泡時(shí)應(yīng)停止光照，至皮損恢復(fù)后再繼續(xù)照射，劑量為前次劑量的50%。20次為1個(gè)療程。

1.4銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)定分別于光療前、光療20次后計(jì)算PASI評(píng)分，病情改善率（%）=［（治療前PASI評(píng)分-治療后PASI評(píng)分）/治療前PASI評(píng)分］×100%。臨床療效分為治愈（病情改善率≥90%）、顯效（病情改善率在60%～89%）、好轉(zhuǎn)（病情改善率在25%～59%）和無效（病情改善率＜25%）4個(gè)等級(jí)。有效率=［（治愈+顯效）/總治療人數(shù)］×100%。

1.5CD4+CCR5+和CD4+CD30+的檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管分別加入100μL經(jīng)EDTA-K2抗凝的清晨空腹靜脈血。第1支測(cè)定管加人10μLPE-小鼠抗人CCR5及20μLFITC-小鼠抗人CD4，第2支測(cè)定管加入20μLPE-小鼠抗人CD30及20μLFITC-小鼠抗人CD4，非特異對(duì)照管加入FITC-小鼠IgG1/PE-小鼠IgG；對(duì)照管加人FITC-小鼠抗人CD4/PE-小鼠IgG。室溫避光孵育25min，加入溶血素3mL混勻，待紅細(xì)胞溶解后，離心2次，2000r/min離心5min，棄上清，加入200μLPBS重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。應(yīng)用Ce11Quest 3.1軟件，以非特異對(duì)照調(diào)整電壓：使FSC/SSC圖像中大部分分析細(xì)胞位于中央，F(xiàn)L1、FL2的熒光圖主峰在101內(nèi)（FL1代表FITC染色，F(xiàn)L2代表PE染色）。分別以FITC-CD4或PE-CD30單染色調(diào)FL1～FL2的電壓補(bǔ)償。每次獲取20000個(gè)細(xì)胞，在淋巴細(xì)胞門內(nèi)分析陽性細(xì)胞的百分比以及PE-CCR5和PE-CD30的平均熒光強(qiáng)度（MFI）。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包分析，各項(xiàng)指標(biāo)以中位數(shù)和95%的可信區(qū)間表示；組間比較用Mann-Whitney檢驗(yàn)；用Spearman秩相關(guān)建立MFI與PASI之間的關(guān)系；光療前后比較采用t檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1光療前后PASI積分比較患者光療20次后PASI（10.21±1.10）與光療前（25.31±6.93）相比顯著降低，癥狀明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其中治愈8例，顯效35例，好轉(zhuǎn)12例，無效0例，有效率為78.2%。

2.2光療前后Th1/Th2比較光療前銀屑病患者外周血T淋巴細(xì)胞CD4+CCR5+的表達(dá)百分比明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且CCR5+MFI與PASI呈正相關(guān)（r=0.401，P＜0.05）；CD4+CD30+細(xì)胞在銀屑病患者中表達(dá)較對(duì)照組降低（P＜0.05），CD4+CD30+MFI與PASI無相關(guān)性（r=-0.237，P＞0.05）。光療后銀屑病患者CD4+CCR5+、CD4+CD30+表達(dá)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1　銀屑病患者光療前后CD4+CCR5+、CD4+CD30+表達(dá)與對(duì)照組比較

2.3不良反應(yīng)所有研究對(duì)象在治療中未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。

3　討論

銀屑病是在遺傳背景下CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，起病涉及到感染、精神、環(huán)境等多種因素參與。趨化性細(xì)胞因子是細(xì)胞因子的一個(gè)超家族，主要通過與趨化因子的受體結(jié)合發(fā)生作用。趨化因子受體屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，含有7個(gè)疏水性穿膜區(qū)段的鏈?zhǔn)荏w，其主要作用是傳導(dǎo)信號(hào)、決定細(xì)胞定向游走和歸巢，尤其是在炎癥時(shí)。CCR5、CD30是趨化因子受體中兩個(gè)重要的成員。CCR5是β趨化因子受體超家族，是3種趨化因子（RANTES、MIP-1a、MIP-1β）的受體，在體內(nèi)的正常功能是與趨化因子結(jié)合，通過和異源三聚體G蛋白的結(jié)合來傳遞信息，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞向趨化因子的來源部位移動(dòng)，其在許多炎癥區(qū)域均有表達(dá)。Th1和Th2細(xì)胞通過表達(dá)不同的趨化因子受體，使效應(yīng)細(xì)胞移行于相應(yīng)的炎癥部位并選擇性調(diào)節(jié)T細(xì)胞依賴的免疫反應(yīng)。如在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中，CCR5在外周血T細(xì)胞上的表達(dá)明顯高于正常人［2］，表明CCR5的表達(dá)在Th1型自身免疫性疾病的發(fā)生中有著非常重要的作用。CD30與Th2細(xì)胞的功能及Th2反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病有密切關(guān)系［3］。本研究顯示，CCR5在銀屑病患者外周T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)高于正常人，CD30表達(dá)降低，提示在銀屑病病人中Th1細(xì)胞活性處于優(yōu)勢(shì)，而Th2細(xì)胞活性處于弱勢(shì)，說明銀屑病患者以細(xì)胞免疫異常為主，而體液免疫受到抑制。由此推測(cè)，CD30、CCR5的表達(dá)不能平行上調(diào)是導(dǎo)致銀屑病患者Th1/Th2失衡的機(jī)制之一，從而導(dǎo)致了銀屑病患者Th1的優(yōu)勢(shì)表達(dá)。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)CCR5+、MFI與PASI呈正相關(guān)，反映CCR5的檢測(cè)對(duì)銀屑病病情判斷和機(jī)體免疫狀態(tài)有一定輔助診斷價(jià)值。

NB-UVB治療銀屑病安全性好、不良反應(yīng)少、應(yīng)用方便，在臨床治療中得到醫(yī)生和患者的一致青睞。筆者采用NB-UVB治療銀屑病臨床研究顯示，NB-UVB治療尋常性銀屑病有效率達(dá)78.2%，療效較好；治療中未出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，患者依從性好。本研究對(duì)經(jīng)過NB-UVB治療前、后的銀屑病患者外周血中CCR5、CD30的水平進(jìn)行了檢測(cè)和分析，結(jié)果顯示光療后患者外周血中CCR5、CD30表達(dá)均得到明顯改善，光療后與對(duì)照組比較無明顯差異（P＞0.05）。提示通過糾正患者外周血中CCR5、CD30表達(dá)失常是NB-UVB治療銀屑病的機(jī)制之一。筆者認(rèn)為，針對(duì)銀屑病發(fā)病中Th1功能的亢進(jìn)，CCR5、CD30表達(dá)的異常為其免疫治療提供了新思路。阻斷CCR5的表達(dá)和結(jié)合，抑制Th1細(xì)胞向炎癥區(qū)域的遷移，從而減輕過度有害的Th1型反應(yīng)，在細(xì)胞分化的上游環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，以恢復(fù)Th1/Th2的平衡，很可能是治療銀屑病的一種更好的策略。相信隨著對(duì)CCR5、CD30研究不斷深入，不僅為銀屑病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制的研究開辟新思路，而且也為臨床治療銀屑病提供新方向。

參考文獻(xiàn)：

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·論著·

資助項(xiàng)目：廣東省中醫(yī)藥局（20131075），廣東省衛(wèi)計(jì)委（A2014883）

Effects of Narrow-band Ultraviolet B Phototherapy on Th1/Th2 in Patients with Psoriasis Vulgaris

Chen Jinguang1，2，Wu Haolang3
1. Central Hospital of Taizhou Enze Medical Center in Zhejiang Province，Taizhoiu 318000，China；2.Zhongshan People＇s Hospital of Guangdong Province，Zhongshan 528403，China；3. Affiliated Xiaolan People's Hospital of South Medical University，Zhongshan 528415，China

Abstract：Objective In order to study the reba1ance of Th1/Th2 in patients with psoriasis vu1garis who received the narrow-band u1travio1et B（NB-UVB）therapy，and to exp1ore the mechanism of u1travio1et therapy in psoriasis with NB-UVB. Methods 55 patients were treated with NB-UVB radiation on1y. CD4+CCR5+and CD4+CD30+Treg were measured by f1ow cytometric ana1ysis before and after 20 times in patients who were treated with NB-UVB radiation. 50 hea1thy peop1e were enro11ed as contro1s. Results The proportion of CCR5+ce11s were significant1y increased in psoriasis（P＜0.05），compared with contro1s. The 1eve1 of CD30+in patients was siganificant1y decreased（P＜0.05）. After treated with NB-UVB，Th1/Th2 expression was changed（P＜0.01）. Conclusion Radiation of NB-UVB works we11 on Th1/Th2 in patients，and it may take effect through the ce11 immunity.

Key words：Narrow-band u1travio1et B；Psoriasis；Th1；Th2

收稿日期：（2015-01-10）

通信作者：陳晉廣，E-mai1：tong1y0422@126.com

中圖分類號(hào)：R758.63

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-0709（2016）02-0078-03